Способ получения культуры протея в О-форме Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/37 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств.

Пример. Дозецилсульфат натрия (SdS) добавляют в стерильный мясопептонный бульон (МПБ) (рН 7,2- 7,4) в концентрации 5%.

Полученную смесь разливают в пробирки по 8 мл, кипятят трехкратно по 30 мин, сеют Н-формы протея. Для опыта берут 9 роящихся диких штаммов вульгарного и мирабильного протея: 290, 2731, 29, 1481, 737, 610, 1858,

178, 1419, культивируют посевы в течение 28 дней при комнатной температуре. Затем по 0,1 мл бульонной культуры сеют на чашки Петри с 1,5% мясопептонным агаром (рН 7,2-7,4) и ставят в термостат при 37 С на 48 ч. Все 28-дневные бульонные культуры без додецилсульфата натрия (контроль) при посеве на 1,5% мЯсо- пептонный агар растут в виде Н-формы, а большинство культур, выросших в мясопептонном бульоне с 5%-ной концентрацией додецилсульфата натрия на чашках Петри с 1,5%-ньтм мясопептонньм агаром, растут в виде изолированных 0-клонов. В дальнейшем от ка сдого штамма берут по 100 изолироианньгх

4

сл

ОЭ

10

15

3 1495370 -клонов и в течение 8 мес кх периоически пересевают по Шукевичу (через аждые 15 дней), 1 е клоны, которые астут в Виде О-колонии, трехкратно ересевают в нативный нясопептонный бульон, каждый раз проверяя роение на скошенном 1,5%-ном мясопептонном агаре по Чукевичу.

Результаты исследований показали, что 93-95% 1СЛОНОВ штаммов № 1858, 178,737j1419,616 после 2-3-кратного посева по Щукевичу превращаются в Н-формы, 24% - -после 9-10-кратного, а оставшиеся 7% клонов реверсируются в ползучие формы только после 3-кратного культивирования в нативном мясопептонном бульоне, У культур № 290, 29 и 2731 9-10% клонов после 4-5- кратного посева на скошенный мясопеп-20 тонный агар по Щукевичу 15-17% после 9-10-кратного посева по Щукевичу превращаются в исходные Н-формы, Трехкратное культивирование оставшихся изолированных клонов в мясопептон- 25 ном бульоне показало, что у штамма № 290 и 29 28-29% соответственно остаются в виде стабильных 0-форм, у штамма 1 2731 26% клонов остаются в виде стабильных 0-клонов, Дальнейшие наблюдения показали, что большинство клонов стабильно ос аются изолированными и не реверсируются в исходные Н-формы.

Таким образом, культивирование Н-формы протея в течение 29 дней в мясопептонном бульоне, содержащем 5% концентрации додецилсульфата натрия, приводит к образованию стабильных 0-форм клонов этого микроорганизма ,

Далее изучена скорость их размножения. Для этого 2 млрд суспензии суточной агаровой культуры сеют по

30

35

40

0

5

70

0 5

0

5

40

10 млн микр..кл, в пробирки, содержа- DJjie 8 мл МПБ, ставят в термостат на 8 ч при 37 С и определяют оптическую плотность по стандарту мутности. Клетки стабильной 0-формы протея обладают значительно пониженной скоростью размножения по сравнению с исходной Н-формой культуры.

При переходе Н-формы протея в стабильную 0-форму одновременно с утратой их способности к роению происходит и изменение рибосомальных признаков, в частности снижается активность фермента гемолизина, утрачивается устойчивость.к антибиотикам, ослабляется вирулентность. -Стабильность свойств сохраняется в течение 5 лет (срок наблюдения),

Таким образом, использование способа позволяет получать стабильную 0-форму протея. Чувствительность к широко применяемым в практике антибиотикам, авирулентность, не способность продуцировать гемолизин, пониженная скорость размножения дает основание рекомендовать полученные стабильно нероящиеся клоны в качестве живого вакцинного штамма для профилактики протейной инфекции.

Формула изобретения

Способ получения культуры протея в 0-форме путем вьфаш 1вания культуры протея в Н-форме в жидкой питательной среде в присутствии мутагена с после- дуюш:им отбором клонов, отличающийся тем, что, с целью повьг- шения выхода целевого продукта и стабилизации его свойств, вьфащивание осуществляют в течение 28-30 дней в присутствии додецилсульфата натрия в концентрации 4-6% к объему среды.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств. Исходную культуру протея в Н-форме засевают в мясопептонный бульон, в который вносят 4-6% додецилсульфата натрия. Посевы инкубируют в течение 28-30 дней при комнатной температуре. Выделяют клоны, растущие в виде О-волонии. Стабильность приобретенных свойств сохраняется культурой протея в течение 5 лет (срок наблюдения). Частота возникновения мутантов повышается по сравнению с известными способами.