Способ определения антител к ВоRDетеLLа реRтUSSIS в биологической жидкости Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

И Ilior Tf Л I ЧДИЦЧНС,

Т 11НГ) 1 1 Ч ГС po I T (РСКПГГ

JIT i HI rnoMMtt o emiinЯ

L c IT luniic- uHH vnn ч HIK im

i Oti 1 .

Сп 1ГОГ 4| i С I l 1ЯР Г jf Г °f) ,

1Ь f J. l i ill К 7е т ( UЈ,4 1 ЯГ r t Г. I 1 , I I p M ( )iГ ибИ Ч-ПИ Т u Т ГН М П i n i- | jjf I f II CM (SI CJ el Л LM тГр j H ( rmi 4

Н П Г1 I i i f(И ° If 1 1 II 1 L 1) MI I1 iT ijl 1C II il LIII Г И 1И I IKK Г Л fl It 1 -,ч ll 1 r M1 т I

Ct r ri-i M-ni i , tu VI ЦП -41 , dnij СИГ v 1 i I i

о p, i i f j i i 4f rf ll pe i и ij i

I 1 II ПГЧ f ° К M npl ti1- 10П - О (lO-f-P n -3) v fJ t-H4H

Ч l ИP, ЧлЯ П (. in о i n l i рчия

дети ei na i мргпиш в и г i Tpivr - io -чои к T}H п ньг fn грийь

содерж-ии к 400 млрд микробных клеток в I м, суспендируют в 100 мл новсгс буфера гостав: 7,3 г глицина, 10 г ллорида натрия, 1000 ил днстил- шропанной воды, рН 8,2), центрифугируют при 15 000 об/мин в течение 30 пин. Надосадочную ицкосгь удаляют, а с гадок растирают с песком в ,, фарфоровой ступке в течение 15 мин, затем деэинтеграт суспендируют в 50 мл глицинового буфера и снова подверг лот центрифугированию при 1 000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость, содержащую 775 белка, используют в качестве чнтигена для сенсибилизации латекса .

Дгзинтеграт и латекс сметивают в обменном соотношении 2:1, пробирку со смесью помещают в термостат при 37 С на 2 ч, затем для стабилизации полученного латексного диагностикума доел

со

4ь Ј О СП

бявляют 3 ч забуференного глицином физиологического раствора, содержащего 0,1% бычьего сывороточного альбумина и 0,03% азида калия. Данный ди- агностикум хранят при температуре 5- 10°С не более 15 дней. Для постановки реакции латекс-агглютинации используют стеклянную пластинку, на которую нанос ят двукратные разведения иссле- дуемой сыворотки или слюны в количестве 0,05 мл, к каждому разведению исследуемого субстрата добавляют по 0,02 мл коклюшного латексного диаг- ностикума. Стекло слегка покачивают для равномерного перемешивания ингредиентов в течение 3 мин. Результат регистрируют визуально через 3-5 мин. Для более четкой регистрации результатов реакции необходимо высушить маз ки, зафиксировать над пламенем спиртовки и окрасить разбавленным фуксином, затем краску смыть, снова высушить стекло и анализировать препарат под микроскопом (увеличение в 50-

60 раз).

Реакция оценивается качественно:

4+ - четкая агглютинация частиц латекса с образованием больших скоплений;

3+ - большие и малые скопления частиц латекса;

2+ - малые, но отчетливые скопления частиц латекса, имеются несагглю- тинированные частицы.

1+ - слабая гранулярная агглютинация

- - отсутствие агглютинации, характеризующееся равномерным распределением частиц латекса по всему Фо- ну.

Положительными считают реакции не менее чем на 2+.

Проведен анализ 275 образцов сьгео- ротки крови и слюны у детей с высевом коклюшного микроба и клинической картиной коклюша у детей, ревакциниро- ванных АКДС-вакциной. Образцы слюны

давали положительную реакцию в раз- ведениях от 1:40-1:80, образцы сыворотки кропи - до 1:40000-1:1300000. Все исследуемые образцы вызывали агглютинацию латексного диагностикума, контрольный латексный циагностикум не ап лютинировал.

Пример 2. Диагностикум готовили и реакцию проводили как в примере I, анализировали образцы слюны р

динамике от детей с положительным высевом коклюшного микроба вилчале и через 15-20 дней после появления клинических признаков коклюша. Диагностикум реагировал в начальном периоде лишь с образцом слюны одного ребенка при равведении до 1:10.

Через 15-20 дней положительная реакция получена во всех образцах, титр антител в слюне 1:40-1:160.

Пример 3. Диагностикум готовили и реакцию проводили, как в примере J, но анализировали образцы слюны клинически здоровых непривитых детей. Положительных реакций выявлено не было.

Таким образом, предложенный способ определения антител к В.pertussis позволяет упростить процедуру серологического анализа и может быть применен как для оценки антительного ответа при заболевании, так и для оценки поствакционального ответа.

Формула изобретения

Способ определения антител к Вог- detella pertussis в биологической жидкости путем иммунологического анализа исследуемого материала с дезин- тегратом бактерий, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, дезинтегратом сенсибилизируют частицы полистиролового латекса, добавляют к исследуемому материалу, делают мазок, высушивают и окрашивают фуксином и определяют наличие антител к Bordetella pertussis.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине для диагностики коклюша. Цель изобретения - упрощение способа. В способе применяется метод пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютинации с коклюшным латексным диагностикумом. Предлагаемый способ прост в исполнении и по чувствительности не уступает иммуноферментному анализу.

Редактор В.Петраш

Составитель Л.Падюков Техред М.Дидык

Заказ 39

Тираж 501

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Корректор С.Шекмар

Подписное