Способ определения наличия ингибирующих веществ в молоке Советский патент 1989 года по МПК G01N33/04 

Изобретение относится к молочной и ветеринарной промьпиленности и может быть использовано при ветсанэкс- пертизе молока, а также при контроле качества молока на предприятиях молочной промьппленности.

Целью изобретения является ускорение процесса и повьш1ение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для исследований готовят рабочий раствор на дистиллированной воде, содержащей 0,001% тетразолиевого синего и 0,4% пептона. Раствор авто- клавируют при 112°С в течение 30 мин. Им можно пользоваться на протяжении месяца при условии хранения в холодильнике при температуре (4-8 С),

В чистые пробирки отмеряют 10 мл исследуемого мо;юка и лыдержикают его в водяной банр при 85...90 С в

течение 10 мин.Затем после снижения температуры до 45°С в каждую пробирку с исследуемым молоком добавляют по 0,3 мл 16-18-часовой культуры (тест-культуры) Streptococcus thermophilus и по 1 мл приготовленного рабочего раствора тетразолиевого синего и пептона (смесь) комнатной температуры. Трехкратным переворачиванием пробирок перемешивают их содержимое. Пробы молока с реактивом и кулы- турой ставят в водную баню при 42- . Время погружения пробирок в водяную баню считают началом реакции. Результаты учитывают через 1 ч 30мин. по изменению цвета молока. Если столбик молока приобрел синий цвет,значит, в молоке не содержится ингибирующих веществ. Белый цвет смеси указывает на наличие ингибиторов в молоке.

Способ основан на взаимодействии фермента культуры микроорганизмов

4а

;о

00

со

4ik

qD

лактатдегидрогеназы, выделяемой ими в процессе дыхания с тетразолиевым синим. При этом молоко, не имеющее ингибиторов, синеет по истечении 1 ч 30 мин. В ходе реакции в молоке не проявляются другие цвета, кроме синего, что упрощает способ и повьшает достоверность результатов.

Поочередное внесение тест-культу ры смеси тетразолиевого синего с пептоном в исследуемую пробу молока перед началом реакции позволяет все реагирующим компонентам (индикатор, тест-культура, ингибитор, если имеется в наличии) контактировать на протяжении всего контрольного времени. Кроме того, такое поочередное внесение компонентов предотвращает такое взаимодействие (индикатор + тест-культура) вне исследуемого молока, какое происходит с метиленовы голубым (прототип), где предварително готовится смесь тест-культуры с индикатором для анализа. Все это существенно влияет на скорость протекания реакции (ускорение процесса) и достоверность результатов.

Окислительно-востановительный потенциал тетразолиевого синего вьше, чем у резазурина и метиленового гу- лубого, что также характеризует более высокую чувствительность индикатора и способа в целом. Так, например, наличие стрептомицина при помощи тетразолиевого синего можно определить в молоке при концентраци его 1 мкг/мл и более, с помощью резазурина - 5 мкг/мл, а с метиленовым голубым - 30-50 мкг/мл.

Концентрация тетразолиевого синего 0,001-0,002% в реагирующей смеси является оптимальной. Увеличение концентрации до 0,()1% ведет к проявлению ингибирующего действия самого индикатора на тест-культуру, что проявляется в постепенном снижении интенсивности окраски реагируе- мой смеси, вплоть до полного отсутствия реакции при концентрации тетрзолиевого синего 0,05%, Использование концентраций индикатора 0,0003- 0,0004-0,0005 и т.д. нецелесообразно по причине того, что интенсивнос окраски при этом хуже, чем при установленных оптимальных значениях. Это объясняется недостаточным количеством индикатора для полного прохождения pe.TKi HM.

Данный способ позволяет определить следующие ингйбирующие вещества:антибиотики (пенициллин, стрептомицин, тетрациклин и др.), консервирующие и дезинфицирующие соединения (формалин, перекись водорода, йодистые и хлорные препараты и др.). Ингйбирующие вещества задерживают размножение в молоке полезной молочнокислой микрофлоры, используемой в виде заквасок при изготовлении молочных продуктов.

Пример 1. В две чистые пробирки отмеряют по 10 мл исследуемого молока. В первую пробирку вносят раствор пенициллина, содержащий 1 ME. Обе пробирки ставят в водяную баню и выдерживают при в течение 10 мин. После остывания молока в про- бирках до 45°С в каждую из них добавляют по 0,3 мл 16-18 часовой культуры Str. thermophilus и по 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4% пептона. Трехкратным перевертьгеанием пробирок перемешивают их содержимое. Затем

0

5

0

5

5

пробирку с приготовленной смесью ставят в водяную баню при 43 С. Время погружения пробирок в водяную баню считают началом анализа. Результаты реакции учитывают через 1 ч 30 мин. В первой пробирке молока (с концентрацией пенициллина 0,1 МЕ/мл) осталось белым, во второй стало синим,

П ример2. В две чистые пробирки отмеряют по 10 мл молока. В обе пробирки вносят по 20 мкг стрептомицина и ставят их в водяную баню при на 10 мин. После охлаждения молока в пробирках до в каждую пробирку добавляют по 0,3 мл тест- культуры Str.thermophilus. В первую пробирку вносят 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4% пептона. Трехкратным перевертыванием пробирок перемешивают содержимое. Затем пробирку с приготовленной смесью ставят в водяную баню при , Через 1 ч 30 мин в первой пробирке учитывают результаты. Молоко осталось белым (концентрация стрептомицина 2 мкг/мл). Во вторую пробирку через 2 ч вносят 1 мл рабочего раствора резазурина (0,03%) и снова ставят ее в водяную баню на 15 мин, после чего учитывают результаты. Во второй пробирке молоко (с концентрацией стрептомицина 2 мкг/мл) приобрело розовьп цвет.

51Д93949 .

Формула изобретенияка,отличающийся тем, что.

Способ определения наличия инги-с целью ускорения способа и повьппебир5 ющих веществ в молоке, предусмат-ния точности, в исследуемую пробу моривающий внесение в исследуемую пробулока Streptococcus therraophilus вномолока тест-культуры Streptococcusсят поочередно со смесью индикатора

thermophilus и индикатора с исполь-и пептона, при этом в качестве индиэованием пептона, полученную смеськатора используют тетразолиевый сиперемешивают, вьщерживают в водянойний с концентрацией 0,001-0,002% в

бане и определяют наличие ингибирую- Qсмеси, а концентрацию пептона устащих веществ по изменению цвета моло-навливают равной 0,3-0,4%,

Изобретение относится к молочной и ветеринарной промышленности и может быть использовано при ветсанэкспертизе молока, а также при контроле качества молока на предприятиях молочной промышленности. Целью изобретения является ускорение процесса и повышение точности. Для определения ингибирующих веществ в молоке в исследуемую пробу молока вносят поочередно STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS и смесь индикатора и пептона. В качестве индикатора используют тетразолиевый синий с концентрацией 0,001-0,002% в смеси, а концентрацию пептона устанавливают 0,3-0,4%.