Способ определения стадий острого перитонита у детей Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения стадий острого перитонита у детей, и может быть использовано при определении степени тяжести воспалительного процесса при хирургических заболеваниях органов брюшной полости у детей.

Целью изобретения является повьппе- ние точности и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

После .установления диагноза острого перитонита производят аабор венозной крови через силиконизированнуто иглу

в полиэт шеновую шш силнконизирован- вую пробирку. Активность калликреииа определяют следую1и;им методом. Калли- креип отделяют от остальных компонен- тов кипиновой системы и других трипси оподоб ых фврментов путем кратковременного контакта исследуемого материала с суспензией ДЭАЭ-сефадекса А-50 в присутствии 0,02 М калий-натрий-фосфатноге буфера рП 7,0. После отделения анионита фильтрованием каллпкреин определяют в фильтрате спектрофотомет- рическим методом по скорости гидролиза этилового эфира Ы-бензо -т-Ъ аргинина. Свободный (активный) калликреин прак тически отсутствует в нормальной сыворотке крови. Кровь больного центрифугируют при 3000 об/№1н 15 мин.Для получения неадсорбированной фракизни бел- ков сыворотки крови 0525мл сыворотки кровн разводят в Зраза 0,02М фосфатным буфером рН 7,0 и добавляют 2,5 мл густой суспензии сефадекса А-50, уравновешенного тем же буфером. Смесь осто рожно перемешивают 10 мин тонкой стеклянной палочкой, добавляют 3,-0 мл 0,02 М фосфатного буфера рН 7,0, соде жахцего 0,05 М NaCl, перемешивают еще 2 мин Переносят суспензию на фильтр М фильтруют с небольнпм отрицательным давлением. Фильтрат колкчес пзенно переносят в мерную прюбирку на 5,0 мл, объем фильтрата довчодят до метки 0,02 М фосфатным буфером.

Для определения активности калликре ина к 1,О мл фильтрата добавляют 1,0 мл 0,1 М трис-буфера рН 8,0 и IjO iviri 1 ,5 раствора БАЭЭ в том же буфере. В контрольную пробу берут 2,0 мл 0,1 М трис-буфера :рН 8,0 и 1,0 мл 1,5-10 И БАЭЭ (проба на спонтанный гидролиз эфира рН 8,0). Пробы переливают в кюветы спектрофотометра и измеряют прирост оптической плотности при длине волны 253 нм и 25. 15 мин, отсчеты делают через, каждые 5 мин. Содержание калликреина выражают в миллиединицах в 1,0 мл сыворотки крови и вычисляют по формуле: f5

ЛО

а$э

1,1

1 - 3 - 5 -1000 fs

... ...«.м...м.«.«- ..м :: J jj jO

15 0,25 - 1

ij3

прирост оптической плотности за 15 мин (при ли- нейном ходе реакции), йВ даСоответствующий образованию 1 мкмоль N-бензо„

Q

5

5

0

ил-Ъ-аргинина из ВАЭЭ в 1 мл пробы,

3 - объем пробы в кювете,мл5 5 - объем неадсорбированной

фракции, мл,

0,25 - количество сьшоротки крови взятого анализа,мл. При активности калликреииа,равной 54,54 мед/мл и менее, определяют реактивную стадию при значении 58,18- 90,90 мед/мл - токсическуюj, при значении 94,54 мед/мл и более - терминальную стадию острого перитонита у детей.

Способ определения стадий острого перитонита был применен у 157 больных в возрасте от 1 мес до 15 лет.При этом в реактивной стадии острого перитонита было 43 ребенка, активность калликреина сыворотки крови составила 44,89+1,04 .мед/мл, 6 7,54 ,5, В токсической стадии активность калликреина составила 76,24+ fO,48 мед/Мл. ,02, Р 0,05. В терминальной стадии острого перитонита активность калликреина составила 103,55±0,81 мед/мл, 6 4,05, ,05.

И р и М е р 1. Больной К. 1 год 5 мес. После клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: Острый деструктивный аппендицит, перитонит, реактивная стадия. Для определения активности калликреина взят 1 мл венозной крови. Прирост оптической плотности составил 0,015, а содержание каллш реи.на соответственно /IDfgjX 3636 0,015 X 3636 54,54 мед/мл, что соответствует реактивной стадии острого перитонита. Больному проведена предоперационная подготовка как при реактивной стадии. Изменения, обнаруженные в брюшной полости во время операции, течение заболевания и динамика состояния больного в послеоперационном периоде подтвердили правильность установленного диагноза - реактивной стадии острого перитонита.

П р и М е р 2, Больной Ю., 12 лет. После клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: перфора- тивная язва желудка, перитонит,реактивная стадия. Взят 1 мл венозной кро аи для определен11я активности калли- | креина. Прирост оптической плотности составил D2S3 0,025, а содбржание калликреина - 90,9 мед/мл, что соот51522

ветствует токсической стадии острого перитонита. Больному произведено предоперационная подготовка, соответствующая токсической стадии перитонита.Изменения, обнаруженные в брюшной полос- ти во время операции, тяжелое течение послеоперационного периода и медленная положительная динамика состояния больного подтвердили правильность Q установленного диагноза - токсической стадии острого перитонита.

П р и м е р 3. Больной В., 16 дней. После клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: язвенно-не- 15 кротический энтероколит, септический перитонит, терминальная стадия.Взят 1 мл венозной крови для определения активности калликреина. Прирост оптической плотности f3 0,026, а со- 20 держание калликреина - 94,54 мед/мл, что соответствует терминальной стадии острого перитонита. Ребенку проведена предоперационная подготовка, соответствующая терминальной стадии перитонита. Изменения, обнаруженные в брюшной полости во время операции, крайне тяжелое состояние и течение заболевания (ребенок через сутки после операции умер) подтвердили правильность установленного диагноза.

П р и м е р 4, Больная Р., 4 года 8 мае. После клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: пель- виоперитоинт, реактивная стадия. У ре- .бенка взят 1 мл венозной крови для определения активности калликреина.

25

30

35

0

1016

Прирост оптической плотности соста5

0

If

Z55

0,016, а содержание кал5

вил 4D

ликреина - 58,18 мед/мл, что соответствует токсической стадии острого перитонита. Больной произведена предоперационная подготовка соответственно токсической стадии. Изменения,обнаруженные в брюшной полости во время операции, течение заболевания и динамика состояния больного подтвердили правильность установленного.диагноза - токсической стадии перитонита. j .

Применение способа в медицинской практике повьш1ает его точность за счет возможности определения токсической стадии острого перитонита.Способ прост в исполнении, для его осуществления требуется 45 мин, не требуется дорогостоящего оборудования и реактивов.

Формула изобретения

Способ определения стадий острого перитонита у детей путем исследований сьшоротки крови, о т л и ч а щ и и с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа,определяют активность калликреина и при значенш этого показателя 54,54 мед/мл и менее, от 58,18 до 90,9 мед/мл и 94,54 мед/мл и более определяют соответственно реактивную, токсическую и терминальную стадии острого перитонита.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для определения стадий острого перитонита у детей. Целью изобретения является повышение точности способа за счет возможности определения токсической стадии острого перитонита, а также упрощение способа. Для этого в сыворотке венозной крови определяют активность калликреина, предварительно отделяя его от остальных компонентов кининовой системы и других трипсиноподобных ферментов. После чего калликреин определяют в фильтре спектрофотометрическим методом по скорости гидролиза этилового эфира N-бензоил-L-аргинина. Свободный калликреин практически отсутствует в норме. Кровь больного центрифугируют. Для получения неадсорбированной фракции белков сыворотки крови 0,25 мл разводят в 3 раза фосфатным буфером, добавляют 2,5 мл сефадекса А-50, смесь перемешивают, добавляя 3,0 мл 0,02 М фосфатного буфера рН 7,0, содержащего 0,05 М NACL. Суспензию переносят на фильтр и фильтруют. Фильтрат переносят в мерную пробирку и доводят объем до метки 0,02 М фосфатным буфером. После чего к 1,0 мл фильтрата добавляют 1,0 мл 0,1 М трис - буфера рН 8,0 и 1,0 мл 1,5^.10^-3 М р-ра БАЭЭ. В контрольную пробу берут 2,0 мл 0,1 М трис-буфера рН 8,0 и 1,0 мл 1,5^.10^-3 М БАЭЭ. Активность калликреина определяют спектрофотометрически при длине волны 253 нм и 25°. При значении этого показателя 54,54 мед/мл и менее определяют реактивную стадию, при значении 58,18 - 90,90 мед/мл - токсическую, а при значении 94,54 мед/мл и более - терминальную стадию острого перитонита у детей. Применение способа в медицинской практике позволяет повысить точность диагностики за счет возможности определения токсической стадии острого перитонита. Кроме того, способ прост в исполнении и для его осуществления требуется 45 мин.