Способ выявления живых интактных иксодовых клещей, зараженных вирусом клещевого энцефалита Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и вирусологии, к способам определения зараженности живых объектов (потенциальных переносчиков) возбудителями болезней,

Известны способы определения содержания возбудителей в переносчиках, связанные с их умерщвлением v определением содержания возбудителей в них заражением чувствительных животных, культур клеток или сред, или индикацией антигенов возбудителей в них с использованием серологических реакций.

Известен также способ определения вируса клещевого энцефалита в слюне иксодо- вых клещей,

Однако все эти способы связаны либо с умерщвлением переносчиков либо, как в последнем случае, с введением в их полость химических веществ.

Наиболее близким техническим решением является выявление различий в поведении зараженных и незараженных клещей, проявляющееся в повышении подвижности зараженных особей и в их движении от градиента влажности, отличающее их от незараженных клещей,

Однако указанные различия носят среднестатистический характер и не могут быть использованы для быстрого разделения живых клещей на две четко различающиеся по признаку зараженности группы.

Целью изобретения является упрощение и повышение точности выявления зара

ю

JS.

О О ГО

женных клещей. Поставленная цель достигается тем, что разделение клещей происходит под влиянием запаха растительного происхождения за счет расползания в противоположные стороны зараженных и незараженных особей.

На фиг.1 изображена схема, реализующая способ; на фиг.2 - 7 - графики реакции на запах зараженных и незараженных клещей.

П р и м е р 1. Демонстрация распределения зараженных и незараженных иксо- довых клещей по реакции на запах почек тополя.

Самок и самцов клещей рода Dermacentor и рода Hyalomma, собранных на территориях, свободных от клещевого энцефалита (КЭ), заражают парентерально вирусом КЭ (2) и затем через различные сроки (но не менее суток) помещают в оль- фактометр (фиг.1) для измерения реакции на запах тополевых почек. Для этого 1 г тополевых почек растирают в ступке, экстрагируют 10 мл ацетона, смачивают гигроскопическую вату и (после испарения ацетона) помещают в патрон 1 ольфакто- метра. В противоположный конец 2 ольфак- тометра помещают такой же ватный тампон, слегка смоченный дистиллированной водой, а затем в центральное отверстие 3 - смешанную партию зараженных и незараженных клещей. На сосок ольфактомет- ра надевают шланг 4, соединенный со штуцером аквариумного компрессора 5 для просасывания воздуха через оба патрона ольфактометра.

Выраженность реакции отмечают по расстоянию, пройденному клещом к (+) или от(-) источника запаха за 5 мин. Результаты наблюдений представлены на фиг.2 - 4 (род Dermacentor) и на фиг.5 (род Hyalomma).

После расползания клещей к источнику или от источника запаха их собирают, а затем каждого клеща исследуют индивидуально общепринятым вирусологическим тестом (интрацеребральное заражение новорожденных белых мышей) на наличие вируса.

Как видно из данных, представленных в таблице и фиг.2 - 5, происходит распределение клещей на группы зараженных и незараженных. Нулевая группа - не более 10% особей, вся составлена из незараженных клещей. Как видно из фиг.4, клещи с более высоким титром вируса дают более выраженную реакцию на запах, проходя большее расстояние.

У клещей рода Dermancentor (D.marginatus и D.reticulatus) зараженные самцы направляются в сторону источника

запаха, а незараженные - от этого источника. Самки этого рода демонстрируют противоположную реакцию: зараженные двигались от источника запаха, незараженные - к источнику (фиг.2 - 3).

У клещей Hyalomma anatolicum реакция зараженных самцов и самок на залах тополевых почек была положительной (+), незараженных - отрицательной (-) (фиг.5).

0 Таким образом, у трех изученных видов иксодовых клещей реакция зараженных и незараженных вирусом КЭ особей на запах тополевых почек была противоположной, что позволило в 100% случаев выделить под5 группу зараженных.

При одновременном использовании известного способа, основанного на выявлении различий в поведении зараженных и незараженных клещей в градиенте влажно0 сти доля зараженных клещей в подгруппе с отрицательным гигротаксисом (по результатам 10 опытов) составила 50-92% (в среднем 69%).

П р и м е р 2. Демонстрация противо5 положной реакции у зараженных и незараженных клещей рода Dermacentor на запах душистого перца.

Используют два вида клещей Dermancentor (D.marginatus и D.reticulatus).

0 Методика опыта аналогична примеру 1. Как видно из фиг.6, самцы и самки обоих видов при наличии в них вируса дают положительную реакцию на запах душистого перца, незараженные - противоположную,

5 отрицательную.

ПримерЗ. Демонстрация противоположной реакции зараженных и незараженных клещей рода Dermacentor на запахи эстрагона и мелиссы.

0 Используют два вида клещей: D.marginatus и D.reticulatus. Методика опыта аналогична примерам 1 и 2.

Как видно из фиг.7, самцы и самки обоих видов дают отрицательную реакцию на

5 запахи эстрагона и мелиссы, будучи зараженными, и положительную, будучи свободными от вируса.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и точно (100% совпадений в слепом опыте) рассортировать клещей

0 по признаку наличия в них вируса клещевого энцефалита, что существенно удешевляет и ускоряет как оценку экстенсивности заражения природных популяций клещей, так и получение биологического эксперименталь0 ного материала с заведомо известными качествами.

Точность метода такова, что любую группу можно использовать для различных целей: проверки экстенсивности и интенсивности заражения популяции, уровня за- 15 раженности особей разного пола, реакции на стандартные репелленты зараженных и незараженных клещей и т.д.

Формула изобретения Способ выявления живых интактных иксодовых клещей, зараженных вирусом клещевого энцефалита, включающий вод- действие на исследуемую группу клещей

внешним фактором, разделяющим ее на подгруппы зараженных и незараженных клещей, и последующий их анализ на наличие вируса стандартным вирусологическим тестом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, в качестве факторов внешнего воздействия используют запахи почек тополя, или мелиссы, или душистого перца, или эстрагона.

25

l@i

t-zizr :::;;

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской паразитологии. Цель - повышение точности и упрощение способа. Разделение клещей на зараженных и незараженных вирусом клещевого энцефалита проводят под действием запаха растительного происхождения, например почек тополя, душистого перца, эстрагона или мелиссы, который изменяет направление движения зараженных клещей на противоположное по сравнению с незараженными, Способ позволяет в течение 5 мин полностью отделить зараженных клещевым энцефалитом клещей от незараженных, 7 ил., 1 табл. fe

f cv)

T.

CO

I

SN

CO

°o

CM

Фиг.5