Способ обнаружения вирусов клещевого энцефалита в яйцекладках иксодовых клещей Советский патент 1979 года по МПК C12K7/00 

(54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ЯЙЦЕКЛАДКАХ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ инкубирую K.) 10-.1 2 сут при и влажности воздуха 95-99%, затем гомогенизируют в физрастворе (0,1 мл физраствора из расчета на одного клеща) и полученный гомогенат вводят интрацеребрально чувствительным животным, например белым мышам весом 6-7 г, В результате исследования подобным образом 21 яйцекладки самок клещей вирус был выделен при первичном заражении подопытных живот ных в 43,8% случаев. Для сравнительного анализа проводят исследование яйцекладок клещей на- наличие вирусов клещевого энцефалита по известной методике путем тре слепых пассажей гомогената яиц на бе лых мышах весом 6-7 г, Вирус клещевого энцефалита удалось выделить лишь в 19% случаев. Различия между данными, полученными в результате сравнительного исследования яйцекладок клещей по известному и предлагае мому способам, статистически достове ны (Р 0,05) ... ; Пример 3. Обследовано 12 яйцекладоксамок-клещей, из которых готовят концентрированную суспензию (по 1500 яиц из каждой кладки). Яйца гомогенизируют, в полученный из 1500 яиц гомогенат добавляюу L мл фи раствора с 3% сыворотки теленка и центрифугируют взвесь при 2500 об/ми 18-20 мин. Надосадочную жидкость в объеме 1,0-2,0 мкл вводят в гемолимфу голодных иксодовых клещей (10 самок клещей), инкубируют их при 20- 22 С и влажности воздуха 95-99% 10-12 сут., гомогенизируют в фарфоровой ступке, добавляя физраствор в объеме 0,1 мл из расчета на одного клеща, и полученный гомогенат вводят интрацеребрально бельом мышам в объеме 0,03 мл (вес мышей 6-7 г). В результате исследования вирус клеще-вог энцефалита был. выделен в 5 случаях из 12 обследованных яйцекладок (что составляет 41,6%) при первичном заражении подопытных )1(ивотных, при этом случаев гибели мы1ией от токсикоза не наблюдалось. Для сравнения было проведено параллельное исследование этих же яйцекладок на белых мышах по известной . методике. Дл-я этого надосадочную жидкость из концентрированной суспензии яйцекладок (1500 яиц в 1 мл физраствора) ввели в мозг бельом мышам весом 6-7 г в объеме 0,03 мл.По истечение 3-4 сут. подопытные животные погибли от токсикоза. Предлагаемый способ позволяет проводить исследование яйцекладок в высокой концентрации, пов.ышает вероятность выделения вирусов клещевого энцефалита в 2-2,5 раза, позволяет избежать массовой гибели подопытньох животных от токсикоза, в 1,5-2 раза сокращает рабочий цикл.. Способ прост в осуществлении и доступен для любых вирусологических лабораторий. Формула изобретения Способ обнаружения вирусов клещевого энцефалита в яйцекладках иксодовых клещей путем гомогенизации яиц с последующим добавлением физиологического раствора, отделением надосадочной жидкости и инфицированием чувствительных животных, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, надосадочную жидкость берут в объеме 1,0-2,0 мкл, вводят в гемолимфу голодных иксодовых клещей, инкубируют их при 20-22С и влажности воздуха 95-99% в течение 10-12 сут., гомогенизируют и полученный гомогенат вводят чувствительным животным. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Шубладзе А.К. и Гайдамович С.Я. Краткий курс практической вирусологии, Медгиз, 1954,