Устройство для индентификации микроорганизмов Советский патент 1987 года по МПК C12M1/00 

11320223

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для .идентификации микроорганизмов.

Целью изобретения является стабилизация влажности при культивации , микроорганизмов.

На фиг, 1 показано устройство, общий вид; на фиг. 2 - рабочая панель; на фиг; 3 - основание.

Устройство состоит из контейнера ю 1 в котором установлена рабочая панель 2, и крьшжи 3. В рабочей панели 2 имеются ячейки 4 для дифференциальРастБоры дифферен1щапьно-диагнос- тических сред готовят на осисве фосфатных буферов, В качестве основного компонента используют дифференцирующий субстрат; изменение рН среды обнаруживают при помощи индикатора. Например, для обнаружения уреазы используют в качестве субстрата мочевину, индикатора - бромкрезоловый красный. Соответствующим агентом, определяющим сероводород, является тиосульфат натрия при наличии соли железа. Для обнаружения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролазы аргинино-диагностических сред. Дно ячеек выполнено в виде конусов 5. В контей- 15 используют лизин, орнитин, арги- нере 1 выполнены продольные канавки ник и индикатор бромтимоловой синий, 6, вдоль оси которых расположены вер- Для определения ферментации углево- шины конусов 5, Для поддержания оптимальной влажности в ячейках 4 стенка 7 контейнера 1 выполнена ступенча-;го , сорбита) используют соответству- той, что приводит к образованию зазо- ющие субстраты в присутствии индикара между крышкой 5 и рабочей па- тора фенолового красного. Субстрата- нелью 2

Устройство изготавливают из полидов (глюкозы, лактозы, маннита, сахарозы, арабинозы, мальтозы, инози30

ми для определения дезаминазы являются такие аминокислоты, как фенилаламерного материала путем вакуум-формо- 5 ник и триптофан, а хромогенным -га- вания. Для изготовления носителя суб- лактозидазным субстратом является ;страта (рабочих панелей 2 с ячейками |4 и основания) используют жёсткую светотехническую поливинилхлоридную пленку белого цвета II группы, S 0,55 мм. Для изготовления крышки 3 используют прозрачную винипластовую каландрирова:нную пленку марки КПС, S 0,5-0,7 мм. Субстраты наносят в центры ячеек 4 в виде точки при помо- 35 пипеточным по 0,02 мм в одну из яче- щи дозатора пипеточного П1-0,02. Ра- ®к 4 рабочей панели 2„ Подобным же бочую панель 2 с ячейками 4 помещают в основание контейнера и закрывают крьщ1кой 3, после чего устройство упаковывают герметично в полиэтилен. - Устройство используют следующим образомр

Составные части устройства моют и стерилизуют ультрафиолетом. Ячейки 4 рабочей части панели 2 заполня- 45 Тиомёщают в контейнер, закрывают крыш- ют различными дифференциально-диагно- кой 3, запаивают в полиэтилен и хра- стическими средами в жидком виде, а затем высушивают. Число ячеек 4 соответствует количеству тестов, обес- печивающих полную дифференциацию бак- о ганизма с агаровой среды. Используют терий семейства кишечных. ,Цля диффе- только свежие культуры (18-24 ч), ренциагщи предлагается использовать Культуры старше 30 ч могут дать лож- следующие тесты: цитрат натрия, мало- но-отрицательные результаты. нат натрия, цитрат натрия с глюкозой. Суспензия микроорганизмов должна лизин, аргинин, орнитин, фенилаланин, j иметь точно видимую мутность и равна.

0-нитрофенил-р-галактопираноаид и т.д.

Пример Готовят смесь реагентов, состояш;ую из 120 г углевода и 0,85 г фенолового красного, которую растворяют при нагревании в 1 л фос- . фатного буфера рН 8,0. Приготовленный раствор раскапывают дозатором

образом раскапывают и остальные растворы дифференциально-диагнос-гических сред. Так заполняют все 20 ячеек 4 ра- 40 бочей панели 2. После чего панели 2 высушивают в сушильном шкафу в течение 4ч с дальнейшей стер1 шиза- цией ультрафиолетом в течение 1 ч. Затем панель 2 с ячейками 4

нято По мере надобности их используют для идентификации микроорганизмов. Для этого готовят суспензию микроор-

индол, ацетилметилкарбоиил, уреаза, сероводород, глюкоза, /1-галактозида- за, лактоза, маннит, сахароза, ико- зит, сорбит, арабиноза, мальтоза.

по крайней мере, стандарту мутности -500 млн/мл микробных тел для свежевыделенных культур. У музейных культур могут быть обнаружены более низкие

РастБоры дифферен1щапьно-диагнос- тических сред готовят на осисве фосфатных буферов, В качестве основного компонента используют дифференцирующий субстрат; изменение рН среды обнаруживают при помощи индикатора. Например, для обнаружения уреазы используют в качестве субстрата мочевину, индикатора - бромкрезоловый красный. Соответствующим агентом, определяющим сероводород, является тиосульфат натрия при наличии соли железа. Для обнаружения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролазы аргини используют лизин, орнитин, арги- ник и индикатор бромтимоловой синий, Для определения ферментации углево- , сорбита) используют соответству- ющие субстраты в присутствии индикатора фенолового красного. Субстрата-

используют лизин, орнитин, арги- ник и индикатор бромтимоловой синий, Для определения ферментации углево- , сорбита) используют соответству- ющие субстраты в присутствии индикатора фенолового красного. Субстрата-

дов (глюкозы, лактозы, маннита, сахарозы, арабинозы, мальтозы, инози30

5 ник и триптофан, а хромогенным -га- лактозидазным субстратом является 35 пипеточным по 0,02 мм в одну из яче- ®к 4 рабочей панели 2„ Подобным же

0-нитрофенил-р-галактопираноаид и т.д.

Пример Готовят смесь реагентов, состояш;ую из 120 г углевода и 0,85 г фенолового красного, которую растворяют при нагревании в 1 л фос- фатного буфера рН 8,0. Приготовленный раствор раскапывают дозатором

5 ник и триптофан, а хромогенным -га- лактозидазным субстратом является 35 пипеточным по 0,02 мм в одну из яче- ®к 4 рабочей панели 2„ Подобным же

45 Тиомёщают в контейнер, закрывают крыш кой 3, запаивают в полиэтилен и хра- о ганизма с агаровой среды. Используют только свежие культуры (18-24 ч), Культуры старше 30 ч могут дать лож- но-отрицательные результаты. Суспензия микроорганизмов должна j иметь точно видимую мутность и равна

образом раскапывают и остальные растворы дифференциально-диагнос-гических сред. Так заполняют все 20 ячеек 4 ра- 40 бочей панели 2. После чего панели 2 высушивают в сушильном шкафу в течение 4ч с дальнейшей стер1 шиза- цией ультрафиолетом в течение 1 ч. Затем панель 2 с ячейками 4

Тиомёщают в контейнер, закрывают крыш- кой 3, запаивают в полиэтилен и хра- ганизма с агаровой среды. Используют только свежие культуры (18-24 ч), Культуры старше 30 ч могут дать лож- но-отрицательные результаты. Суспензия микроорганизмов должна иметь точно видимую мутность и равна.

нято По мере надобности их используют для идентификации микроорганизмов. Для этого готовят суспензию микроор-

по крайней мере, стандарту мутности -500 млн/мл микробных тел для свежевыделенных культур. У музейных культур могут быть обнаружены более низкие

10

f5

уровни энзиматической активности, чем у свежих клинических, поэтому готовится более плотный инокулят, приблизительно равный стандарту мутности 1 млрд/мл микробных клеток. Суспензию готовят в 4 мл стерильного физиологического раствора рН 6,0+0,5,

Инокуляция и инкубирование.

Вскрьшают упаковку. Регистрируют номер пробы и другую требуемую информацию. Открывают крышку 3 контейнера и располагают его на столе. Вынимают рабочую панель 2 и заливают воду в канавки 6 основания контейнера 1. Вставляют панель 2 с ячейками 4 в основание контейнера 1, Раскапывают пипеткой по 0,15 мл суспензии микроорганизма внутрь каждой реакционной ячейки 4, кроме теста на сероводород,2Q где вносят только одну каплю суспензии (0,05 мл). Заливают .ячейку 4 с тестом на сероводород 0,1 мл растопленного и достаточно охлажденного (до ) полужидкого агара. Для соз-рз Дания анаэробных условий покрывают сверху стерильным вазелиновым маслом ячейки с тестами; лизин, аргинин, ор- нитин,и сероводород (0,1 мл - 2-3 каШ1и), Закрывают крышку 3 контейнера. Инку- зо бируют 18-24 ч при t , После окончания инкубахщи открывают крышку 3 контейнера и в ячейку 4 с тестом на фенилаланиндезаминазу добавляют 1 кашю 10%-ного FeClj, в ячейку с ,ром относительно рабочей панели.

тестом на ацетилметилкарбинол - 1 лю 6%-ного о -нафтола и затем 1 ка 40%-ного КОН, в ячейку с тестом н индолообразование - 1 каплю реакт Эрлиха,

Чтение реакции.

Читают все реакции немедленно положительные или отрицательные с ласно с цветовыми изменениями, ис чая тест на ацетилметилкарбинол.

Позволяют окраситься тесту на тилметилкарбинол примерно в течен 10 мин, затем читают, реакцию.

Устройство позволяет достаточн точно идентифицировать бактерии с мейства кишечных до вида, обладае большой скоростью ответа, удобно постановке, экономично, всегда го во к употреблению и не требует за рат бактериологической посуды.

Формула изобретен

Устройство для идентификации м роорганизмов, выполненное в виде тейнера с крьш1кой и рабочей панел с ячейками, отличающеес тем, что, с целью стабилизации вл ности при культивации микрооргани мов, в контейнере выполнены продо ные канавки, а дно ячеек рабочей нели вьтолнено в виде конусов, ве шины которых расположены Вдоль ос канавок, а крышка установлена с з

,ром относительно рабочей панели.

тестом на ацетилметилкарбинол - 1 каплю 6%-ного о -нафтола и затем 1 каплю 40%-ного КОН, в ячейку с тестом на индолообразование - 1 каплю реактива Эрлиха,

Чтение реакции.

Читают все реакции немедленно как положительные или отрицательные согласно с цветовыми изменениями, исключая тест на ацетилметилкарбинол.

Позволяют окраситься тесту на ацетилметилкарбинол примерно в течение 10 мин, затем читают, реакцию.

Устройство позволяет достаточно точно идентифицировать бактерии семейства кишечных до вида, обладает большой скоростью ответа, удобно в постановке, экономично, всегда готово к употреблению и не требует затрат бактериологической посуды.

Формула изобретения

Устройство для идентификации микроорганизмов, выполненное в виде контейнера с крьш1кой и рабочей панели с ячейками, отличающееся тем, что, с целью стабилизации влажности при культивации микроорганизмов, в контейнере выполнены продольные канавки, а дно ячеек рабочей панели вьтолнено в виде конусов, вершины которых расположены Вдоль оси канавок, а крышка установлена с зазо

Изобретение относится к медицинской технике и предназначаемо для микробиологии Цель изобретения - стабилизация влажности при культивации микроорганизмов о Устройство состоит из контейнера 1, в котором установлена рабочая панель 2„ В рабочей панели 2 имеются ячейки 4 Дно ячеек выполнено в виде конусов. В контейнере 1 выполнены продольные канавки. Вдоль оси канавок расположены верпш- ны конусов. В ячейках 4 стенка контейнера 1 выполнена ступенчатой, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2, Уст- ройство изготавливают из полимерного материала. 3 ил. СО ГО о ю to со ФЦ8.1

)ю

л

н

А:Ало8е1знуто

фиг, 2

И

повернуis

фиё.З

Редактор К. Рыбченко

Составитель С„ Клыпкин Техред И.Попович

Заказ 2612/22 Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

Корректор Л, Пилипенко