Способ идентификации генотипов африканского проса Советский патент 1991 года по МПК A01H1/00 A01H1/04 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекции и семеноводству биохимической генетики, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса.

Цель изобретения - повышение точности и информативности исследования.

Способ состоит втом, чтоспиртораство- римый белок семян-пенисетин извлекается изопропиловым спиртом при нагревании и разделяется электрофорезом в пластинчатом полиакриламидном геле с последующим проявлением пенисетиновых компонентов трихлоруксусной кислотой и окрашиванием кумасси R - 250, определением мобильности каждого компонента, составлением белковых (пенисетиновых) формул линий и сортообразцов африканского проса.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка, отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 65% изопропанола, перемешивают и помешают в водяную баню на 1 ч при 60°С. После центрифугирования при 7000 g в течение 15 мин над осадочную жидкость собирают и упаривают досуха под феном. Полученный осадок растворяют в 100 мкл раствора, содержащего 8 М мочевины, 10% сахарозы, 5% 2-меркаптоэтанола и 0,6% уксусной кислоты и оставляют на 0.5 ч при комнатной температуре. Затем раствор белка нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин и наносят в 1-сантиметровый карман геля 40-50 мкл.

Электрофорез проводят в пластинках полиакриламидного геля (ПААГ) размером 110x110x1 мм. содержащего 10% акрилами- да. 8 М мочевины в качестве катализирующей системы используют аскорбиновую кислоту, сернокислое закисное железо, ТЕ- МЕД и персульфат аммония. Электрофорез ведут 30 мин при постоянном напряжении 250 В, а затем еще 4,5 ч при напряжении 400 В После окончания электрофореза гели фиксируют в течение 1 ч в 12,5% раствора трихлоруксусной кислоты, затем окрашивают в течение 2-3 ч при покачивании в 0,001 %-ном растворе кумасси R-250, приготовленном на 12,5%-ном растворе трихлоруксусной кислоты. Затем гели заливают дистиллированной водой и замеряют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) всех окрашенных белковых зон. За реперный принимают характерный, встречающийся во всех образцах мощный компонент в средней части геля, ОЭП которого условно принимают за 50. ОЭП остальных измеряют на специальном устройстве, приняв за точку отсчета верхнюю границу геля Компоненты группируют по подвижности: А - субфракция от 0 до 35: В - субфракция от 36 до 59 и С-субфракция от 60 до 100 и составляют пенисетиновые формулы для каждого генотипа (см.таблицу 1).

П р и м е р 2. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 60 % изопропанола, перемешивают и помещают в водяную баню на 1 ч 15 мин при 60°С. Остальную процедуру осуществляют по примеру 1.

ПримерЗ. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 70% изопропанола, перемешивают и помешают

в водяную баню на 45 мин при 60°С. Осталь-.

ную процедуру осуществляют по примеру 1.

Пенисетиновая формула характеризует

каждый сортообразец африканского проса.

на ее основе цифровые и буквенные (паспортные) данные можно хранить в памяти ЭВМ.

Предлагаемый способ биохимической идентификации генотипов африканского проса отличается объективностью, надежностью, экспрессностью при распознавании сортообразцов, возможностью хранения информации в памяти ЭВМ. Формула изобретения Способ идентификации генотипов африканского проса, включающий экстракцию спирторэстворимых белков из семян, их электрофоретическое разделение с получением белковых спектров и идентификацию генотипов путем анализа компонентного состава полученных спектров, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точности и информативности исследования, экстракцию проводят изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением

дисульфидных связей и при анализе компонентного состава определяют относительную электрофоретическух) подвижность каждого компонента, принимая за реперный компонент ВБО.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекции и семеноводству, биохимической генетике, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса. Целью изобретения является повышение точности и информативности исследования. Способ состоит в том. что спирторастворимые белки извлекают изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей, и идентификацию проводят по белковым формулам, располагая компоненты спектра относительно реперного компонента Bsu. 1 табл.