Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/34 

Изобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть.использовано в энзимоло- гии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве суб- /страта для определения целлюлазной активности в ферментных препаратах и биологических средах.

Цель изобретения - упрощение способа, увеличение выхода и повьшение качества целевого продукта.

Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание ак

тивного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриази- новые группы, с водонерастворимой оксиэтилцеллюлозой при 25-90 0, причем краситель берут в количестве 2- 50% от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой водой.

Пример 1. 10 г оксизтилцел- люлозы суспензируют в 100 мл О 2%- ного раствора красителя активного золотисто-желтого 2КХ, перемешивают 10 мин, вносят 20 г и продол- жают перемешивание 30 мин. Затем приливают 30 мл 6%-ного.раствора

ю to

a-ГОд12HjO и перемешивают еще () мин. Все операции проводят при 0°С. Окрашенный продукт отделяют ютьтрованием, промывают теплой водой - э исчезновения окраски в промывных эдах и высушивают на воздухе. Выод 9,6 г. j Пример 2.10 г оксиэтилцелЛfOЛOЗЫ суспендируют в 100 мл 2%-НОГО |Q

раствора красителя активного золотисто-желтого 2КХ, далее процесс проводят как в примере 1, с тем измене- уиеы, что после добавления фосфата I-атрия перемешивание осуществляют 20 мин. Выход 10,5 г.

Примерз. Юг оксиэтилцел- :кшозы суспендируют в 100-мл 0,5%- i:oro раствора красителя активного рко-желтого 53, перемешивают 10 мин, Q кносят 30 г (ц и продолжают перемешивать 30 мин. Затем приливают :Ю мл 15%-ного раствора и перемешивают еще 40 мин. Все операции проводят при . Остальные 25 операции как в примере 1. Выход 9,8 г. Пример 4.Юг оксиэтилцел- шолозы суспендируют в ЮО мл 5%-ного раствора красителя активного ярко- желтого 53, перемешивают 10 мин, вносят 30 г и продолжают перемешивать 30 мин. Затем приливают 30 мл 15%-ного раствора Na,P04-12Н2 0 и перемешивают еще 60 мин. Все операции проводят при . Остальные операции как в примере 1. Выход 12,Л г. I Пример 5. Определение цел- люлазной активности. В двух пробир- Iках суспендируют по 50 мл субстрата

(полученного согласно примеру 2) 1 в 4 мл 0,1 М ацетатного буфера, iрН 4,5, при и перемешивают 5 мин. Затем в одну пробирку прили30

40

вают 0,1 мл раствора целловиридина ГЗх с концентрацией 60 мг/мл и продолжают перемешивание. В другую пробирку также приливают 0,1 мл указанного раствора фермента и содержимое быстро пропускают через фильтр (контроль). Через 20 мин реакционную смесь в первой пробирке пропускают через фильтр и определяют оптическую плотность фильтра при длине волны 375 нм против контрольной пробы. Оптическая плотность 0,74.

Сравнительная.оценка субстратов, изготовленных согласно примерам 2 и 4 по известному способу, дана в таблице.

Формула изо

бретения

0

0

1.Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлаз- ной активности путем окрашивания целлюлозной подложки активным красителем, содержащим винилсульфоновую группу с последующим отделением несвязанного красителя промьтанием, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, увеличения выхода и повышения качества целевого продукта, в качестве целлюлозной подложки используют водонераствори- мую оксиэтилцеллюлозу, а отделение несвязанного красителя осуществляют промыванием водой.

2.Способ ПОП.1, отличающий с я тем, что окрашивание проводят при 25-90 С активным красителем, содержащим дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с содержанием активного красителя в реакционной смеси 2-50% от массы ок- сизтилцеллюлозы.

Изобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть использовано в энзимологии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве субстрата для определения целлюлазной активности в ферментных препаратах и в биологических средах. Целью изобретения является упрощение способа, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта. Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание активного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с водонерастворимой оксиэтилцеллюлозой при 25-90°С. Краситель берут в количестве 2-50% от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой дистиллированной водой. 1 з.п.ф., 1 табл.

Показатели

Значения показателей по примеру Известный J 21 А

Краситель

Характеристика красителя Активная группа

Максимум поглощения,нм Характеристика 0,1%-ного раствора субстрата в 85%- ной .

Максимум поглощения, нм Оптическая плотность

Ярко-оранжевыйЗолотисто-Ярко-желтый

ЖТжелтый 2КХ 53

Винилсульфоно-Дихлортри-Монохлоразиваяазиноваяновая490 370 4Ю

505 0,9

510 12,6

425 6,9

римеру 1

505 0,9

510 12,6

425 6,9

Характеристика 0,17%-ного гвдролизата субстрата в фементном растворе

Максимум поглощения, нм

Оптическая плотность

Выход субстрата, %

Интервал линейной зависимости оптической плотности от глубины превращения субстрата

Золотисто-желтая окраска изменяется в красную. Интервал, достигаемый при 120 мин инкубации.

Продолжение таблицы

410

6,4 124

0-4,6