Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению нового штамма, продуцента индуцибельной L-орнитиндекарбоксилазы.
Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента индуцибельной L-орнитиндекарбоксилазы (ОДК), синтезирующего ОДК с наиболее высокой активностью.
Штамм Vibrio harveyi ВКМВ-1626Л (1175) выделен из моллюска Nerita
albicilla в тропическом районе Тихого океана и имеет следуххцие характеристики.
Морфологические признаки: правильные или слегка изогнутые палочки размером 0,5-0,8 х 1,4-2,6 мкм. Капсул, эндоспор или микроцист не образуют. Грамотрицательны. В жидкой среде подвижны за счет наличия 1 оче- хленного полярного жгутика.
Культуральные свойства: на агари- яованной среде Егоровой и на питателном агаре из гидролизата кильки с 3%-ным NaCl после 24 ч роста при образуют колонии диаметром 1-2 мм. Колонии желтовато-коричневые прозрачные, гладкие, блестящие с правильными краями. На агаризованном мясопептонном бульоне с 3%-ным NaCl колонии круглые, прозрачные, гладкие, блестящие с ровными краями. Диаметр колонии односуточной культуры - 2- 3 мм.
Физиологические свойства: штамм является факультативным анаэробом. Оптимальная температура роста 30 - . Культура не растет при 4°С и 45°С. Восстанавливает нитраты до нитритов. Реакция на оксидазу положительная. Выделяет хитиназу, амилазу, липазу, желатиназу. Не способен накапливать поли р -оксибутират. Усваивает глюкозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннит, глицерин. Усваивает пептон, дрожжевой экстракт, а также соли аммония. Не нуждается в органических факторах роста. Содерж11Т 46 мол.% ГЦ-пар в ДНК. Хемоорганотроф. Для роста и люминесценции необходимо присутствие в среде- ионон нятрия. Оптимальная концентрация хлористого натрии 2-3%.
Признаки штамма устойчивы. Штамм iie патогенен.
Культура хорошо сохраняется на агаризованной сред1; Егоровой под «азелиновым маслом в течение 2-3 лет (больпше сроки для данного lie проверялись) .
Пример. Для 1юлучения биомассы Vibrio harveyi 1175 штамм выращи- E,4i3T F лабораторных колбах емкос:тью 50G мл, и которы наливают 400 мл срс дм 1 горог1ой следующего состава, г/х:: NaCL 30; КН.РС4 1; Мр,Ь04 -0 0,5; пептон 10; рыбная вытяжка
500 мл; водопроводная вода до
1000 мл; L-орнитин НС1 8; рН среды
6±0,2. Инокулят - культура 17-часового возраста в той же среде при в термостате. Засевают среду 5%-ного инокулята.
После 5 ч роста биомассу отделяют центрифугированием при 4000 об/мин,
промывают 3%-ным раствором хлористого натрия и заливают 1/15 М фосфатного буфера рН 5,0, охлажденного до 4 С. В экстракте определяют L-орни- тиндекарбоксилазную активность манометрическим методом на аппарате Варбурга.
За единицу ОДК активности принимают такое количество фермента, которое при 37 С и рН реакционной
смеси 5,0 через 1 мин от субстрата (0,05 м) отщепляет 1 мкмоль СО. В таблице приведены данные об L-орнитиндекарбоксилазной активности штамма Vibrio harveyi 1175 и известного Escherichia coli UW 44.
Как видно из таблиць, предлагаемый штамм Vibrio harveyi 1175 отличается от известного в 2,5 раза большей активностью в 1 мл среды ы 1,5 раза
большей специфической активностью. Кроме того, время культивирования сокращается в 2 ч, а температура выращивания снижается на 1°. Данное преимущество может существенно уменьщить себестоимость ферментного препарата L-орнитиндекарбоксилазы при его изготовлении.Ферментньй препарат L-орнитиндекарбоксилазы может быть использован и при определении L-орнитина, а иммобилизированный - для получения путресцина из L-орнитина.
Формула изобретения
Штамм бактерий Vibrio harveyi ВКМ B-1626D - продуцент индуцибель- ной L-орнитиндекарбоксилазы.
5 1493669 . 6
Рост и L-орнитиндекарбоксилазная активность штаммов Escherichia coli UW 44 и Vibrio harveyi 1175
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм бактерий VIвRIо наRVеYI - продуцент индуцибельной L-лизиндекарбоксилазы | 1989 |
|
SU1622394A1 |
| Штамм бактерий РнотовастеRIUм рноSрноRеUм - продуцент L - аргининдекарбоксилазы | 1989 |
|
SU1678834A1 |
| Штамм бактерий VIвRIо наRVеYI - продуцент рестриктазы Vна 464 I | 1991 |
|
SU1806192A3 |
| СПОСОБ ЗАЩИТЫ ТЕХНИЧЕСКИХ СМАЗОК ОТ ВОЗДЕЙСТВИЯ БАКТЕРИЙ | 1998 |
|
RU2143200C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SP. ПРОДУЦЕНТ БИОЦИДА ТРОПИЧЕСКИХ МИКРОМИЦЕТОВ - ДЕСТРУКТОРОВ ТЕХНИЧЕСКИХ МАСЕЛ | 1998 |
|
RU2141523C1 |
| Штамм вкмв 548-продуцент фермента глутаминазы- аспарагиназы | 1977 |
|
SU739096A1 |
| ШТАММ БАКТЕРИИ DELEYA AQUAMARINA - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ, УЗНАЮЩЕЙ И РАСЩЕПЛЯЮЩЕЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ 5'-GTGCAC-3' | 1996 |
|
RU2105811C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ KLEBSIELLA AZEANAE - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ KAZ 48 KI | 1993 |
|
RU2044055C1 |
| РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pEstPc, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД СО СВОЙСТВАМИ ЭСТЕРАЗЫ Psychrobacter cryohalolentis K5, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА СО СВОЙСТВАМИ ЭСТЕРАЗЫ Psychrobacter cryohalolentis K5 | 2011 |
|
RU2478708C1 |
| Набор штаммов бактерий для обучения вопросам микробиологии и методам лабораторной диагностики холеры | 2019 |
|
RU2743454C1 |
Изобретение относится к биотехнологии и касается получения штамма, обладающего более высокой индуцибельной L - орнитиндекарбоксилазной активностью. Цель изобретения - получение нового штамма-продуцента L -орнитиндекарбоксилазы (ОДК), синтезирующего ОДК с наиболее высокой активностью. Штамм VIBRIO HARVEYI ВКМВ-1626D (1175) выделен из моллюска NERITA ALBICILLA в тропическом районе Тихого Океана. Активность индуцибельной L-орнитиндекарбоксилазы: 4,5 ед/мг сухой бактериальной биомассы и 14,7 ед/мг белка. Штамм не патогенный, сохраняет активность при хранении в лиофилизированном состоянии и под вазелиновым маслом. 1 табл.
7
3
37 30
0,93 9,3 0,1 4,5+0,2 2,5 14,7 0,17
