Способ получения нуклеозид-5-диили тирфосфатов Советский патент 1978 года по МПК C07H19/04 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИД-5-ДИ- ИЛИ ТРИФОСФАТОВ

тельно очищают осаждением деред фосфорйлированием, что удлиняет процесс и значительно усложняет его технологию.

С целью упрощения процесса предлагается способ получения нуклеозид-5-ди- или -трифосфатов, в котором ацилированный нуклеозид-5-монофосфат в абсолютном пиридине последовательно обрабатывают полистиролсульфохлоридом и амином с последующим снятием адильной защиты. При этом обычно используют полистиролсульфохлорид, предварительно набухщий в пиридине в течение 3- 6 ч. Полученный нуклеозид-5-фосфамид обрабатывают солью орто- или пирофосфорной кислоты в среде органического растворителя при 35-40°С.

В качестве органического растворителя обычно используют абсолютный диметилформамид.

Полистиролсульфохлорид получают из сополимера стирола с дивинилбензолом (4% дивинилбензола, 0,6% изооктана).

Пример 1. Синтез уридин-5-дифосфата.

1 г (1,6 ммоль; нуклеотидное содержание 78%) 2,3-О-ацетилуридин-5-монофосфата и 6 г полистиролсульфохлорида, предварительно набухшего в течение 5 ч при комнатной температуре в 80 мл абсолютного пиридина, встряхивают 14 ч при комнатной температуре. Полистиролсульфохлорид отделяют фильтрованием, промывают 50 мл абсолютного пиридина (5X10 мл), а маточный раствор добавляют в 20 мл очищенного пиперидина. Через 20 мин смесь упаривают до масла,, которое упаривают последовательно с абсолютным пиридином (3x15 мл) и с абсолютнЬтм бензолом (5X15 мл). Полученный стекловидный остаток вводят в реакцию с трибутиламмонийной солью ортофосфорной кислоты (8 ммоль) в 16 мл абсолютного диметилформамида, смесь термостатируют при 37°С 18 ч, затем обрабатывают 20 мл 5%-ного водного раствора аммиака для снятия ацетильной защиты. Через 1,5 ч аммиак удаляют упариванием на ротационном испарителе и смесь хроматографируют на анионообменной смоле, ДЭАЭ-молселекте-А-25 в линейном градиенте кондентрадий бикарбоната аммония (О-0,5 моля). Фракции основного пика объединяют, концентрируют, бикарбонат аммония удаляют упариванием с водой. Полученный остаток растворяют в 50 мл воды, лиофилизуют и получают 0,55 г (75%) уридин-5дифосфата, нуклеотидное содержание 98% (1,2 ммоль).

УФ-спектр: Ямакс 261 Н|л, Ямин 230 нц. Продукт хроматографически однородный. По данным бумажной хроматографии (БХ) в системе этанол - 1 М раствор ацетата аммония (5 : 2) одно пятно Rf 0,15. Пример 2. Синтез уридин-5-дифосфата. Аналогично примеру 1, но применяя вместо пиперидина 20 мл очищенного морфолина, из 1 г (нуклеотидное содержание 78%; 1,6 ммоль) 2,3-О-ацетилуридин-5-монофосфата получают 0,53 г (70%) уридин-5-дифосфата с нуклеотидньщ содержанием 92%. По данным БХ продукт хроматографически однородный.

5 Пример 3. Синтез тимидин-5-трифосфата.

Аналогично примеру 1, но применяя вместо 2,3-О-адетилуридин-5-монофосфата З-О-адетилтимидин-5-монофосфат, а вместо трибу10 тиламмонийной соли ортофосфорной кислоты используя ту же соль пирофосфорной кислоты, из 1 г 3-О-ацетилтимидин-5-монофосфата (нуклеотидное содержание 89%; 2,0 ммоль) получают 0,86 г (66%) тимидин-5-трифосфа15 та с нуклеотидным содержанием 93%. УФ-спектр: Ямакс 267 Hja. По данным БХ в системе изомасляная кислота - концентрированный аммиак - вода (66 : 1 : 3) продукт содержит одно пятно с

0 ( 0,15, соответствующее тимидин-5-трифосфату и следы тимидин-5-дифосфата (Rf 0,25).

В предложенном способе синтез нуклеозид5-ди- или -трифосфатов проводят без ДЦК,

что значительно упрощает процесс и увеличи5 вает его безопасность, так как ДЦК обладает сильно выраженными аллергенными свойствами, особенно опасны его пары и растворы. При получении целевых продуктов но предлагаемому спосо,бу отпадает необходимость

0 выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки промежуточного соединения, что значительно упрощает процесс, делает его более технологичным. Снижается также температура проведения процесса на стадии образования промежуточного нуклеозид-5-фосфамида до комнатной.

Таким образом целевой способ значительно сокращает количество операций в процессе синтеза нуклеозид-5-ди- или -трифосфатов.

Формула изобретения

1.Способ получения нуклеозид-5-ди- или -трифосфатов, включающий получение нуклеозид-5-фосфамида, обработку его солью ор5 то- или пирофосфорной кислоты в среде органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, промежуточный нуклеозид-5-фосфамид получают путем последовательного взаимодействия

0 ацилированного нуклеозид-5-монофосфата в среде абсолютного пиридина с полистиролсульфохлоридом и амином с последующим снятием ацильпой защиты.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, 5 что используют полистиролсульфохлорид,

предварительно набухщий в пиридине в течение 3-6 ч.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку нуклеозид-5-фосфамида проо водят в среде абсолютного диметилформамида при 35-40°.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент США № 3534017, кл. 260-211.5, опублик. 13.10.70. 5 2. Moffat J. G. and Khorana H. G. Synthesis and Some reactionts of nucleotide-5-phospho6zomorpholidates. - «J. Amer. Chem. Soc., 1961, 83, c. 649.