Способ получения рибонуклеозид-5монофосфатов Советский патент 1976 года по МПК C07H19/02 

1

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения соединений, которые находят применение в биохимии.

Известен снособ получения рибонуклеозид5-монофосфатов фосфорилированнем соответствуюндих рибонуклеозидов с предварительной защитой 2, З-цисдиольных гндроксильных групп рибонуклеозидов, не участвующих в образовании фосфодиэфирных связей. Чагде всего для этих целей используют 2, З-О-алкнлиденнуклеозиды.

Однако известный способ обладает рядом существенных недостатков, основным из которых является трудность удаления защитной группировки, проводимой в жестких условиях, приводящих к получению нобочпых веществ. Вследствие этого требуется дополнительная очистка целевого продукта.

Предлагаемый способ позволяет упростить технологию получения целевого продукта за счет использования в качестве промежуточных соединений арнлборных эфиров пуклеозидов.

Описываемый способ получения рибонуклеозид-5-монофосфатов заключается в том, что рибонуклеозиды обрабатывают арилборной кислотой в нолярных растворителях, например дноксане, пиридине или днметилформамиде, после чего полученные арнлборные эфиры подвергают фосфорилирова|шю, удалению защитНОИ группы водой и выделенню целевого продукта известным методом.

Как правило, в качестве фосфорилирующих агентов используют Р-дифеннл-Р -морфолидопирофосфохлорид в диоксане или р-циаиэтилфосфат или 2-цианэтилфосфат в пиридине.

Пример 1. К раствору 5,5 г безводной дифенилфосфорной кислоты в 40 мл диоксана прибавляют при размешивании 4,5 г морфолидофосфодихлорида и 3,2 мл 2,6-лутидина. Спустя 15 мин добавляют фенилборный эфнр аденозина в 12 мл диоксана (получен нагреванием смеси 6,2 г аденозина и 3,06 г ф|енилбориой кислоты в дноксане; может быть выделен в аналитически чистом виде с выходом 95% последующей упаркой диоксана и добавлением 10-кратного количества серного эфира) и смесь оставляют при перемешиваиин при 18-20°С на 48 час. В этих условнях реакция сопровождается количественным и избирательным фосфорилированнем нервичной гидроксильной группы нуклеозидов (хроматографическнй контроль пробы после предварительного гидролиза в системе: этанол - 0,5Л1 ацетат аммония, насыщенный бурой 5:2). Затем добавляют 300 мл воды (рИ раствора 1,6-2,0) Н размешивают 4 час прн 30-40°С до полного гидролиза Р-N и Р-С1-связей образующегося при фосфорилировании аденозин-5 фосфоморфюлидхлорида. (Анализ т. с.

хроматографией в системе: ацетон - /г-бутанол - Н2О 8:1:1). Полученный раствор нейтрализуют 3%-ным раствором аммиака до рН 6,0 и помещают при 5-8°С на охлаждаемую колонку со смолой КУ-2 (Н+) (6,0X X 5,30). Колонку промывают водой от примесей фосфорной, дифенилфосфорной н фенилборной кислот. Аденозин-5-монофосфат злюируют в виде аммонийной соли 1%-ным раствором аммиака. Выход 75% (спектрофотометрическое измерение). Раствор аммонийной соли упаривают до концентрации нуклеотидного материала 15-20% и подкисляют 10%-ный соляной кислотой до рН 1,8. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровывают, промывают водой, спиртом, высушивают в вакууме при 40- 45°С. Получают около 3 г (58-60%) аденозин-5-монофосфата; содержание основного вещества 98,5-100%; примеси исходного нуклеозида и изомерных нуклеозид моно- и дифосфатон отсутствуют {хроматографический и электрофоретический контроль); примесь РО4 и С1-ионов не превышает 0,1%.

Пример 2. К раствору 1,25 г дифенилфосфорной кислоты в 10 мл диоксана прибавляют 1,03 г морфолидофосфодихлорида и 0,7 мл 2,6лутидина. Через 15 мин добавляют 1,3 г /г-толилборного эфира аденозина (получен из 1,04 г аденозина и 0,54 г п-толилборной кислоты аналогично эфиру фенилборной кислоты; нри выделении в чистом виде выход составил 91%) и оставляют при перемешивании и 18- 20°С на 48 час (контроль окончания реакции хроматографический). Обработка продукта реакции аналогична примеру 1. Выход аденозин-5-монофосфата составляет 55%. Содержание основного вещества 98,5%.

Формула изобретения

Способ получения рибонуклеозид-5-моиофосфатов фосфорилированием соответствующих рибоиуклеозидов с предварительной защитой гидроксильных групп и последующим выделением целевого продукта известным способом, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, рибонуклеозиды обрабатывают арилборной кислотой в полярных растворителях, например диоксане, пиридине, или диметилформамиде, после чего полученные арилборные эфиры подвергают фосфорилированию с последующим удалением защитной группы обработкой водой.