Способ определения чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

свидетельствует о чувствительное ги пациента к гормону, т.е. позволяет предположить эффективность глюкокор- тикоиднон терапии, а отсутствие изменений количественного состава ТФ-чув- ствительной субпопуляции лимфоцитов свидетельствует о резистентности индивидуума к глюкокортикоидам.

Приме р. Кровь в количестве 3 мл берут натощак из локтевой вены в сбалансированный солевой раствор (3 мл) с гепарином (25ед./мл|, цент- ригЬугируют 20 мин при 3000 об/мин и 20 С; дважды отмывают по 15 мин при 1500 об/мин в среде 199, после чего подсчитывают концентрацию клеток в 1 мл и доводят ее до 2-10 в 1 мл средой 199. В 6 пробирок добавляют по О,1 мл лимфоцитов и О,1 мл раство- ра преднизолона в разных концентрациях. Расчет дозы преднизолона осуществляют исходя из возможно-создаваемых концентраций его в крови при использовании терапевтических доз. Для расчета был взят произвольный вес (30 кг). Учитывая, что кровь составляет 87% веса тела,объем (масса) ее будет равен 2,4 л. 45% составляет клеточные элементы и 55% плазма, еле- довательно объем плазмы равен 1,3 л. Исходя из дозы преднизолона 1 мг/кг его количество при весе 30 кг равно 30 мг. В 1,3л плазмы будет 0,03 г преднизолона (0,030:1300), в 1 мл

23-10 6, в 0,1 мл преднизолона. Готовят следующие разведения преднизолона в 1 мл 0,9%-ного раствора NaCl:

1 10

2-10 3-10 4-10 5-10

-5 -5

-s

1

2

3

4

5

66-10 S

После 45-минутной инкубации при 37°С лимфоциты отмывают средой 199, ресуспензируют и добавляют 0,1 мл 5 мМ раствора ТФ. Инкубируют I ч при 37°С, дважды отмывают средой 199,

затем ресуспензируют, добавляют 0,1 мл эритроцитов барана, инкубируют 10 мин при 37°С, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, затем оставляют на 1 ч при 4 С, после чего фик- сируют 0,03 мл глютарового альдегида 20 мин, добавляют избыток дистиллированной воды, центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин и делают мазки. Числ

с

0

5

Q

розеток подсчитывают в мазках посте фиксации в метиловом спирте и ки по Брате. За розетку принимаю лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцитов барана. Результаты выражают в процентах.

Если предварительная оСрлботка лимфоцитов преднизолоном in vitro приводит к уменьшению ТФ-резистентной субпопуляции с соответствующим возрастанием ТФ-чувствительной по сравнению с контролем (без обработки преднизолоном),констатируют чувствительность пациента к глюкокортикоидам. При отсутствии изменений соотношения ТФ-резистентной и ТФ-чувствительной субпопуляций констатируют ре- зистентность к глюкокортикоидной терапии.

Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности пациента к глюкокортикоидной терапии, о чем можно судить только после проведенного курса лечения. Кроме того, предлагаемый способ за счет использования функционального подхода при оценке действия гормона на лимфоциты (путем регистрации перераспределения ТФ-резистентной и ТФ-чу твительной субпопуляций лимфоцитов) значительно проще в исполнении в сравнении с известным. Формула изобретения

Способ определения чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей, включающий обработку лимфоцитов больного in vitro различными концентрациями глмко- кортикоида с последующей оценкой изменения специфического связывания гормона с лимфоцитами по сравнению с контролем, не содержащим глюкокор- тикоида, отличают ийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, оценку связывания гормона с лимфоцитами проводят путем регистрации перераспределения под влиянием гормона субпопуляиий лимфоцитов чувствительных и резистентных к теофиллину и при увеличении теофиллинчувствительной субпопуляции лимфоцитов определяют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания теофиллинчувствительной субпопуляции лимфоцитов определяют реэистентность индивидуума к глюкокортикоидам.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения эффективности глюкокортикоидной терапии у нефрологических больных. Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения чувствительности индивидуума к глюкокортикоидам при гломерулонефрите. Способ включает обработку лимфоцитов больного IN VITRO различными концентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой специфического связывания гормона с лимфоцитами, о котором судят по перераспределению под влиянием гормона IN VITRO известных субпопуляций лимфоцитов теофиллин-чувствительной и теофиллин-(ТФ)-резистетной. При увеличении ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов по сравнению с контролем (без обработки глюкокортикоидом) констатируют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов констатируют резистентность индивидуума к гормону. Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности к глюкокортикоидам, которая доказывается последующей гормональной терапией, и упрощении основных этапов выполнения способа.