Способ определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях Советский патент 1989 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения биологически активных веществ, и может быть использовано в биохимии и медицине с целью диагностики степени нарушения гомеостаза.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Р1зобретение поясняется более тесной, в сравнении с прототипом, корреляцией результатов, полученных предлагаемым способом и базовым объектом - гель - фильтрацией и меньшим содержанием в экстрактах биологических жидкостей высокомолекулярных примесей.

Поставленная цель достригается тем,, что дополнительно высокомолекулярные примеси кислоторастворимой фракции осаждаются 70-80%-ным этанолом.

Пример 1. К плазме крови, лимфе или спинно-мозговой жидкости добавляется хлорная кислота до конечной концентрации 0,6 М/л, после 10- 15 мин экспозиции при комнатной температуре пробы центрифугируются при 9000g 15-30 мин. Надосадочная жидкость переносится в отдельную itpo6iTp- ку и нейтрализуется раствором карбоната калия в концентрации 2 М/л (контроль рН - универсальная индикаторная бумага). Пробы вьщерживаются на льду 20-30 мин для полного осаж,п;.е- ния перхлората калия и центрифугируются. К прозрачном супернатлиту добавляется абсолютный этанол до конечной концентрации 80 об.% (1 объем супернатанта и 4 объема этанола). Пропьг оставляют на 10-30 мин при коми; гной тe fflepaтype, затем центрифугирунтт

СП ГчЭ

О

ИЙЬ

4 СП

при 9000g. Супернатант разводится дистиллированной водой в 5 раз, измеряется абсорбция при 210 нм. Референтный раствор - 80%-ный водный раствор этанола, разбавлен, как и опытный образец, в 5 раз дистиллированной водой.

Оптическая плотность стандартных растворов ангиотензина и соответствующий ей калибровочный фактор приведены в табл. 1.

г

Параллельное определение веществ группы средних молекул в биологических жидкостях согла ;но предлагаемому

способу и методу гель-фильтрации приведено в табл, 2.

с Формула изобретения

. Способ определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях путем получения кислотораство- римой фракции биологической жидкости с последуюпщм спектрофотометрирова

Нием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, кислоторастворимую фракцию дополнительно обрабатывают 70-80%-ным этанолом в течение не менее 5 мин.

Таблица Т.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине для определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что кислоторастворимую фракцию плазмы, лимфы или спинно-мозговой жидкости, полученную путем осаждения 0,6 М раствором хлорной кислоты и центрифугирования, дополнительно обрабатывают 70-80 %-ным этанолом для полного осаждения высокомолекулярных белков, гликопротеидов и серомуноида с последующей спектрофотометрией супернатанта. 2 табл.

Оптическая плотность,

2tO нм

50,1000,050

100,1900,052

20:. 0,4050,049

300,6110,049

400,7980,050

501,010 0,049

601,160 0,050

701,2700,056

801,3100,061

Таблица2 Исследуемая жидкость Концентрация средних молекул, г/л

Предлагаемый способ Метод гель- фильтрации

Плазма крови0.890,96

Спинно-мозговая

жидкость0,900,92

Плазма крови1,371j41

Лимфа1,161,27

Составитель Л.Сабурова Редактор Н,ТупицаТехред М.ХоданичКорректор В.Кабаций

Заказ. 6751/if6Тираж 789Подписное

ВИНИЛИ Государственного комитета но vi:io6peTeHHnM и открьпиям при 1 КИТ СССР 113033, Москва, Ж-З , Раушская наб., д. 4/т

Пpoизвoд(.;тReн lCl--,tз,laт lьcкин кг., г Патент, г..)., yi. 1 лг пряна, 101

Фактор (коэффициент) С

Е

г 10 нм