Способ реверсии L-форм микобактерий туберкулеза Советский патент 1990 года по МПК C12N1/00 C12Q1/02 C12N1/00 C12R1/32 

Изобретеиие относится к медицин- ;ской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза.

Цель изобрете1{ия - упрощение и ускорение способа.

Способ заключается в следующем. На чашке Петри с плотной личной средой Левенытейна-Йенсена или Финна- II платиновой петлей очерчивают окружность диаметром приблизительно 1,5 см. Стерильной пипеткой набирают культуру L-форм, выращенную из патологического материала на модифицированной среде Школьниковой, и наносят на очерченный круг в количестве 0,1-0,2 МП. Чашку Петри, помещают в - плотно закрытый полиэтиленовый мешок или пластиковый контейнер во избежание высыхания среды и инкубируют при 37®С в течение 7 сут. Через кащ;ые сутки с поверхности среды в участке

посева, строго соблкщая правила асептики, берут мазок-отпечаток. Мазок окрашивают по- Цилю-Нильсену и микро- скопируют с иммерсионным объективом

чХ :7 )) ,

Начиная со 2 сут (иногда на 4- 6 сут) на фоне некислотоустойчи вых: синих шаров L-форм появляются ки- слотоустойчивы.е1о зерна и палочковидные ст-руктуры. В некоторых сл -чаях палочковидные формы сначапа могут быть некислотоустойчивыми (синий цвет), затем в них появляются красные кислотоустойчивые зерна и проис- ходит формирование кислотоустойчивых палочковидных микобактерий..

Для получения культуры Т евертанта после недели культивирования на чашке Петри соскоб с поверхности питательной среды в месте посева переносят в жидкую среду Школьниковой с 10%

05

о

4;

оо

NU

сыворотки крупного рогатого скота или непосредственно на косяки с яичной средой Левенштейна-Йенсена или Финна-И.

Пример 1. Берут культуру L-форм микобактерий, выделенную из мокроты больного. Культуру выращивают на пол ужидкой среде Школьнико- вой в модификации Дорожковой. В мазке с исходной культуры при окраске по Цилю-Нильсену обнаружены зернистые шары L-форм микобактерий, пред- ставляюп 1е округлые образования синего цвета размером- около 5 мкм без ядра. Кислотоустойчивые микобактерий не обнаружены. Производят посев культуры на чашку Петри с яичной средой Левенштейна-Йенсена. Через каждые сутки готовят мазки-отпечатки с места посева. Уже через 24 ч в единичных шарах обнаруживают зернистые кислотоустойчивые микобактерий.

Дпя проверки воспроизводимости резуль тата способа опыт повторен через 2 мес: произведен повторно посев той же культуры, хранившейся в хопо- дильнике, на чашку Петри со средой Левенштейна-Йенсена. Через 1 сут реверсии не наблюдалось, через 4 сут в зернистых шарах Ъ-форм обнаружены кислотоустойчивые зерна, а через 6 суТ и кислотоустойчивые палочки. Этот пример демонстрирует воспроизводимость результатов способа с не- которым удлинением времени реверсии, что может быть обусловлено длительным хранением культуры L-форм, приведшим к снижению ее жизнеспособности.

После пересева с чашки Петри на жидкую среду Школьниковой, а затем после недели культивирования - на косяки с плотной средой Левенштейна- Йенсена получена культура микобактерий, дающая рост в виде гладких, пигментированных, оранжевых колоний, которая быпа идентифицирована как скотохромогенная атипичная культура

Одновременно из мокроты больного получен рост типичной культуры микрбактерий туберкулеза. Полученные даные о наличии у больного смешанной культуры микобактерий туберкулеза и L-форм микобактерий, реверсируюшях в атипичные микобактерий, позволяют изменить тактику химиотерапии.

И р и м е р 2. Культуру L-форм, №1кобактерий, вьщеленную из лимфатического узла ребенка,засевают на чашку Петри с плотной яичной средой Финна-11. При изучении мазков-от-- пёчатков, полученных через 1 и 2 сут, обнаружены лишь скопления синих некислотоустойчивых зернистых шаров. Через 3 сут зернистость теряет четкость очертаний и распадается на си- ние гомогенные облаковидные скопления , на фоне которых появляются кислотоустойчивые зерна. Через 4 сут в мазках выявляют кислотоустойчивые палочки. Через 20 дн,после пересева 5 на косяки со средой Финна-11 получен типичный рост микобактерий, иденти- фицированных как микобактерий туберкулеза человеческого вида.

При гистологическом.исследовании 0 лимфатического узла, из которого получен рост L-форм микобактерий, реверсировавших затем в микобактерий туберкулеза, в нем обнаружены лишь казеозные массы без признаков актив-. 5 ного туберкулеза.

П р и м е р 3. Культуру L-форм, вьщеленную из экссудата больного (диагноз - плеврит неясной этиологии, ВК-), засевают на чашку Петри Of, со средой Левенштейна-Йенсена. .Последующей микроскопией мазков-отпечатков с чашки выявляют появление кислотоустойчивых зерен и зернистых форм микобактерий на 4 сут после засева. После высека на яичные среды получен рост бактерий туберкулеза человеческого вида. Реверсия подтверждает специфическую этиологию процесса, позволяет уточнить диагноз дд и химиотерапевтическую тактику.

По сравнению с известным способом, предусматривающем проведение пассажей на куриных эмбрионах, предлагаемый способ более фост, не требует экспериментальных животных и позволяет в более ранние сроки идентифи1щровать L-формы микобактерий.

50

Формула изобретения

1„ Способ реверсии L-форм микобактерий туберкулеза, включающий посев исследуемого материала в полужидкую питательную среду,пересев иинкубирова- ,55 1лие культуры,ежедневный бактериоскопи- х еский контроль инкубируемой- культуры и определение наличия реверсии по появлению кислотоустойчивых форм.

51604841 6

отличающийся тем, что,культуру вносят в количестве 0,1с целью упрощения и ускорения спосо-0,2 мл локально.

ба, пересев культуры осуществляют2. Способ по п. 1, о т л и ч а

однократно на плотную элективнуюю щ и и с я тем, что в качестве

среду для микобактерий, при этом элективной среды используют среду

Левенштейна-Йенсена или Финна-.,

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Исследуемый материал подращивают в полужидкой питательной среде для микобактерий, затем культуру пересевают на плотную яичную среду, например Левенштейна-Йенсена или Финна-П. Посев осуществляют однократно, локально в центр среды, количество посевного материала 0,1-0,2 мл. Ежедневно готовят окрашенные микроскопические препараты для выявления кислотоустойчивых форм микобактерий туберкулеза. При исследовании свежей культуры, начиная с 2-4 сут, происходит реверсия L-форм. На 6-7 сут процесс реверсии завершается. 1 з.п.ф-лы.