Способ определения вида грамотрицательных микроорганизмов Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/04 

1

(21)4417347/30-13

(22)28.04.88

(46) 23.01 .90. Бюл. УР 3

(71)Центральный институт усовершенствования врачей

(72)Т.Б.Сафонова, Л.А.Тараненко, Е.А.Ведьмина и В.Р.Соболев

(53)576.8.093.1 (088.8)

(56)Энтеробактерии. Руководство для врачей./Под ред. В.И.Покровского, М.: Медицина, 19&5, с. 31-55.

(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА ГРАМОТ- РИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

(57)Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Исследуемые культуры высевают на питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определяют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды для определения образования сероводорода и индола. Параллельно делают посевы на контрольные среды (не содержащие субстраты). После инкубирования посевов определяют изменение цвета сред и индикаторов. Для определения утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавляют реактив Несслера. При утилизации аминокислот образуется осадок, в контроле осадок отсутствует. Время проведения анализа 18-24 ч, ложно положительные результаты исключаются .

9

(Л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Исследуемые культуры высевают на питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определяют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды для определения образования сероводорода и индола. Параллельно делают посевы на контрольные среды (не содержащие субстраты). После инкубирования посевов определяют изменение цвета сред и индикаторов. Для определения утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавляют реактив Несслера. При утилизации аминокислот образуется осадок, в контроле осадок отсутствует. Время проведения анализа 18 - 24 ч, ложно положительные результаты исключаются.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний.

Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Способность утилизировать углеводы определяют посевом исследуемых культур на среды Гисса,способность образовывать H2S и индол на среде Клиглера. Показания этих тестов учитывают через 24 ч по изменению окраски индикатора в этих средах.

Определение утилизации аминокислот осуществляют следующим образом. Готовят реактив Несслера: берут 10 мл

воды, 1 г йодистой ртути, растирают в ступке с небольшим количеством воды, переносят в темный стеклянный флакон, ступку ополаскивают водой и сливают в тот же флакон, куда добавляют 0,5 г йодистого калия. В оставшейся воде растворяют 2 г гидроксид натрия, и после охлаждения раствор щелочи выливают во флакон. Дают отстояться осадку в течение нескольких часов. Надосадоч- ную жидкость сливают и хранят в темном флаконе с притертой пробкой. Среды готовят известным методом: с аминокислотами и без аминокислот (контрольные) . Посев испытуемых культур проводят известным методом, культуры инкубируют 18-24 ч в термостате при 37°С.

сл

СО 1

to to

Реактив Несслера в об-ьеме 0,15- 0,25 мл добавляют в каждую пробирку под слой вазелинового масла.

Реакцию считают положительной, ее ли сразу после добавления реактива в опытную пробирку образуется объемный белый осадок в случае продукции микроорганизмами декарбокс лазы ор- нитина или лизина, и большое количе- ство белого или желто-коричневого осадка при продукции аргининдигидро- лазы. Появление легкой опалесценции расценивается как отрицательный результат.

В контрольной пробирке после добавления реактива происходит изменение цвета индикатора без образования осадка.

Пример 1. Выявление вида культуры рода Klebsiella pneumoniae.

Определение исследуемой культуры начинают с посева в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактозу, в пробирку со средой Клигле ра, на которой определяют образование и индола, а также на среду с аминокислотой. Первая пробирка - среда с лизином (опытная), вторая пробирка - среда без лизина (контрол ная). Исходный цвет сред - светло-зеленый. Пробирки заливают стерильным вазелиновым маслом для создания анаэробных условий.

Посевы ставят в термостат и ин ку- бируют при 37°С 2k ч. Изменение окраски индикатора на средах Гисса свидетельствует о способности микроорганизма утилизировать глюкозу и лактозу. Отсутствие почернения среды Клиглера и отсутствие изменения индикаторной бумажки на индол свидетельствует о неспособности исследуемой культуры образовывать сероводород и индол. Через 2 ч инкубации в контрольной пробирке (среда без лизина) происходит изменение цвета среды из зеленого в желтый, а цвет опытной пробирки (среда с лизином) приобретает желтый цвет с зеленоватым оттенком. Такое изменение цвета не позво ляет четко интерпретировать результаты. В пробирки добавляют реактив Несслера в количестве 0,15 мл под вазелиновое масло. В опытной пробир- ке сразу появляется объемный белый осадок. В контрольной пробирке при добавлении 0,15 мл реактива образование осадка не наблюдается.

5

0

о

5

0

Пример 2. Выявление вида микроорганизма Pseudomonas aerugino- sa.

Определение начинают с посева исследуемой культуры в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактозу, в пробирку со средой Клиглера, на которой определяют образование и индЬла,а также на две пробирки - опытную и контрольную, соответственно с аргинином и без аргинина. Пробирки с аминокислотами заливают вазелиновым маслом, и все посевы инкубируют в термостате при 37°С ч.

Изменение окраски индикатора на среде с глюкозой говорит о способности культуры утилизовать глюкозу. Неизмененная окраска среды с лактозой, отсутствие почернения среды Клиглера и изменения индикаторной бумажки на индол свидетельствуют об отрицательных реакциях. Через 18- ч инкубации с аминокислотами происходит изменение цвета посева в опытной пробирке (среда с аргинином) в сине-зеленый, а в контрольной (среда без аргинина) - в зелено-синий, что не дает возможность интерпретировать полученные результаты.

Добавляют в пробирки с аминокислотами по 0,25 мл реактива Несслера под масло. В опытной пробирке сразу образуется желтовато-коричневый осадок, в контрольной осадка не наблюдается .

Использование способа позволяет повысить точность определения вида микроорганизма за счет модификации определения утилизации аминокислот. По сравнению с известным способом ускоряется определение на 2-3 сут.

Формула изобретения

Способ определения вида грамотри- цательных микроорганизмов путем посева исследуемых культур на питательные среды, предназначенные для определения утилизации углеводов и аминокислот, образования индола и сероводорода, с последующим инкубированием посевов и определением вида микроорганизма пс совокупности биохимических свойств, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, утилизацию аминокислот лизина, орнитина и аогинина

51537690б

определяют по образованию осадка пос- выросшей культурой реактива Нессле- ле добавления в питательную среду с ра.