Производные дицитидин-5'-пирофосфата, проявляющие противовирусную активность Советский патент 1993 года по МПК C07H21/00 A61K31/7084 A61P31/12 

Изобретение относится к новым произодным класса нуклеиновых кислот, общей ормулы:

Э)$UU

NH,7 t

Н

f

он

о « -О-К

0

о

I

К-сн, 1

Р-О-Т,

ила

в

I

ОН

обладающих противовирусной активностью.

В современной медицине известны ингибиторы вирусов, а именно производные . 2-ангидро-1-()-арабииофуранозил)-цитозина, обладающие вирицидной и цитоксической активностью. Данных о том, что упомянутые производные обладают ингибирующей активностью в отношений вирусов герпеса и адено. не имеется.

Известны также производные 2,2 -цик- лоцитидина формулы

$$$W

где , Н или НзРОз.

или Н2РОг.

или ОН, . СНз. или Hal, обладающие противоопухолевой и противовирусной активностью. Данных об активности в отношении вирусов герпеса и адено не имеется.

Целью изобретения является расширение ассортимента противовирусных препаратов, проявляющих ингибирующее действие в отношении вирусов герпеса и адено.

Поставленная цепь достигается путем синтеза производных дицитидин-5-пирофосфата, основанного на известной реакции конденсации нуклеозид-5-монофосфата в присутствии дициклогексилкарбодиимида.

Настоящий способ получения производных дицитидин-5-пирофосфата заключается в том. что безводный О ,2 ииклоцитидин-5-монофосфат или безводная пиридиниевая соль 2 3 N-триацетил а.раб и нофу ран ози л цитозин-5-монофосфат подвергаются конденсации а пиридине в присутствии дициклогексилкарбодиимида с последующим выделением целевого продукта путем обработки реакционной смеси

эфиром, водой, и хроматографическим разелением на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой. П р и м е р 1. Р Р -ди{0,2 -циклоцитиин-5)-пирофосфат,

К навеске О ,2 -циклоцитидин-5-монофосфата (0,2 г., 0,65 ммоль), высушенной париванием с пиридином (3x20 мл), приливают 4 мл безводного пиридина, 5 мл иметилформамида и прибавляют дициклогексилкарбодиимид 0,9 г (4,3 ммоль). Реакционную смесь выдерживают 10 сут при комнатной температуре и выливают в эфир 0,5 л). Эфир декантируют. К остатку припивают 5 мл воды и экстрагируют эфиром. Водный слой отделяют и наносят на колонку с

ДЕАЕ-целлюлозой ДЕ-32 (АсО-, 1,6x45 см),

элюируют водой. Получают 0,075 г (39%) Р,

Р -ди(0 -, 2 -циклоцитидин-5 пирофосфата,

Т.пл.227°С(сразл,), Rf 0,19.

УФ: ЯНаО (нм) (к-10): 232 (14,7), 263

(16,4)..

П р и м е р 2. Р .Р -дЦарабинофуранозилцитозин-5)-пирофосфат. Пиридиниевую соль 2 3 Ы-триацетиларабинофуранозил цитозин-5-монофосфата 0,53 г (1 ммоль) высушивают упариванием с пиридином (3x20 мл), растворяют в 10 мл безводного пиридина, прибавляют 1,2 г (5.8 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и оставляют на 10 дней при комнатной температуре. К реакционной смеси приливают 20мл воды, экстрагируют эфиром, «водный рйствор упаривают. Для удаления ацетильных групп остаток обрабатывают водным аммиаком (25% , 72

ч при 20°С). Упаривают, наносят на колонку

с ДЕАЕ-сефадексом А-25 (НСОз, 1.8x30 см)

и хроматогафируют в линейном градиенте

концентрации триэтиламмонийбикарбоната (1л 0.05 М - 1 л 0.2 М ТЕАБ). Водный раствор упаривают с пиридином и пропускают через колонку с ионообменной смолой Дауэкса 50x12 (Н -форма). Получают 0.26 г (83%) (араб1/1нофуранозилцитозин-5 )-пирофосфата. Т.пл, 208°С (с разл.). Rf0.12

УФ: Я Н20(нм)( 275(17.5). Антигерпетическое действие производных дицитидин-5-пирофосфата оценивалось по снижению цитопатогенной активности вируса, репродуцированного в присутствии соединений в культуре ткани фибробластов куриных эморионов (ФЭК). Активность отношении аденовируса 3 типа также оценивалась по снижению цитопатогенной ,эктивности вируса, репродуцированного в культуре ткани пассируемых кожно-мышечных клеток эмбриона человек.ч в присутствии соединений.

Максимально переносимая концентрация испытуемых соединений в культуре ткани ФЭК составляла 1600 мкг/мл (табл.1). (0,2 -циклоцитидин-5)-пирофосфат в концентрации 400 мкг/мл вызывал снижение титра вируса на 3.0 Ig ТПД50. Концентрации значительно более низкие (100. 50, 25. 10, 5 и 2) также вызывали ингибицию вируса герпеса на 4.5-2;0 tg. Минимально действующей была концентрация в 1 мкг/мл, которая вызывала снижение титра вируса на 2.0 Ig. Химиотерапевтический индекс (0.2-циклоцитидин-5)-пирофосфата составлял 1600.

Р ,Р -ди(арабинофуранозилцитоэин-5)пирофосфат в концентрации400 мкг/мл вызьгеал снижение титра вируса на 3.5 Ig. В концентрациях 100. 50,25,10 и 5 снижение титра вируса составляло 3.5-2.0 Ig. Минимально действующей у этого вещества была концентрация в 2,0 мкг/мл. Химиотерапевтический индекс (арабинофуранозилцитозин-5)-пирофосфата был равен 800.

В табл.2 представлены данные изучения производных дицитидин-5-пирофосфатэ в отношении аденовируса 3 типа. Оба производных дицитидинтБ- пирофосфата

Влияние производных дицитидин-5 -пирофосфата на инфекционную активность вируса герпроявили выраженное антивирусное действие. Так. Р .Р -ди(0.2 -циклоцитидин-5)пирофосфат в концентрации 400 мкг/мл вызывал снижение титра вируса на 2.6 Ig. 8 концентрациях 200. 100 и 50 мкг/мл титр вируса был снижен на 2-1.66 Ig ТПДзо. Минимально действующая концентрация была равна 25 мкг/мл, В этой концентрации отмечалось снижение титра вируса на 1.33 |q. Химиотерапевтический индекс Р .Р ди(арабинофуранозилцИтозин-5)-пирофос фата был равен 32.

Представленные данные свидетельствуют о том. что производные дицитидин-5 -пирофосфата являются высокоактивными веществами а отношении вируса герпеса и аденовируса 3 типа.

Предлагаемые вещества могут быть использованы в экспериментальных исследованиях для лечения аденовирусных и герпетических инфекций.

(56) Патент Великобритании Nf1422214.кл.С 2 С. опублик. 1976.

Патент Великобритании Ne 1386334. кл. С 2 р. опубл. 1975.

1зсоЬ Т.М.. Khorana H.G. Polynucleotides XXX. J.Am.Chem.Soc. 86(8). (1964).

Т а б ли ц а 1 песа .

Примечание: титр вируса 4.5-3.5 Ig ТПДяп.

Влияние производных дицитидин-5-пирофосфата на инфекционную активность

аденовируса 3 типа

Та6лица2

Примечание: титр вируса 4.33-3.5 Ig ТГТДзо.

Формул а изобретенияили

Производные дицитидин-5-пирофосфата формулы

где

мипроявляющие

противовирусную активi HOCTI.