Способ получения слюны иксодовых клещей Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и энтомологии, к способам управления слюноотделением у переносчиков болезней человека и животных, осуществляющих передачу возбудителей со слюной при укусе.

Целью изобретения является получение двух фракций слюны клещей.

Указанная цель достигается тем, что используют живых голодных йксодо- вых клещей, гипостом которых вводят в последовательно сменяемые сухие капилляры после перентерального введения секретотропных веществ.

Для получения разных фракций клещу с гипостомом, вставленным в капил ляр, вводят адрензнергетик - допамин 10 мМ раствор в количестве О,2-0,6 мл на особь и получают жидкую слюну, затем капилляр заменяют и вводят хо- линэнергетик - пилокарпин 10%-ный раствор в количестве 0,2-0,4 мл на

особь - получают цемент. Каждую из фракций исследутЬт на наличие вируса путем титрования на сосунках белых мышей о

Пример 1. Получение фракций слюны от клещей Hgalomna anatolicum.

Самок клещей Hgalonina anatolicum, полученных из неочаговой по клещевому энцефалиту территории в виде нимф, заражают парентерально вирусом клещевого энцефалита и затем содержат в. термостате при 37 С в течение 7 дней, через 7-8 дней содержания при комнатной температуре фиксируют на спине на стержне, конец которого обернут липким пластырем. Параллельно телу клеща наносит две капли парафина для фиксации конечностей. Затем под контролем бинокуляра гипостом ввоДйт в сухой капилляр (оттянутую пасте- ровскую пипетку) с внутренним диаметром, равным диаметру гипостома самки.

ел

&0

В сочленение вертлуга и коксы IV пары конечностей стеклянной микроиглой, изготовленной на микрокузнице аппарата Фонбрюна и закрепленной на металлической игле микродозатора на 10 мкл, вводят 0,2-0,4 мп 10 мМ- раствора допамина, и после начала слюноотделения или через 5-10 мин еще 0,2-0,4 мп . 100 М раствора гамма-амин омас ля ной кислоты - синергис- та допамина.

Сменив капилляр, вводят 0,2- 0., 4 мл 10%-ного раствора пилокарпина.

Полученную в капилляр порцию слюны вместе с кончиком капилляра растирают в ступке с 0,8 мл стерильного физиологического раствора, отцентдержит. Под влиянием пилокарпина получают вьщеление цементной фракции слюны, твердеющей на воздухе и в

капле дистилли1)ованной воды. В це ментной фракции слюны у всех оказавшихся зараженными самок клещей Hgalonma anatolicum содержится вирус клещевого энцефалита, причем в максимальных - по сравнению с другими экспериментами - до 2,2 Ig в 0,03 МП. В некоторых опытах у одной и той же особи Н. anatolicum в жидкой спонтанно вьщелившейся порции

слюны, вирус обнаружить не удается, тогда как в цементной фракции он присутствует

, Таким образом, показано, что уже первые порции слюны, вводимые в самом

Изобретение относится к медицинской паразитологии, в частности к вопросам изучения процессов слюноотделения у переносчиков болезней /клещей/, осуществляющих передачу вирусов со слюной при укусе человека. Целью изобретения является отдельное получение двух фракций слюны. Для достижения цели проводят инъекцию секретотропных веществ и сбор слюны, причем используют голодных клещей, в качестве секретотропных веществ применяют 10 мм раствор допамина и 10%-ный раствор пилокарпина, которые вводят соответственно в количестве 0,2-0,6 и 0,2-0,4 мл на особь.

рифугированную от стекла надосадочную 20 начале питания как в кровь и Лимфу

позвоночного (жидкая фракция слюны) так и контактирующие с живым слоем кожи (цементная пробка), мргут со- держать вирус в достаточных для начала репродукции количествах и пото му представляющих опасность для нач ла заболевания.

жидкость вводят по общепринятой ме- toдикe в мозг сосункам белых мышей для определения наличия и титра возбудителя, в данном случае - вируса клещевого знцефалита, в разных порциях слюны.

Пример 2. Получение слюны и определение вируса в ней от клещей Dennacentor marginatus.

Полученных из природы неэаражен- ных самок Dermacentor marginatus 2-3 и 3-го физиологического возраста заражают парентерально вирусом. Через 20 дней каждой самке описанным способом вводят 0,4-0,6 МП допамина. Во всех случаях как в опыте (13 самок) , так и в контроле (9 самок) Получают слюну, среднее количество которой составляет 0,17 мп. В 5 случаях из 10 исследованных проб вьще- ляют вирус с титром 0,1 Ig LDj в 0,03 МП.

Проведенные опыты показывают, что под влиянием допамина и гамма- аминомасляной кислоты голодными клещами вьщеляется жидкая фракция слюны, в которой затем устанавливают наличие вируса клещевого энцефалита (показано на клещах Ixodes persulca- tus и Dermacentor marginatus - самках и Ixodes ricinus - самцах). Под влиянием введения гамма-аминомасля- ной кислоты также получают жидкую слюну от Hgalomma anatolicum, которая так же, как и спонтанно выделяемая под влиянием механического раздражения капилляром жидкая слюна, вируса в обнаруживаемых количествах в болыоинстве случаев не соначале питания как в кровь и Лимфу

позвоночного (жидкая фракция слюны), так и контактирующие с живым слоем кожи (цементная пробка), мргут со- . держать вирус в достаточных для начала репродукции количествах и потому представляющих опасность для начала заболевания.

Предлагаемый способ позволяет получить различные фракции слюны голодных клещей.

Получение фракций слюны позволяет не только обнаруживать наличие возбудителя в них, но и осветить ряд неясных эпидемиологических и эпизо- отологических явлений, связанных с диспропорцией между числом обнарз жи- ваемых присосавшихся клещей и р ов- нем иммунной прослойки у людей и животных. В первом случае это связано с неучитываемым количеством кратковременно присасывающихся самцов ик- содид, в жидкой слюне которых в значительном количестве присутствует вирус, во втором с тем, что грызуны уничтожающие (скусьшакяци1е, счесывающие) присосавшихся клещей (личинок и нимф), оставляют в коже цементные пробки, которые, как показано, могут содержать вирус. То же явление может наблюдаться и у людей даже при извлечении присосавшихся клещей.

Формула изобре-ч-е. ния

Способ получения слюны иксодовьк клещей, включакищй ин: екцию секрете- тропных веществ и сбор слюны, о, т - личающийся тем, что, с

целью отдельного получения двух фрак- мина и 10%-ный раствор пилокарпина, ций слюны, используют голодных кле-которые вводят соответственно в кощей, в качестве секретотропных ве-личестве 0,2-d ,6 и 0,2-0,4 мл на

ществ применяют 10 мМ раствор допа-особь.