Способ определения патулина в пищевых продуктах Советский патент 1990 года по МПК G01N33/02 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при анализе пищевых продуктов на содержание микотоксина патулина.

Цель изобретения - сокращение способа и повьааение его точности.

Способ осуществляется следующим образом.

В исследуемый образец, разбавленный водой, добавляют концентрированную соляную кислоту, растворы гекса- циано-(11)феррата калия и уксуснокислого цинка. Образец отфильтровывают от осадка через складчатый бумажный фильтр. К фильтрату добавляют гидрохлорид гидроксиламиня, перемешивают и вьздер ивают в течение 15 мин. Патулин из фильтрата трижды экстрагируют этилацетатом. Экстракт сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют в отгонную колбу, куда добавляют силикагель, и упаривают досуха (до состояния, когда силикагель начинает свободно пересыпаться) на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более .

Для очистки экстракта с помощью колоночной хроматографии на дно стеклянной колонки помещают кусочек ваты, на нее наливают суспензию 2 г силикагеля в 20 см толуола. Толуолу дают стечь, не допуская просыхания колонки, добавляют еще 20 смЗ толуола и высыпают в колонку силикагель с адсорбированным экстрактом из круглодонной колбы. Толуолу дают стечь и пропускают через колонку еще 100 см толуола. Толуольные элюаты отбрасывают. Круглодонную колбу ополаскивают 5 см смеси гексан - этилаце- тат (2:3) и выливают раствор в колонку, куда добавляют еще 100 см смеси гексан - этилацетат (2:3) . Весь элюат собирают и упаривают в грушевидной колбе на ротациониом испарителе при температуре водяной бани не более до объема 0,2 см э.

СГВ 00 СЛ

сд

Полученный раствор анализируют с помощью двумерной тонкослойной хроматографии на пластинках Силуфол. На пластинке на расстоянии 2,5 см от нижнего и правого краев карандашом проводят две тонкие линии. В точку их пересечения с помощью микрошприца наносят аликвоту анализируемого раствора. На обеих стартовых линиях отмечают по 3 точки, в которы микрошприцем наносят различные количества стандартного раствора патулин в интервале от 10 до 80 нг в пятне. После нанесения всех растворов плас- тинку одной из стартовых линий вниз помещают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную суесью хлороформ-ацетон (80:2 на высоту около 1 см. Проявление хроматограммы в первом направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки. После этого пластинку извлекают из камеры и сушат до исчезновения запаха растворителя. Высушенную пластинку поворачивают на 90 и помещают второй стартовой линией вниз в другую хроматографи- |Ческую камеру, предварительно заполненную смесью толуол - этилацетат - муравьиная кислота (50:40:10). Проявление хроматограммы во втором направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки. После извлечения из камеры пластинку сушат до исчезновения запаха растворителя. Затем пластинку помещают в камеру с хлором. Атмосферу хлора в камере создают, медленно приливая соляную кислоту к раствору марганцовокислого калия. Обнаружение пятен патулина достигается после опрыскивания пластинки раствором бензидин в муравьиной кислоте и просушивания ее в токе воздуха. Для увеличения УСТОЙЧИВОСТИ окраски пятен патулина пластинку покрывают тонким слоем парафина. Хроматограмму рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. Патулин обнаруживается в виде зелено-желтых флуоресцирующих пятен на темно-фиолетовом фоне. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету флуоресценции и

хроматографической подвижности пятнам стандарта патулина, свидетельствует о его наличии в анализируемом продук, ю5 20 25 57544

те. Количество патулина в пятне анализируемой пробы определяют, сравнивая размер И интенсивность флуоресцен- ции пятна стандарта патулина и пятна патулина в анализируемой пробе. Массовую долю патулина в анализируемой пробе вычисляют по формуле

Л щл

п . Vj.V2

(нг/г или мкг/кг),

С - массовая доля патулина в продукте, мкг/кг;

m - масса навески продукта, г;

п - количество патулина, обнаруженное в пятне, нг;

V - общий объем, до которого

доведена навеска при прибавлении к ней воды, см

3.

объем фильтрата, взятый на

анализ,

общий объем хлороформного

экстракта, мм

3.

V - объем хлороформного экстракта, наносимьй на пластинку, мм .

Патулин устойчив в кислой среде и быстро деградирует в щелочной, поэтому введение в образец соляной кислоты создает необходимые условия для стабилизации патулина. Кроме того, высокая кислотность среды существенно тормозит процесс дериватизации (оксимирования) патулина гидроксила- мином.

Использование гексациано-(11)фер- рата калия и уксуснокислого цинка вызывает быстрое и полное осаждение взвешенных частиц, высокомолекулярных,, белковых и полифенольных соединений, создающих при смешивании водной фазы с этилацетатом трудноразделяемые эмульсии. Процессы осаждения и фильтрации, занимающие 1-2 и 10-15 мин соответствелно, успешно заменяет преследующий ту же цель продолжительный (3-4 ч) диализ.

. Добавление в фильтрат гидроксил- амина и выдержка в течение 10- 20 мин ведут к получению производного оксиметилфурфурола, значительно отличающегося от патулина по хроматографическим свойствам. Применение в первой системе растворителей для тонкослойной хроматографии смеси хлороформ - ацетон позволяет полностью отделить патулин от производного

оксиметилфурфурола.

Таким образом, сокращение времени проведения анализа достигается за счет замены диализа осаждением и фильтрацией, а повьшение точности, понимаемое как снижение случайной ошибки, вызьшаемой перекрыванием пятна патулина на хроматограмме пятном оксиметилфурфурола при сохранении патулина неоксимилированньм за счет подкисления образца соляной кислотой достигается использованием гидроксиламина в достаточной концентрации и необходимое время и обеспечением условий хроматографирования, обуславливающих эффективное отделение патулина от производного оксиметилфурфурола.

Пример 1. Анализ пюре из яблок.

Навеску пюре массой 50 г помещают в стеклянный стакан, смешивают с небольшим количеством дистиллировай- ной воды, а затем количественно пере- носят в мерную колбу вместимостью 250 см. В мерную колбу вносят 2 см концентрированной соляной кислоты, 5 см раствора гексациано-(11)Леррата калия с концентрацией 150 г/дм и 5 см раствора уксуснокислого цинка с концентрацией 300 г/дм. Содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют в мерный цилиндр через плотный складчатьй фильтр. Отфильтровывают 50 см раствора. В полученный фильтрат вводят 1 г гидрохлорида гидроксиламина, содержимое цилиндра перемешивают и настаивают

нокислым натрием ополаскивают 15 см зтилацетата, которые затем также отфильтровывают в отгонную колбу. В экстракт вводят 1 г силикагеля. Экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре- водяной бани не более 40°С. Концом упариван считают момент, когда силикагель на 0 чинает свободно пересыпаться. Для очистки экстракта с помощыо колоноч ной хроматографии на дно .стеклянной колонки помещают кусочек ваты, на нее наливают суспензию, содержащ то 15 2 г силикагеля в 20 см толуола. Толуолу дают стечь, и, не допуская просыхания силикагеля, на негр нали вают еще 20 см толуола. На хрома- тографическую колонку, находящуюся 20 под слоем толуола, высыпают силикагель с адсорбированным экстрактом из отгонной колбы. Через колонку пропускают еще 100 см толуола. То- луольные элюаты отбрасывают. Отгон- 25-ную колбу ополаскивают 5 см смеси гексан - этилацетат в соотношении (2:3 и выливают раствор в колонку, куда приливают еще 100 см смеси гексан- этилацетат (2:3). Весь полученный 30 элюат собирают и упаривают в грушевидной отгонной колбе на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40°С до объема 200 мм . Полученный раствор анализи- ,, руют с помощью двумерной тонкослойной хроматографии на пластинках Силуфол размером 15X15 мм. На плас тинке на расстоянии 2,5 см от нижнего- и правого краев карандашом прово-- ----х- ---- ij,. .j,a, о J

в течение 15 мин. Фильтрат из цилинд- дят две тонкие линии. В точку их пеПЯ СТТ та ГТО rfUfO гтт- iJirirt т.,

ра переносят в делительную воронку Этим же цилиндром отмеряют 50 см этилацетата, переносят его в делительную воронку и затем 1-2 мин интенсивно перемешивают содержимое. Смеси дают отстояться, и после полного разделения водный слой сливают обратно в 1Ц1линдр, а этилацетатный экстракт переносят в плоскодонную колбу с притертой пробкой. Экстрагирование в аналогичных условиях свежи- ми порциями этилацетата проводят еще два раза.Этилацетатные экстракты объединяют и сушат в колбе с притертбй пробкой безводным сернокислым натрием (приблизительно 10 г) в течение 10-15 мин. После просушивания объе- диненньй экстракт фильтруют через вату в отгонную колбу. Колбу с cep-v

ресечения с помощью микрошприца наносят 20 мм анализируемого раствора. На обеих стартовых линиях отмечают по три точки, в которые микрошприцем

д5 наносят различные количества стандартного раствора патулина в интервале от 10 до 80 нг в пятно. После нанесения всех растворов пластинку одной из стартовых линий вниз поме5с щают в камеру для тонкослойной хро- J aтoгpaфии, предварительно заполненную смесью хлороформ - ацетон (80: :20) на высоту около 1 см. Проявление хроматограммы в первом направлении.

J, заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от .края пластинки. После этого пластинку извлекают из камеры и су- . шат до исчезновения запаха растворинокислым натрием ополаскивают 15 см зтилацетата, которые затем также отфильтровывают в отгонную колбу. В экстракт вводят 1 г силикагеля. Экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре- водяной бани не более 40°С. Концом упаривания считают момент, когда силикагель на- 0 чинает свободно пересыпаться. Для очистки экстракта с помощыо колоночной хроматографии на дно .стеклянной колонки помещают кусочек ваты, на нее наливают суспензию, содержащ то 5 2 г силикагеля в 20 см толуола. Толуолу дают стечь, и, не допуская просыхания силикагеля, на негр наливают еще 20 см толуола. На хрома- тографическую колонку, находящуюся 0 под слоем толуола, высыпают силикагель с адсорбированным экстрактом из отгонной колбы. Через колонку пропускают еще 100 см толуола. То- луольные элюаты отбрасывают. Отгон- 5-ную колбу ополаскивают 5 см смеси гексан - этилацетат в соотношении (2:3) и выливают раствор в колонку, куда приливают еще 100 см смеси гексан- этилацетат (2:3). Весь полученный 0 элюат собирают и упаривают в грушевидной отгонной колбе на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40°С до объема 200 мм . Полученный раствор анализи- , руют с помощью двумерной тонкослойной хроматографии на пластинках Силуфол размером 15X15 мм. На пластинке на расстоянии 2,5 см от нижнего- и правого краев карандашом прово-- ----х- ---- ij,. .j,a, о J

дят две тонкие линии. В точку их пересечения с помощью микрошприца нансят 20 мм анализируемого раствора. На обеих стартовых линиях отмечают по три точки, в которые микрошприце

д5 наносят различные количества стандартного раствора патулина в интервале от 10 до 80 нг в пятно. После нанесения всех растворов пластинку одной из стартовых линий вниз поме5с щают в камеру для тонкослойной хро- J aтoгpaфии, предварительно заполненную смесью хлороформ - ацетон (80: :20) на высоту около 1 см. Проявление хроматограммы в первом направлении.

J, заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от .края пластинки. После этого пластинку извлекают из камеры и су- . шат до исчезновения запаха раствори

. , 1

теля. Высушенную пластинку поворачивают на 90 и помещают второй стартовой линией вниз в другую хроматогра- фическую камеру, предварительно заполненную смесью толуол - этилацетат- муравьиная кислота (50:40:10). Проявление хроматограммы во втором направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки. После извлечения из камеры пластинку сушат до исчезновения запаха растворителя . Затем пластинку помещают в камеру с хлором. Атмосферу хлора в камере создают, медленно приливая концентрированную соляную кислоту к раствору марганцевокислого калия с концентрацией 50 г/дм. Обнаружение пятен патулина достигается после опрыскивания пластинки раствором бензи дина в муравьиной кислоте и просушивания ее в токе воздуха. Для увеличения устойчивости окраски патулина гшастинку погружают и вынимают из расплавленного парафина с температурой около . Парафину дают застыт держа пластинку в вертикальном положении. Хроматограмму рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете (365 нм). Патулин обнаруживается в виде зелено-желтых флуоресцирующих пятен на темно-фиолетовом фоне. Сравнивая интенсивность флуоресценци и размер пятен стандарта патулина в пятна патулина в анализируемом образце, определяют, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится 50 мг вещества. Расчет концентрации патулина в пюре из яблок:

.п

га

50 250 200 50-50 20

V,-V,

50 мкг/кг (нг/г).

Таким образом, содержание патулин в анализируемом пюре из яблок составляет 50 мкг/кг.

При пятикратной повторности среднее значение содержания патулина составило 50,2 мгк/кг, стандартное отклонение - 5,3 мкг/кг, относительное стандартное отклонение - 10,6%, доверительньй интервал (,95) - 6,57 мкг/кг.

Пример 2. Анализ повидла из яблок.

Навеску повидла массой 25 г помещают в стеклянный стакан, смешивают

8

с небольшим количеством дистиллированной воды, а затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см. Далее анализ проводят в соответствии с тем, как это описано в примере 1. После проявления хроматографической пластинки бензидином обнаруживают, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится 30 нг вещества. Расчет концентрации патулина в повидле:

С

30-250200

60 мкг/кг.

25.50-20

р 3. Анализ джема из

Приме слив.

Навеску джема массой 25 г помещают в стеклянный стакан, смешивают с водой, а затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см . Далее анализ проводят так, как это описано в примере 1. После проявления хроматографической плас- тинки бензидином обнаруживают, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится 75 нг вещества. Расчет концентрации патулина в джеме:

„ 75-250-200

2° мкг/кг.

о

0

Анализ примеров позволяет заключить, что предлагаемый способ определения патулина, использующий

J осаждение и фильтрацию для отделения грубодисперсных частиц и высокомолекулярных соединений, оказывается пригодным для любых продуктов переработ- ки плодов и овощей- (соков, пюре, поQ видла, варенья, джема и порошков) независимо от их консистенции.

П р и м е р 4. Анализ клубничного варенья, искусственно загрязненного патулином на уровне 40 мкг/кг, по

5 предлагаемому способу при добавлении растворов гексациано-(11)феррата калия и уксуснокислого цинка с концентрациями 150 и 300 г/дм соответственно в количестве 0,5; 3, 5-, 7 и 10 см 5 проб образца варенья, искусственно загрязненного патулином на уровне 40 мкг/кг, разводят дитилли- рованной водой, переносят в мерные колбы, а зйтем вызывают осаждение взвешенных частиц и высокомолекулярных соединений добавлением растворов гексациано-(11)феррата калия и уксуснокислого цинка в количестве по 0,5; 3, 5; 7и 10 см . В дальнейшем ана

ЛИЗ проводят согласно описанию в лримере 1. Пробы, обработанные осад телями в количестве 0,5 и 3 см, очень медленно фильтруют, кроме тог первая из этих проб дает труднораз- деЛяющуюся эмульсию с этилацетатом. Не обнаружено существенных различий между тремя остальными пробами в скорости фильтрования и.скорости раделения водного и этилацетатного слоев.

Выбранное количество вводимых в образец растворов гексациано-(11)фе рата калия и уксуснокислого цинка является оптимальным. Добавлением меньшего количества этих веществ может быть недостаточно для осаждения всех высокомолекулярных соединений. Превышение этаго уровня не сказывае ся на полноте или скорости осаждения Поэтому использование больших количеств гекса1щано-(11)феррата калия и уксуснокислого цинка нецелесообразно.

Введение в образец соляной кислот имеет целью наиболее полное проведение дериватизации оксиметилфурфурола и стабилиза15иш патулина на том же уровне.

Пример5. Анализ яблочного порошка, искусственно загрязненного патулином на уровне 200 мкг/кг, по предлагаемому способу при добавлении в анализируемую пробу 1 или 2 см концентрированной соляной кислоты или без ее добавления.

3 пробы по 25 г одного образца яблочного порошка, содержащего пату- лин на уровне 200 мкг/кг, смешивают с водой, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см и добавляют 1 или 2 см концентрированной соляной кислоты или не добавляют ее. Дальнейшее определение проводят, как в примере 1. Сравнение анализируемых проб показало, что при добавлении к пробе 2 см концентрированной соляной кислоты оксимируется не более 2-3% патулина, при добавлении 1 см .соляной кислоты - 5-6%, а в отсутствии соляной кислоты - около 10% патулина. В то же время,при добавлении к пробе 2 см концентрированной соляной кислоты неоксимированным остается около 2% оксиметилфурфурола, при добавлении 1 см кислоты - менее 1% и в отсутствии соляной .кислоты оксиметил- фурфурол оксимируется практически

10

t5

, 25

30

35

40

0

5

полностью. Таким образом, предлагаемое введение в образец 2 см концентрированной соляной кислоты обеспечивает максимальную стабилизацию патулина в растворе, при этом остается очень небольшое крличество оксиметил;- фурфурола неоксимированным, что не мешает точному определению содержания патулина в пробе.

Дпя оксимирования оксиметилфурфурола используется количество гидроксил- амина, значительно превышающее количество оксиметилфурфурола в анализируемой пробе. В большинстве продуктов переработки плодов и овощей содержание оксиметилфурфурола исчисляется десятками миллиграммов 1 кг продукта. Практически предельным можно считать концентрацию оксиметилфурфурола 100 мг/кг. С учетом этой концентраций в 50 см сока мо жет содержаться 5 мг оксиметилфурфурола. Обработке гидроксиламином подвергается пятая часть берущейся на ан.олиз пробы. Таким образом, в 50 см раствора, отбираемого для обработки гидроксиламиномJ содержится не более 1 мг оксиметилфурфурола. К 50 см добавляют 1 г гидрохлорида гидроксиламина, содержащего около 470 мг гидроксиламина. Высокая скорость и достаточная полнота реа а:;ии оксимирования достигается не менее чем 400-500-кратным превышением концентрации гидроксиламина над окси- метилфурфуролом.

Д р и м е р б. Анализ виноградного сока, искусственно загрязненного патулином на уровне 20 мкг/кг, по предлагаемому способу при добавлении в анализируемую пробу гидрохлорида гидроксиламина в 400-500- кратном избытке по отношению к окси- метилфурфуролу и настаивании в те- чение 3, 10, 15, 20 и 30 мин .г.

5 проб по 50 см 3 одного образца виноградного сока, содержащего пату- лин на уровне 20 мкг/кг, разводят водой, переносят в мерные колбы на 250 см, добавляют к ним по 2 см концентрированной соляной кислоты и по 5 см растворов гексациано-(11)- феррата калия и уксуснокислого цинка, перемешивают и отфильтровывают. К каждому из полученных фильтратов, имеющих объем 50 см , добавляют по 1 г гидрохлорида гидроксиламина. Патулин экстрагируют из проб этил

ацетатом через 3, 10, 15, 20 и 30 ми В дальнейшем анализ проводят согласно примеру 1.

При анализе по предлагаемому способу при четырехкратной повторнрсти среднее значение содержания патулин составило 16,5 мкг/кг, стандартное отклонение - 5,5 мкг/кг, относительное стандартное отклонение - 33,3%, доверительньй интервал (,95) - 8,74 мкг/кг. При анализе по известному способу в 2 из 4 повторностей патулин обнаружен не бьш, в двух дргих содержание патулина составило 5 мкг/кг (предел обнаружения патулина) .

Влияние продолжительности обработки фильтрата гидроксиламином на степень дериватизации оксиметилфур- фурола может быть оценено следующим образом: за 3 мин оксимируется окол 50% оксиметилфурфурола, за 10 мин - 94-95%, за 15 мин - 98%, за 20 и. 30 мин - 99%. Увеличение продолжительности обработки сверх 15 мин оценено как нецелесообразное из-за того, что остаточное содержание оксметилфурфурола (менее 2%) уже не сказывается на результатах анализа. Кроме того, более продолжительная обработка сопровождается дальнейшим возрастанием доли оксимированного патулина.

Оптимальной системой для отделения патулина от оксиметилфурфурола является смесь .толуол - этилацетат муравьиная кислота (50:40:10). Поэт ,му эта система бьша использована бе изменения Для надежного и эффективного отделения патулина на хромато графической пластинке от остаточног количества оксиметилфурфурола.

0

5

5754

0

5

0

12

ных объемных соотношениях представлен в таблице.

Данные о хроматографической подвижности патулина и производного оксиметилфурфурола представлены в таблице.

Установлено, что присутствие в смеси мураьиной кислоты снижает селективность системы, не гарантируя во всех случаях надежного отделения патулина от производного оксиметилфурфурола. Особенно хорошо это видно на примере системы 2. Система 4 обеспечивает наиболее приемлемое зна чение патулина, но очевидно, что селективность систем 5 и 6 лучше. В то же время при использовании систем 6 значение патулина ока зывается вне зоны качественного проведения хроматогра- фирования, что может сказываться на низкой эффективности отделения патулина от других веществ, присутствующих в экстракте. Таким образом, оптимальной для отделения патулина от производного оксиметилфурфурола и других веществ, присутствующих в экстракте, является система хлороформ - ацетон (80:20).

Сравнение существующих способов определения патулина позволяет сделать заключение о том, что использование нового способа обеспечивает сокращение времени проведения анализа с 7 до 4 ч за счет устранения диализа и повьш1ение точности результатов анализа за счет снижения случайной ошибки, происходящей при перекрывании пятна патулина пятном оксиметилфурфурола на хроматографической пластинке.

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к определению микотоксинов в пищевых продуктах. Целью изобретения является сокращение способа и повышение его точности. Способ включает подкисление соляной кислоты, осаждение веществ, мешающих экстракции, фильтрацию патулина этилацетатом, очистку экстракта, двумерную тонкослойную хроматографию, проявление хроматограммы, обнаружение и количественное определение патулина. 1 табл.

Другая система растворителей долж на,отвечать следующим трем требованиям: максимальное отделение патулин от производного оксиметилфурфурола, отделение патулина от других соединений, присутствующих в экстракте, и нахождение патулина в интервале RP между 0,35 и 0,65.

Пример. Анализ грушевого нектара, искусственно загрязненного патулином на уровне 100 мкг/кг, по новому способу с использованием в двумерной тонкослойной хроматографии в первой системе смесей хлороформ- ацетон - муравьиная в различ0

Формула изб.ре.тения

Способ определения патулина в пищевых продуктах, включающий отбор пробы, добавление в нее кислоты, экстракцию этилацетатом, очистку экстракта адсорбцией на сйликагеле, упаривание, элюирование толуолом и смесью гексан - этилацетат, двумерную тонкослойную хроматографию с использованием в первой системе смеси хлороформ - ацетон, а во второй - смеси толуол - этилацетат - муравьиная кислота,проявление хлором. и раствором бензидина, фиксацию

13

хроматограммы парафином и обнаружение патулина в ультрафиолетовом свете с последующим его количественным определением, отличающий- с я тем, что, с целью сокращения времени проведения анализа и повышения его точности, при введении кислоты используют концентрированную соляную кислоту с доведением pFI лробы до 1,0-1,5, после чего дополнительно проводят осаждение мешающих ве

Хлороформ - ацетон - муравьиная кислота

То же ||

Хлороформ - ацетон То же

е1585754 1

ществ гексациано-(11)ферратом калия и уксуснокислым цинком с последующей фильтрацией осадка, добавляют к филь трату гидрохлорид гидроксиламина при соотношении 1:50 и вьщержившот в течение 10-20 мчн, а в первой системе тонкослойной хроматографии соотношение компонентов в смеси хлоро- JO форм - ацетон устанавливают равным (78:82) - (18:22).

0,50

0,67 0,42 0,50 0,43 0,27

0,37

0,5 0,28 0,34 0,10 0,02