Способ выделения монолиний М-вируса картофеля Советский патент 1990 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к области фитовирусологии.

Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля.

Пример 1. Проводят исследования с целью выбора растения-индикатора, реагирующего наиболее устойчиво некротической реакцией на заражение М-вирусом картофеля,и оптимальных условий для проявления локальной реакции:

Опыты проводят в контролируемых условиях температуры и освещенности: в теплице (зимне-весенний период) - резкие колебания температуры от 10 до 50°С и освещенности от 5000 до 20000 лк в климатической камере при

длительности светового дня

16

температуре 25°С и освещенности 15000 лк} в вегетационной камере при длительности освещения 16 ч, температуре 18-25°С, освещенности 2500 лк.

и

учедоиойраальной

х ти: - 0 при

тем0 лк} ьРастения-индикаторы заражают механически. Для приготовления используют листья растений картофеля и томатов, инфицированных выделенными в природе изолятами М-вируса картофеля. Листья пораженных растений растирают в фарфоровой ступке с добавлением буферного раствора в пропорции 1:1-1:3. Используют фосфатный 0,1 М, рН 7,2-7,5, и нитратный 0,1 М рН 7,2-7,5 буферные растворы; при отсутствии положительной реакции на отдельных видах растений-индикаторов используют также цитратный 0,1 М, рН 9,0, Мр-глициновый 0,1 М, рН 7,2-7,5 и трис-НС 0,1 М, рН 7,2- 7,2 буферные растворы. Растения-индикаторы заражают в фазе развития, оптимальной для проявления М-вируса картофеля.

Результаты заражения растений- индикаторов представлены в таблице.

ел

с& ел

00 00

сэ

3I5

Результаты проведенных опытов показывают, что локальная реакция при заражении различными изолятами М-ви- эуса картофеля проявляется на ряде растений-индикаторов, но наиболее устойчиво на мари стенной (Chenopo- dium raurale L). На инокулированных листьях мари через 18-25 дней после заражения появляются желтые пятна, затем некротизирукщиеся в центре. Наиболее четкие некрозы на листьях 1ри стенной получали, заражая расте я в фазе бутонизации, удаляя перед шокуляцией их верхушку. Причем реек ция на большинство испытанных изоля- тов М-вируса картофеля получена на растениях мари стенной в условиях вегетационной камеры.

Таким образом, из всех испытанных тест-растений марь стенная наиболее стабильно реагирует локальной реакцией на заражение исследуемыми изолятами М-вируса картофеля, и наиболее Оптимальными для проявления этой реакции являются условия вегетационной камеры.

Пример 2. Изучают возможность пассирования М-вируса через некроз с целью получения монолиний вируса при выделении штаммов.

Участок некроза на листе растения-индикатора вырезают пробойником |С диаметром 3 мм, растирают в микроступке с добавлением буферного раствора, полученную суспензию наносят на опудренные карборуьдом листья растения-индикатора или растения-накопителя с помощью пипетки и растирают по поверхности листа поролоновым тампоном, увлажненным буферным раствором

В работе используют изоляты М-вируса картофеля и растения-индикаторы проявившие в первой серии опытов (пример 1) локальную реакцию: вигна, табак Дебнея, гомфрена головчатая, дурман индийский, марь белая, марь

-

5

0

5

0

5

Киноа, марь стенная. Для накопления вируса заражают растения томата сорта Петито в стадии 1-2 настоящих листьев. Пассирование на определенном тест-растении проводят в тех условиях которые наиболее способст- овали проявлению локальной реакции на этом растении.

Устойчивое пассирование через некроз (3-8-кратное и более), а также успешная передача способом механической инокуляции на растение-накопитель исследованных изолятов М-вируса картофеля получены только на растениях мари стенной (Chenopodium murale L). На всех остальных растениях-индикаторах ни в одном случае не получено заражения от некроза.

Пример 3. 3-Кратное пассирование через некроз на листьях Chenopodium murale L в условиях вегетационной камеры и последующее заражение от некроза растений томата сорта Petito для накопления вируса позволяет выделить штамм М-вируса картофеля из природных изолятов этого вируса, используемых в дальнейшей работе: М-139 - слабопатогенный (вакционный), 8 17 ВИЗР; М-200 - сильнопатогенный, для оценки вирусоустойчивости селекционного материала, Ьв 14 ВИЗР; М-35- иммуногенный, для производства диагностической сыворотки к М-вирусу картофеля, № 16 ВИЗР.

Формула изобретения

Способ выделения монолиний М-вируса картофеля, включающий пассирование через некроз на листьях растения-индикатора с последующим заражением растения-накопителя, отличающийся тем, что, с целью получения монолиний М-вируса картофеля, в качестве растения-индикатора используют марь стенную (Chenopodium murale L), а в качестве растения- накопителя - томат сорта Petito.

Количество изолятов М-вируса картофеля, вызвавших локальную реакцию на растении-индикаторе. Количество исследованных изолятов М-вируса картофеля.

Изобретение относится к фитовирусологии. Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля. Указанная цель достигается использованием в качестве растения-индикатора маристенной, на листьях которой производят 2-3-кратное пассирование изолятов. После этого заражают от некроза растения томата сорта Петито для накопления вируса. Полученные при этом популяции вирусов отличаются по патогенности. 1 табл.