Способ реверсии Л-форм микобактерий туберкулеза Советский патент 1986 года по МПК C12N1/00 

11

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к изучению изменчивости возбудителя туребкулеза.

Целью из.обретения является ускорение способа.

Способ осуществляют следующим об разом,

Берут 7-дневные куриные эмбрионы, путем овоскопирования определяют место расположения зародыша. Затем с соблюдением правил асептики производят заражение эмбрионов в желточный мешок культурами Л-форм микобактерий туберкулеза. Пастеровской пипеткой набирают культуру Л-форм с модифи- дированной среды Школьниковой и заправляют стерильный шприд. Посгсе чего скорлупу яйда с эмбрионом над воз- душньм пространством обрабатывают спиртом, в центре его прокалывают отверстие и прозводят заражение 0,1- 0,2 мл в желточный мешок, расположенный с противоположной стороны от зародыша. Затем отверстие в скорлупе заливают парафином и зараженные эмб- рконы помещают в термостат с температурой 35-37 С и влажностью 60-65%с По истечении одних суток отверстие над воздушной камерой вскрывают, . пастеровской пипеткой набирают часть желтка для приготовления мазков и окраски их по Циль-Нильсену, а также высева на питательные среды Ле- венштейна-Иенсена. Этим же желтком заражают свежие 7 дпевпые эмбрионы, в той лее дозе. И так в послед 5пощем до получения реверсии, которая наступает, начиная с 3-4-го пассажа. Обнаруживают ее в окрашенных мазках, где выявляются кислотоустойчивые па- лочки. Рост типичных колоний возбудителя появляется на 2-14-е сутки

dV

в зависимости от вида микобактерий туберкулеза.

Пример 1. Взята культура Л-форм микобактерий, выращенная на полужидкой среде Школьниковой в модификации И. Р. Дорожковой} вьщеленная из материала от лшвотных. При фазово контрастной микроскопии нативных пре паратов обнаружены микроструктурные элементы Л-форм в виде скоплений сфе

ВНИИПИ Заказ 4080/26 Тираж 490 Подписное Произв.-полигр, пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 0 5 о 0

5 Q

5

рических вакуолизированных элементов, шаровидных ТЕЛ ц однородной зертшстой массы, с; целью получения реверсии в желточный мешок 7-дневных куриных эмбрионов вводят О,-О,2 мл Л-культу ры. Заражение и пассаж производят по описанной методике. Через сутки из желтка зараженного эмбриона готовят препарат и окраш-1вают по методу Циль-Нильсена. Микроскопия препарата показывает наличие скоплений сферических вакуолизированпьк элементов и зернистых масс, окрашенных в синий цвет. При микроскопии мазка,- приготовленного из желтка эмбриона пассажа, просматриваются некислото- устойчивые п;1лочки различных размеров и форм. Встречаются также и скопления сферических элементов. Микроскопией мазка из эмбриона 3-го пассажа устанавливают наличие отдельных кислотоустойчивых палочек в смеси с некисло- тоустойчивьми, В препаратах пассажа кислотоустойчивость хорошо выражена. Из желтка этого эмбриона производят высевы на среду Левенштейна- Иенсена и через 14 сут наблюдают рост типичных колоний микобактерий.

Пример 2, Культурой Л-форм микобактерийJ выделенной из лимфатических узлов крупного рогатого скота, заражен 7-дневный куриный, эмбрион, Б окрашенных препаратах первого пассажа просматривают кислотоустойчивую зернистую массу и скопления шаровидных тел, окрашенпь х в синий двет. При микроскопии препарата из эмбриона 2-ГС пассажа наряду с кислотоус- точивой зернистой массой обнарз/живают некислотоустойчивые нити. При 3-м пассаже обнаружены кислотоустогЧчивые палочкк и Нити в смеси с некислото-- устойчивыми. При 4-м пассаже устаков лено наличие кислотоустойчивых бактерий. При посеве желтка из эмбриона 4-го пассажа на 20-е сутки получен рост т пичных колоний микобактерий

па плотпьк средах,

р

Использование изобретения позволяет ускорить сроки получения ревертан- тов Л-форм микобалстерий туберкулеза.