Питательная среда для выделения патогенных нейссерий Советский патент 1982 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/36 

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВВДЕЛЕННЯ ПАТОГЕННЫХ НЕЙССЕРЙЙ

Изобретение относится к медици некой микробиологии и касается питательной среды, которая может быть, использована для выделения патогенных нейссерий: менингококка, гонококка от больных и носителей, а также длякультивирования этих микроорганизмов и изучения их культурально-бйохимических и серологических свойств.

Известна питательная среда для выделения патогенных нейссерий, содержащая питательную основу, сыворотку крови, агар-агар и воду р .

Однако известная питательная среда не обеспечивает высоких ростовых свойств.

Цель изобретения - повышение ростовых свойств среды.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для выделения патогенных нейссерий, содержащая питательную основу, сьшоротку крови, агар-агар и воду, дополнительно содержит аммонийную соль 5,5 дибром-го-крезолсульфофталеина, в качестве питательной основы она содержит казеиново-дрожжевой гидролизат при следующем количественном соотношении компонентов, г/л воды:

Казеиново-дрожжевой

гидролизат 40,8-44,0

Сыворотка крови 100,0-200,0

Аммонийная соль

10

5,5 дибром-о крезолсульфофталеина - 0,005-0,014

Агар-агар 10,2-11,0

Среду готовят следукщим образом.

Получение сухого казеиново-дрожISжевого гидролизата.

2 вес.ч. сухого казеина смешивают с 20 ч. воды. Разведение казеина ведут при постоянном перемешивании и температуре 70-80°С, при

К ,4. Затем 10%-ный вязки( раствор казеина охлаждают до температуры 48-50 С и вносят в него по одной части кормовых дрожжей и фарша подже3лудочной железы (активностью 20 ед/м по Фульд-Гроссу). После тщательного перемешив -шя устанавливают рН 7,2 7,4 с помощью 30%-ного раствора едкого натрия. Ферментативный гидроли проводят в течение 4 ч, при темпера туре 48-50 С и при рН 7,2-7,4. После истечения указанного време ни гидролизат подкисляют концентрированной соляной кислотой (уд. вес. 1,14) до ,6-3,8, затем доводят до кипения и фильтруют. После этого кислый гидролизат подщелачивают до рН 7,6-7,7, кипятят 10-15 мин и про водят вторую фильтрацию. В полученный фильтрат вносят хлористый натри и углекислый натрий (80% и 13,4%, с ответственно, к содержанию сухих веществ в гидролизате. После растворения внесенных солей гидролизат фильтруют и при температуре 60С высушивают на распьиштельной сушилке. Приготовление сухой основы среДЫ. В шаровую трехлитровую мельницу помещают 10 фарфоровых шаров, затем вносят 10,2-11,0 г тафуинского порошковидного агар-агара с проч ностью 400-500 г/см, 40,8-44,0 г. сухого казеиново-дролсжевого гщр,ролизата и 0,005-0,014 г аммонийной соли 5,5 дибром-о-крезолсульфофталеин добавляют еще 15 фарфоровых и 1 металлический шар. Мельницу закрывают и прокручивают в течение 25-30 мин. Готовую основу расфасовывают. Приготовление среды. Навеску сухой основы 51-55 г перемешивают в 1000 мл дистиллированной воды, ставят на медленный огонь, кипятят до появления крупных пузырей и разливают в склянки, автоклавируя при 115 С в течение 2030 мин. Затем основу остужают до 40-45°С и добавляют нормальную лошадиную или бычью сыворотку, 1015% для менингококкаи 20% для гонококка, перемешивают и разливают по 20-25 мл в чашки Петри и по 5 мл в пробирки (для скошенного агара)„ Среда имеет светло-зеленоватый цвет Содержание всех вьш1еперечисленных ингредиентов в среде в следующем соотношении, г/л: Казеиново-дрожжевой гидролизат 40,8-44,0 Агар-агар10,2-11,0 Сыворотка лошадиная или бычья I00,0-200„О Аммонийная соль 5,5-дибром-о-кре0,005-0,014 золсульфофталеина Дистиллированная Остальное вода (что дает кислотность рН - 7,2-7-,4) Среда в чашках Петри и в пробирках используется для посева первичного материала, подозреваемого на содержание менингококка в спинно-мозговой жидкости от больных менин- гитом и носоглоточной слизи носителей, или гонококка в отделяемом из уретры и шейки матки от больных с подозрением на гонорею, для культивирования и изучения чистых культур этих микроорганизмов. Пример 1. 0,1 МП взвеси менингококка или гонококка, содержащей условно 10 микробных клеток ( по кишечному стандарту ШСК наносят на поверхность 5 чашек Иетри с сывороточным агаром, приготовленном на предложенной среде. Для контроля делают посев на известную среду для менингококка или мясо-пептонный агар с добавками для гонококка. Учет результатов производят через 20-24 ч инкубации при З7с. Сравнительное исшз1тание сред для менингококка приведено в табл. I. Таблица 1 ства колоний на 5 агаровых пластинах в двухопытах Приведенные в табл. 1 данные показывают, что предлагаемая среда (КДА) является более оптимальной для развития менингококка, чем агар О Так, при коэффициенте вариации (./i не превьш1ающем 20%, средняя арифметическая (Х) числа выросших колоний двух штаммов менингококка на предложенной среде составляет 111171 колоний, тогда как известная среда - агар D обеспечивает рост колоний в пределах 70-82. При срав нении полученных данных разница оказалась значимой . (t 2) в пользу предлагаемой среды. Как видно из данных табл. 2, на предложенной среде средняя арифметическая выросших колоний превышает таковое на известной среде сьтороточном мясо-пептонном агаре с добавками. При посевной дозе 1000 микробных клеток на предложенной среде вырастает. 12-276. колоний, известной - 107-185 колоний Разница мелщу средними показателями сравниваемых сред оказалась зна чимой в пользу предложенной среды (штамм Богомолов), для штамма 2 ср ды оказалась равнозначной. В табл. приведено сравнительное исгытание сред для вьщеления гонококка. Т а б л иц а 2 Богомолов Пример 2. 220 проб носогл точной слизи от лиц, бывших в конт те с больными менингококковым мени гитом, параллельно высевают в чашк Петри на предложенную и известную среды. При посеве чередовались. Вс го выявлено 90 носителей. На предл женной выявлено 88 положительных находок, а на известной всего 48, причем совпадений на обеих средах было 46. Предложенная среда дала 47,7% дополнительно положительных находок к известной среде. Пример 3. 35 образцов гно из уретры и шейки матки от больных с подозрением на острую гонорею па раллельно засевают на предложенную и известную среды. Пробирки с засеянными средами помещают в зксикатор, содержащий 5-7% углекислого газа. Из 35 посевов одновременно на опытной и контрольной средах было получено 27 совпадающих положительных находок. Предложенная среда обеспечила дс полнительно еще 4 положительных результата. Пример 4. Штаммы менингококка, подлежащие серологическому группированию, параллельно культивируют в пробирках на предложенной и известной средах. 26 культур менингококка были испытаны на их способность агглютинироваться (РА) группоспецифическими антисыворотками и в реакции преципитации (РП) на содержание группоспецифического полисахаридного антигена. В РП удалось определить серогруп- пу у 19 штаммов, причем у 14 из них на обеих средах результаты группирования совпали, у 4 штаммов серо-группу определяют во взвеси культуры, выращенной на предложенной и только у 1 - на известной. В РА удалось группировать 20 культур, в 11 случаях совпали результаты на двух средах, в 5 - с опытной среды и в 4 - только с контрольной. Следовательно, культурирование штаммов менингококка на предложенной среде не снижает их способность группироваться антисыворотками в РА и РП по сравнению с культурами, выращенными на известной среде. Пример 5. Сахаролитические свойства менингококка и гонококка на предложенной среде с добавлением сыворотки, 0,9% углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза, левулеза), и фенолово-красного индикатора проявлялись более четко, чем на контрольных средах того же состава, но приготовленных на основе перевара Хоттингера или агара D для менингококка и мясо-пептонном агаре с добавителями для гонококка. Преложенный способ позволяет повысить ростовые свойства среды. Общая экономическая эффективность при вьшуске предлагаемой среды взамен сред, рекомендуемых практически лабораториям для вьщеления менингококка и гонококка составит 237250 руб Формула изобретения Питательная среда для выделения патогенных нейссерий, содержащая питательную основу, сыворотку крови, агар-агар и воду, отличаю 9070698

щ а я с я тем, что, с целью повы- Сыворотка крови 100,0-200,0 тения ростовых свойств среды, она до- Аммонийная соль полнительно содержит аммонийную5-5 дибром-о-кресоль 5i5 дибром-о-крезолсульфофтале- золсульфофталеина 0,005-0,014 ина, в качестве питательной основы s Агар-агар10,2-11 О

она содержит казеиново-дрожжевойИсточники информации,

гидролизат при следующем количест-принятые во внимание при экспертизе венном соотношении компонентов,.1, Лабинская А.С. Микробиология

г/л воды:с техникой микробиологических исслеКазеиново-дрожжевойЮдований. М., Медицина, 1972,

гидролизат 40,8-44,0с. 447, пр. 26.