Транспортная среда для СоRYNевастеRIUм DIрнтнеRIае Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/16 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности бактериологической диагностике дифтерии.

Цель изобретения - повышение высеваемости коринебактерий из патологического материала.

Приготовление и использование среды иллюстрируется следующими примерами .

Пример 1.В1л дистиллированной воды вносят, г: казеиново- дрожжевой гидролизат 19,0; изатин 0,03; р)-аланин 0,01, нитрат железа 0,04; глюкоза 0,6; хинозол 0,0012. Устанавливают рН среды 7,4tO,2, Затем смесь нагревают до , фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл, плотно закрьшают пробирки катной

пробкой, автоклавируют при в т ечение 30 мин.

Пример 2. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах, г: кааеино- во-дрожжевой гидролизат 19,5; изатин 0,035; р -аланин 0,012; нитрат железа 0,042; глюкоза 0,65; хинозол 0,013 г.

П р и м е р 3. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах, г: казеиново-дрожжевой гидролизат 20,ОJ изатин 0,04 Ь-аланин 0,015; гситрат железа 0,045, глюкоза 0,7; хинозол 0,0014.

; Технология приготовления сухой транспортно-накопительной среды иллюстрируется следующими примерами.

С5

о

05

сд

00

ел

1606535

Пример 4. В шаровую мельницу (3-литровую),помещают 20 шаров, затем вносят, г: казеиново-дрожже- вой.гидролизат 19,0, изатин 0,03, аланин 0,01, нитрат железа 0,04 глюкоза 0,6, .кинозал 0,00.12. Мельницу закрывают для смешивания ингре- диентов, прокручивают в течение 1 ч, Затем среду фасуют в банки из темного стекла. Пример 5.В шаровую мельницу (3-литровую) помещают 20 шар , затем вносят, г: казеиново-дрожж вой гидролизат 19,5, изатин 0,033, Й-аланин 0,012, нитрат железа 0,042, глюкоза 0,65, хинозол 0,0013; Мельницу закрьтают и прокручивают в течение 1 ч. Затем среду фасуют в банки из темного стекла.

Пример 6. В шаровую мельницу (3-литровую) помещают 20 шаров, затем вносят, г: казеиново-дрожжевой гидролизат 20,0, изатин 0,04, р)-алач НИН 0,015, нитрат железа 0,045, глюкоза 0,7, хинозол 0,0014. Мельницу закрьшайт и прокручивают в течение 1 ч. Затем среду фасуют в банки из темного стекла.

При практическом использовании среды навеску в количестве 19,7- 20,8 г вносят в колбу с 1л дистиллированной воды, перемешивают, нагревают до 55±5 С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл и автоклавируют при 30 мин.

Испытание среды проводят тест- штаммами C.diphtheriae № 203, C.dip- htheriae № 611, C.diphtheriae № 4465 Staphylococcus aureus № 209-P.

Перед высевом тест-штаммов в тран портно-накопительную среду культуры коринебактерий дифтерии смьшают с физиологическим раствором и делают ряд разведений до 10, а при посеве стафилококка до 10 .

Качество среды оценивают по чувствительности и скорости роста, эффективности, ингибирующим свойствам, сохранению основных биологических свойств, выживаемости.

Для определения эффективности среды используют дифтерийную культуру, содержащую в посевной дозе 100 микробных клеток.

Показатель эффективности определяют по отношению числа колоний дифрийного микроба, выросших на плотно среде Бучина после 6-часового подра

щивания в накопительной среде, к .числу выросших колоний до обогащения. Прирост числа дифтерийных микробов при подращивании в среде обогащения равен 70-90%. Среда обеспечивает рост дифтерийных палочек при посеве 10 клеток через 6 ч выращивания при

37 С.

Среда обладает бактериостатическим действием по отношению к микробам ассоциантам. Так, из 100 тыс. засеянных м.кл. стафилококка после 6-часо- вогр культивирования в бульоне на 5 плотной среде Бучина данный микроорганизм не растет.

Культуры дифтерийных микробов в среде могут храниться в.течение 3 сут без изменения своих биологических 0 свойств (морфологию колоний, токси- генные, биохимические, серологические) ,

Эффективность среды подтверждена на клиническом материале от 2118 че- 5 ловек (617 человек больные ангинами, 1501 человек обследованы по эпид.показателям) . Тампоны с исследуемым материалом помещают в пробирки с зкид- кой средой и инкубируют в термоста30

те

6 ч при 37 С, после чего 0,1

мл

бульонной культуры высевают на чашки со средой Бучинао Чашки помещают в термостат. Учет результатов ведется через 24-48 ч, Повторный высев из 35 бульона на чашки производится через

20-24 ч.

Сравнительная высеваемость коринебактерий дифтерии на контрольной и испытуемой средах представлена в

40 табл.1.

Из данных табл.1 видно, что бактериологическая расшифровка диагноза была у 52 человек, в 51 случае коринебактерий дифтерии вьзделялись 45 на обеих средах, в 1 случае - только на испытуемой.

Результаты биологического испытания среды показали, что она не усту- пает контрольной по чувствительнос- 50 ти и скорости роста, эффективности (табл.2), селективности, выживаемости (табл.3), сохранению основных биологических свойств.

55 Формула изобретен ия

Транспортная среда для Согупе- bacterium diphtheriae, содержащая питательную основу, стимулятор роста, селективный агент, отличающаяся тем, что, с целью повьппения высеваемости коринебакте- рий из патологического материала, она дополнительно содержит нитрат железа, глю |:озу и дистиллированную воду, в качестве питательной основы она содержит казеиново-дрожжевой гидролизат, в качестве стимулятора роста - иза- тин и Ь-аланин, в качестве селективного агента - хинозол, при следуюQ535

щем количественном отношении компонентов, r/fi:

Казеиново-Дрожжевой гидролизат

Р -Аланин

Изатин

Глюкоза

Нитрат железа

Хинозол

Дистиллированная

вода

19-20 i 0,010-0,015 0,03-0,04

0,6-0,7 0,04-0,045 0,0012-0,0014

Рл

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности бактериологической диагностике дифтерии. Цель изобретения - повышение высеваемости коринебактерий из патологического материала. В 1 л дистиллированной воды вносят (г) казеиноводрожжевой гидролизата 19-20

изатин 0,03-0,04

β-аланин 0,01-0,015

нитрат железа 0,04-0,045

глюкозу 0,6-0,7

хинозол 0,0012-0,0014. Устанавливают PH среды 7,2±0,2, смесь нагревают до 55±5°С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл и автоклавируют при 110°С в течение 30 мин. Тампоны с исследуемым материалом помещают в среду и инкубируют 6 ч, при 37^С, затем 0,1 мл бульонной культуры высевают на среду Бучина. Учет результатов проводят через 24-48 ч. 3 табл.

2118

52

2,45

51

Сравнительные данные испытания среды по тесту эффективности

П р и м е ч

н и е. Приводятся данные из 5 параллельных опытов (при коэффициенте вариации, не превышающем 20%)г

Таблица 1

52

100

51

98

Т а

блица 2

71606535

Сравнительные данные роста культур C.diphtheriae по теСту выживаемости (посевная доза 10 м/кл)

Примечание, Данные приводятся из 5 параллельных опытов (при коэффициенте вариации не превьшающем 20%).

Т а. б л и ц а 3