Способ получения производных бензоилмочевины Советский патент 1989 года по МПК C07C127/19 C07D239/34 

Изобретение относится к способу получения производных бензоилмочевины - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых малотоксичных производных бензоилмочевины, обладающих более высокой противоопухолевой активностью.

Пример 1. Синтез соединения 1:М-(2-нитробензоил)-К (5-бром-2- -пиримидинилокси)-З-хлорфенил мочевины.

1. В колбу помещают 7,00 г 5-брсм- -2-хлорпиримидина, 5,19 г 4-амино-2- -хлорфенола, 9,98 г карбоната калия и 70 мл диметилсульфоксида и проводят реакцию в атмосфере азота при в течение 1,5 ч при перемешивании. После окончания реакции продукт вьшивают в воду и экстра1 ируют зтилацетатом. Экстракт промывают водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над безводным сульфатом натрия, а затем чистят хроматографией на колонке силикагеля, посредством чего получасд

S5

ы

31500

ют 6,80 г маслянистого 4-(5-бром-2- -пиримидинилокси)-3-хлоранилина.

2. В колбу помещают раствор, полученный путем растворения 6,80 г 4- -(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина в 30 мл диоксана, и в него добавляют по каплям раствор, получен ньш путем растворения 5,76 г 2-нит- робензоилизоцианата в 30 мл диокса- на, а затем проводят реакцию полученной смеси при комнатной температуре в течение 9 ч. После окончания реакции продукт выливают б воду, подвергают его фильтрованию и промыва- ют горячей водой. Полученные таким образом кристаллы помещают в метанол и перемешивают раствор, затем его фильтруют, получают 9,42 г целевого продукта, имеющего точку плавления 234-2364.Пример 2. Синтез соединения 2:N-(2-нитpoбeнзoил)-N - З-хлор-4- -(5-хлор-2-пиримидинилок си) фенилЗ мочевины.

1.В колбу помещают 1,50 г 2,5- -дихлорпиримидина, 1,45 г 4-амино- -2-хлорофенола, 2,76 г карбоната калия и 15 мл диметилсульфоксида и проводят реакцию в атмосфере азота при в течение 1,5 ч при перемешивании. После окончания реакции продукт выливают в воду и экстрагируют диэтиловым эфиром. Экстракт промывают насыщенным водным раствором хло ристого натрия и высушивают над безводным сульфатом натрия, а затем растворитель отгоняют. Полученный таким образом неочищенный продукт чистят и вьщеляют с помощью хроматогра- фии на колонке силикагеля, получают 2,20 г 3-хлор-4-(5-хлор-2-пйримидин- локси)анилина, имеющего точку плавления 95-96 С.

2.В колбу помещают раствор, по- лученный путем растворения 1,50 г 2-нитробензоилизоцианата ,5 мл диоксана, и в него по каплям добавляют раствор, полученный путем растворения 1,00 г 3-хлор-4-(5-хлор-2- -пиримидинилокси)анилина, полученного в указанной стадии, в 6,5 мл диоксана, смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 3ч. После окончания реакции продукт вьшивают в воду и отфильтровывают кристаллы. Кристаллы промывают водой при температуре примерно , сушат и суспендируют в этилацетате

5

0 5 0

5

В смесь добавляют небольшое количество н-гексана, и осажденные крис-. ,таллы собирают фильтрованием, сушат, . получив 1,05 г нужного продукта, имеющего точку плавления 222-225 С.

Пример 3. В колбу с раствором 6,80 г .4-(5-бром-2-пиримиди- нилокси)-3-хлоранилина, полученного по примеру синтеза 1.1., в 30 мл хлорбензола по каплям добавляют при раствор 5,76 г 2-нитробензо- илизоцианата в 30 мл хлорбензола и затем смесь оставляют для продолжения реакции при 0° С 24 ч. После завершения реакции продукт отфильтровывают. Кристаллы растворяют в диметил- сульфоксиде и раствор выливают в воду с последующей фильтрацией. Полученные при этом кристаллы помещают в метиловый спирт и перемешивают, а затем снова подвергают фильтрованию и получают 7,05 г желаемого продукта.

Пр Имер 4. 1,73 г 2-нитробензоилизоцианата растворяют в 3 мл 1,2-дихлорэтана. Затем к нему при по каплям добавляют раствор 2,47 г 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)- -3-хлоранилина в 1,2-дихлорэтан.

После окончания добавки смесь оставляют для продолжения реакции на 30 мин при нагревании с обратным холодильником. По завершении реакции реакционную смесь охлаждают и подвергают фильтрации. Затем кристаллы промывают 1,2-дихлорэтаном и получают 3,7 г целевого соединения.

Примеры 5-9. Исходные материалы и растворитель смешивают и подвергают взаимодействию в условиях реакции, представленных в табл.1. По завершении реакции полученный продукт охлаждают в случае, если это . необходимо. Затем к реакционной смеси добавляют 30 мл метилового спирта и проводят фильтрацию для получения желаемого продукта.

Полученные при этом результаты показаны в табл. 1 вместе с результатами, полученными по примерам 1-4.

Проведены биологические испытания производных бензоилмочевины, полученных в условиях предлагаемого способа. В качестве соединения сравнения использована Н-(2-нитроб.ензо- ил)-N -{З-хлор-4-(5-йод-2-пиримиди- нилокси)фенил мочевина.

Пример 1 (испытательный). Инокулирование раковых клеток и вве5

дение испытуемых веществ производят внутрибрюшинно (в одну и ту же часть тела). Мышам штамма BDF внутрибрюшинно инокулируют Р-388 лейкемийные клетки в количестве 1tO клеток/мыш Испытываемое соединение вводят внутрибрюшинно дважды, т.е. через 1 и 4 дня после инокулирования. обследуют в течение 30 дн на предмет выживания или смерти. Определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных при этом число дней выживания мышей в контрольной группе, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают за 100. Соединения вводят в виде дисперсии, полученной путем добавления небольшого количества поверхностно-активного вещества (например, Твин-80), поставляемого компанией- Atlas Powder СО, к испытываемому соединению.

Действие испытуемых: соединений на .лейкемию Р-388 при внутрибрюшинном введении в место, пораженное раковыми клетками, представлено в табл. 2.

Пример 2 (испытательный). Р-388 лейкемийные клетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят орально.

В мышей штамма BDF внутрибрюшин- но вводят Р-388 лейкемийные клетки в количестве 1-10 клеток/мышь. Испытываемое соединение орально вводят дважды, т.е. через 1 и 4 дня после инокулирования. Мышей наблюдают в течение 30 дн. на предмет выживания или смерти и определяют соотношение среднего времени выживания испыта

тельных и контрольных животных для

каждой обработанной группы (10 животных на группу), причем число дне выживания мышей контрольной группы, в которых вводят физиологический солевой раствор, оценивают за 100.

Испытываемые соединения готовят по рецептурному примеру 1.

Действие испытуемых соединений на лейкемию Р-388 при оральном введении представлено в табл. 3.

Пример 3 (испытательный). Р-388 лейкемийные клетки инокулирую внутрибрюшинно, в то время как лекарство вводят орально.

Соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных определяют по испытательному примеру 2, за исключением того.

Q д

c

5

0

0

0

5

0

5

1566

что испытываемые соединения, приг о- товленные по рецептурному примеру 1, готовят по рецептурному примеру 2. Действия испытуемых соединений , на лейкемию Р-388 при оральном введении в большой фон представлены в табл. 4.

Пример 4 (испытательный). L-1210 лейкемийные к-тетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят внутривенно.

В мышей штамма BDF внутрибрюшинно инокулируют 1-1210 лейкемийные клетки в количестве 1-10 клеток/мышь. Внутривенно вводят испытываемое соединение, приготовленное по рецептурному примеру 2. Мышей наблюдают в течение 30 дн на предмет выживания или смерти и определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие соединения 1 на. лейкемию Р-388 при внутривенном введении представлено в табл. 5.

Пример 5 (испытательный), L-1210 лейкемийные клетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемое соединение вводят орально. В мьш1ей штамма BDF внутрибрюшинно инокулируют L-1210 лейкемийные клетки в количестве 1-10 .клеток/мышь. Испытываемое вещество, приготовленное в соответствии с рецептурным примером 1, вводят дважды, т.е. через 1 и 4 дня после инокулирования. Мышей наблюдают в течение 30 дн на предмет выживания или смерти, и определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом -число дней выживания мьш1ей контрольной группы, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100. S .

Действия соединения 1 и соединения сравнения на лейкемию L-1210 при оральном введении представлены в

табл. 6. I - -:

Пример 6 (испытательный). Клетки меланомы В-16 инокулируют

внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят орально.

В мышей штамм BDF внутрибрюшинно инокулируют 0,5 мл жидкости, получен- , ной путем диспергирования 1 г клеток меланомы В-16 в 8 см физиологического солевого раствора в количестве 0,5 мл/мьш1ь. Испытываемое соединение, приготовленное в соответствии с рецеп- Q турным примером 1, вводят орально три раза, т.е. через I, 7 и 14 дней после инокулирования. Мьш1ей наблюдают в течение 60 дн для определения выживания или смерти и определяют соотноше- 15 ние среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, 20 которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие соединения 1 и соединения-сравнения на лиланолиз В-16 при оральном введении представлено в 25 табл. 7.

Пример 7 (испытательный). Клетки М-5074 саркомы яичника инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят jg орально.

В мьш1ей штамма BCF внутрибрюшинно инокулируют клетки N-5074 саркомы яичника в количестве 1.10 кле- ток/мьш1ь. Испытьгоаемое соединение, приготовленное в соответствии с ре- 35 цептурным примером 1, вводят орально три раза, т.е. через 1, 7 и 14 дней после инокулирования. Мьш1ей наблюдают в течение 60 дн на предмет выживания или смерти и определяют отноше- 0 ние среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на ), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, 5 которьм вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие испытуемых соединений на саркому яичника М-5074 при оральном введении представлено в табл. 8. 50

Данные по острой токсичности, дозировке и способам введения производных бензоилмочевины, полученных в условиях описываемого способа,следующие.. 55 iI Острая токсичность. В мьш1ей штамма ctdy (10 животных) внутривенно ввели соединение 1 или 2, приготов- .

ленное в соответствии с рецептурным примером 1, причем количество соединения составило 100 мг/кг, после чего ни одна из мьш1ей не умерла. Таким образом, установлено, что величины острой токсичности (LDj-j) соединений 1 и 2 составляют не менее 100 мг/кг, т.е. их можно отнести к категории малотоксичных.

Дозировки. Указанные соединения вводят непрерывно или с перерывами в некотором диапазоне, в котором полная дозировка не превьш1ает некоторог уровня с учетом результатов опытов н Животных и различных условий. Однако дозировку можно изменять в зависимости от пути введения и от состояния больного или животного, которых нужно лечить (например, от возраста, веса тела, пола, чувствительности, пищи и т.п.), от интервалов в введении лекарства, от лекарств, используемых в сочетании с указанными соединениями, и от степени заболевания. Оптимальную дозировку и число введений в некоторых условиях могут определить специалисты.

Пути введения. Противоопухолевые вещества можно вводить оральным, внутривенным, ректальным, внутримышечным и подкожным путями, предпочтительно оральным, внутривенным или ректальным путями, наиболее предпочтительно оральным путем.

Предлагаемые соединения плохо растворимы как в воде, так и в органических растворителях, позтому их предпочтительно включать в рецептуру в водные суспензии, которые дополнительно могут содержать фосфолипиды

Кроме того, зти соединения можно включать в рецептуру в таблетки, капсулы-, кишечные средства, гранулы, порошки, растворы для инъекции или в суппозитории с помощью известных способов приготовления препаратов.

, Пример 1 (реЦептурньш), Сое динение 1 предварительно измельчают с помощью центрифужного измельчения. Берут 5 мае.ч. ртвержденного полиок- сиполиэтиленом (60) касторового масла, 0,2 мае.ч. силикона и 0,3 мае.ч. полиоксизтилен-полиоксипропиленового блок-полимера, добавляют к 79,5 мае, физиологического солевого раствора, .чтобы получить водный раетвор, к которому добавляют 10 мае.ч. измельченного соединения 1. Смееь измель

чают в мокрой системе с помощью песчаной мельницы, используя стеклянны шарики (80% частиц имеют размер частиц не более, чем 2 микрона). Затем 5 мае.ч. ксантановой смолы (2%-ный раствор) добавляют туда, чтобы получить водную суспензию.

Пример 2 (рецептурный). Берут О, 24 мае.ч. соединения 1 ,2,4 мае рчищенного фосфолипида желтка и 0,0024.мас.ч. и/-токоферола растворяю в 48,7576 мае.ч. хлороформа, а затем хлороформ отгоняют путем нагревания под пониженным давлением с помощью роторного испарителя, получив тонкий слой фосфолипида, содержащего соединение 1. К этому тонкому слою добавляют 48,6 мае.ч. физиологичеекого водного раствора хлористого натрия и сразу же интенсивно встряхивают при комнатной температуре, а затем проводят ультразвуковую обработку в течение 1 ч при ледяном охлаждении с помощью аппарата Зоникатор. Затем проводят центрифужное разделение при комнатной температуре, после чего собирают остаток само го нижнего слоя и промывают с помощью центрифуги несколько раз указанным физиологическим водным раствором хлористого натрия, а затем отфильтровывают, чтобы удалить бактерии, посредством чего получают водную суспензию, содержащую фосфолипид с размером частиц 0,2 - 2 микрона.

Проведенные испытания показывают, что производные бензоилмочевины, полученные предлагаемым способом, малотоксичны и проявляют более высокую противоопухолевую активность в отношении саркомы яичника М-5074, мелано

мы В-16, лейкемии L-1210 и лейкемии Р-388 при оральном введении в сравнении с известным: К-(5-нитробензоил)- -N- З-хлор-4-(5-йод-2-пиримидинилок- CHJ фенил мочевиной.

Формула изобретения

Способ получения производных бензоилмочевины общей формулы

OVCONHCONHNOi

-л gX-0- 0 -A

М N- Cl

где А - бром или хлор, отличающийся тем, что, нитробензольное соединение формулы

20

10

CONGO

10

N0

подвергают взаимодействию с производ- 25 ным пиримидина общей формулы

10

30

10

35

где А имеет указанные значения, в присутствии органического растворителя, такого как октан, кеилол, пиридин, диметилсульфокеид, этилаце- тат, диокеан, хлорбензол или 1,2- дихлорзтан, при 0-120°С.

Приоритет по признакам:

20.02.85 08.03.85

А - А бром;бром, хлор.

Изобретение касается производных бензоилмочевины ,в частности, получения N=(2- нитробензоил)-N¹-[4-(5- бром- или хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлорфенил]-мочевины, которые обладают противоопухолевой активностью и могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 4-(5-бром- или хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина с 2-нитробензоилизоцианатом в среде растворителя-октана, ксилола, пиридина, диметилсульфоксида, этилацетата, диоксана, хлорбензола или 1,2-дихлорэтана при 0-120°С. Новые вещества активно ингибируют лейкомию Р-388 при дозе 25 мг/кг (в день) на 168% и 210% в сравнении с контролем (внутрибрюшинно), а также меланому В-16 и саркому яичников при токсичности LD₅₀=100 мг/кг. 8 табл.

2 3

5,76 Вг 6,80

1,50 5,76

С1 Вг

1,00 6,80

Диокеан 30+30 Комнат- 9ч 9,42 ная температура

Диокеан 6,5+6,5 То же 3ч 1,05

Хлор- 30+30 О 24 ч 7,05 бензол

Таблица 1

Пример

Исходные материалы

Количество(d)

Растворитель(вид)

Вг

2,47

-W-il

1,2-ди- 3+4 хлор- этан

1,73 1,73

Вг Вг

2,47 2,47

н-Октан Ксилол

То же II

71,73 Вг 2,47 Пиридин 10 То же 5ч 3,2

81,73 Вг 2,47 ДМСО 10 5ч 2,5

91,73 Вг 2,47Этилацв- 10- -5ч2,8

тат

. ,p---g 2

Соединение Доза .активного ингре- Отношение средне- диента, мг/кг/день го времени выживания испытательных/контрольных, %

125168

112,5173

225210 12,5150

Сравни- 25230

тельное 12,5171

ТаблицаЗ

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего диента, мг/кг/день времени и выживания

испытательных/контрольных, %

1100173

2- .50178

25139

Сравни- 1600186

тельное 800143

400116

Время

Выход продукта, г

Кипяч. с борат, колод. (83,5°С)

120

Комнатная температура

То же II

0,5 ч

10 мин 5 ч

3,7

3,5 3,6

То же 5ч 3,2

5ч 2,5

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего диента, мг/кг/день времени выживания испытательных/контрольных, %

1400235

300180

200143

Сравни- 3200183

тельный 1600141

Таблица 5

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего вре- диента, мг/кг/день мени выживания испытательных/контрольных, %

Таблица 6

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего диента, мг/кг/день времени выживания

испытательных/контроль- ньсх, %

1100213

50165

2100212 Сравнительное 200 124

IТаблица

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего вре- диента, мг/кг/день мени выживания испыта.тельных/контрольных, %

150165 100 213

2200156 Сравнительное 200124

Таблица 8

Соединение Доза активного ингреди- Соотношение среднего

ента, мг/кг/день времени выживания испытательных/контрольных ,%

-- ---------------.---.------.--.-.-Д™.-. .U..--.-.---.-.-.-.-..-.-.-.-..- .«.-..-.

125139

250138 Сравнительное40098

Таблица А