Способ определения гемолитической активности BacILLUS аNтнRасIS Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской язвы и исследовательских целях о:

Цель изобретения - повьшениа точности способа.

Способ осуществляют следующим образом,

В стерильные чашки Петри разливают расплавленный 1-1,5%-ный агар на физрастворе по 20 мл. После застывания наслаивают 5 мп 0,6-0,8%-ного агара, содержащего 6-8% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником депают лунки, дно которых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1%-ного агара. Оптимальное количество лунок на одной агаровой пластине 6

В лунки вносят по о,1 мл 20-24-часовой бульонной культуры. Бульон засевают из расчета 1-5 млн„ спор на 1 мл среды. После внесения бульонной . культуры в лунки чашки Петри помещаю в т армостат при 37°С. Учет результатов производят через 24 и 48- ч. При помощи миллиметровой линейки измеряют- от края лунки ширину зоны гемолиза. Учитьшают ширину зоны полной прозрач- ности, так как она соответствует зоне лизиса эритроцитов.

Пример 1, В чашку Петри кали-. вают 20 мл 1%-ного расплавленного агара на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мл 0,6%-ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 6% отмытых эритроцитов ба- рана. После застьшания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно котосл

со vl

4i

31597404

рых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1%-ного агара, В лунки вносят по 0,1 бульонных культур различных Bacillus anthracis (посевная доза 1 млн спор на 1 мл среды). Чашки Петри помещают в термостат при 37 Со Через 48 ч в.отрину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с калодым штаммом измеряют при помощи миллимет-- Q ровой линейкио Результаты измерений зон гемолиза представлены в табл 1,,

э

Т а б лиц а 1

4

Q

5

0

агара на физрастворво После застьта- ния втОрьм слоем наливают 5 мл 0,8%- ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 8% отмытых эритроцитов барана. После застьшания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно которых запаивают 1 -2 каплями 1,57,- ного агара. В лунки вносят по О,1 мл 24-часовой бульонной культуры различных штаммов В. anthracis (посевная доза 5 млн. спор на 1 мл бульона). Чашки Петри помещают в термостат при . Через 48 ч ширину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помош и линейки. Результаты измерений зон гемолиза эритроцитов представлены в табл.Зо

Таблица 3

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской язвы. Цель изобретения - повышение точности способа. В лунку двухслойной питательной среды, содержащей агар и физиологический раствор (нижний слой 1-1,5 мас.% агара, верхний 0,6-0,8 мас.% с 6-8% отмытых эритроцитов барана) засевают исследуемую бульонную культуру. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 ч и выявляют наличие зон гемолиза эритроцитов вокруг колоний микроорганизмов. При наличии зон гемолиза культуру относят к гемолитически активной. 3 табл.

Пример 2. В чашку Петри наливают 20 мл 1,2%-ного расплавленного агара на физрастворе После застывания вторым слоем наливают 5 мп 0,7%- ного расплавленного агара на физраст- воре, содержащего 7% отмытых эритроцитов барана о После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно которых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1,2%-ного агара В Лунки вносят по О,1 МП 24-часовой бульонной культуры различных штаммов Б.anthracis (посевная доза 2 мпн спор на бульона)о Чашки Петри помещают . в термостат при Через 48 ч щири ну зоны гемолиза вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи ли-, нейки Результаты измерения зон гемолиза представлены в табл 2„

Т а б л:-и--ц а 2

П р е р 3„ В чащку Петри наливают 0 мл 1,5%-ного расплавленного

о п

5

5

0

5

Предлагаемый способ позволяет определять гемолитическую активность В. anthracis, тогда как по известному способу из-за плотности агара при относительно невысокой продукции гемолитических веществ агаровыми культурами В.anthracis гемолитическая активность практически не выявляется. Формула изобретения

Способ определения гемолитической активности Bacillus anthracis путем посева исследуемой культуры на плотную питательную среду с последующим инкубированием посевов в присутствии эритроцитов барана и учетом результатов по наличию зон гемолиза эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности .способа, в качестве плотной питательной среды использзпот двуслойньй агар, приготовленный на физиологическом растворе, при концентрации агара в нижнем слое 1,0-1,5 мас.%, а в верх- нем слое 0,6-0,8 масо%, при этом эритроциты барана вносят в верхний слой в концентрации 6-8% от объем а ;среды, затем в агаре формируют лунки, в которые осуществляют посев исследуемой культурыо