Питательная среда для культивирования вакцинного штамма GeRSINIa реSтIS EV-76 Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 A61K39/10 

Изобретение относится к №;кробио- логии, а именно к пол 11ению живьк сухих вак191н для профилактики чумы. Целью изобретения является повышение устойчивости штамма EV-76 к лиофилизации.

Штамм Y. pestis EV-76 получают на питательной срепе, содержащей компоненты, г/л:

Автолизат селезенки15-16

Гидролизат белка пшеничных отрубей5-6 Натрий хлористьй 0,1-0,5 Р1атрий сернокисльй 0,1-0,01 Агар японский пластинчатый или корсаковский 1,5-2,0 Вода дистиллированная До 1 л Пример 1. Устойчивые к лио- филизации штаммы Y.pestis EV-76 получают на искусственной питательной среде, которую готовят следующим образом: берут 15 г сухого автолизата селезенки, добавляют сухой гидролизат белка пшеничных отрубей 5 г,натрий хлористый 0,1 г, натрий сернокислый 0,1 г, агар японский пластинчатый или корсаковский 1,5 г, твин 40- 0,001 г, твин 80 - 0,001 г, хлорис- Tbrfi или азотнокисльп кальций 0,0005г. Разбавляют дистиллированной водой до 1 л, устанавливают рИ 7,4. Смесь об- рабатывают в автоклаве текучим паром. Готовую среду- фильтруют через марлю, устанавливают рН 7,1, разливают в посуду и стерилиз тот при 0,7 атм (115 С) 20 мин. Затем в готовую среду стерильно добавляют тиомочевину в количестве 0,0005 г/л (тиомочевина

о:

00

4

00

ел

разлагается при автоклавировании). lliiaMMhi, полученные на этой среде, лиофилизируют с применением затцитной среды, состоящей из сахарозы 10%, же ллтины 1%, тиомочепины 1%. Ампулы с вакциной вскрывают, ресуспензируют охлажденным до +5°С физиологическим раствором и высевают нл агар Хоттин- гера для подсчета леизнеспособных клеток. Устойчивость к лиофилизации штамма Y.pestis EV-76, культивируемого на оптимизированной среде, увеличивается в 5 раз, по сравнению с ис- пользонанием прототипа.

Результаты представлены в таблице (жизнеспособность клеток Y.pestis EV-76 после лиофилизации в зависимости от концентрации предлагаемых добавок к среде СО) .

Пример 2. Штаммы Y.pestis V-76 получают на питательной среде, которая в отличие от среды, описанно в примере 1, содержит компоненты в следующих соотношениях, г/л:

Лвтолизат селезенки15,5

Гидролизат белка пшеиич- ньгх отрубей5,5

Натрий хлористьй0,3

Натрий сернокислый0,5

Лгар японский пластинчатый (или корсаковский) Твии 40 0,05 Твин 80 0,05 Хлористый кальций или азотнокислый Кальций 0,001 Тиомочейина 0,001 Дистиллированная вода До 1 л Тиомочевину добавляют ех tempore стерильно.

Устойчивость штамма к лиофилизации после культивирования на данной среде увеличилась вдвое.

Пример 3. Устойчивые к лиофилизации штаммы Y.pestis EV-76 получают на питательной среде, содержащей , г /л:

Автолизат селезенки16

Гидролизат белка пшеничных отрубей6 Натрий хлористый0,5 Натрий сернокислыйО, 1

Агар японский гишстинча- ТЫ11 (и.пи корсаковский)2,0

Твпн 400,01

Твин 800,01

Хпористып или а: с1тнокис- JI ый к а л I IЦ1 и0,002

Тиомочевина0,002

Дистиллированная водаДо 1 л

Тиомочовину добавляют ех tempore

стерильно.

Устойчивость к лиофилизации штамма Y.pestis EV-76 после культивирования на этой среде увелич1и1ась в 3 раза по сравнению с использованием известной среды.

Таким образом, культивирование штамма Y . pest is EV-76 на оптимизированной пигательной среде позволяет в 2-5 раз увеличивать устойчиность штамма Y.pestis EV-76 к лиофилизации. Параллельно с увеличением устойчивости выход биомассы на предлагаемой среде возрастает на 60-70%.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования вакцинного штамма Yersinia pest is EV-76, содержащая автолизат

селезенки, гидролизат белка пшеничных отрубей, натрий сернокислый, натрий хлористьй, агар и воду, о т- л и ч а юша я с я тем, что, с целью повышения устойчивости штамма к

лиофилизации, среда дополнительно со- твин 40, твин 80, тиомочевину, хлористый калыдай или азотнокисльоЧ кальций при следующем содержании компонентов, г/л:

Автолизат селезенки 15-16

Гидролизат белка

пшеничных отрубей5-6

Натрий хлористьй0,1-0,5

Натрий сернокислый0,01-0,1

Твин 400,001-0,01

Твин 80 .0,001-0,01 ХлористьпЧ кальций или азотнокисльй

кальщ1й .0,0005-0,002 Тиомочевина0,0005-0,002 Агар1,5-2,0 Вода дистиллированнаяДо 1 л

Твин 40 - О, 1 Твин 80 - О,1

СаС или СаСО, О, Тиомочепииа О,1

Предлагаемый оптимизированный вариант среды

Твин 40 - 0,005

Твин 80 - 0,005

или Ca(NOj) 0,001

Тионочепииа 0,001

Твин 40 - 0,0001

Твин 80 - 0,0001

CaCl2 или Ca(NO)2 0,0001

Тиомочевина 0,0001

Среда СО прототип

без добавок

40-50

23,3±1,7

70-90

37,3±1,3

40-50

11,4±1,3

30-50

16,0±1,68

Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению живых вакцин для профилактики чумы. Питательную среду, содержащую автолизат селезенки, гидролизат пшеничных отрубей, модифицируют, включая в нее твин 40, твин 80 тиомочевину, ионы Са. Предлагаемые добавки повышают устойчивость штамма JERSINIA PESTIS EV-76 к лиофилизации. Эта среда позволяет увеличить выход биомассы с единицы объема. Данная среда может найти применение при производстве живой сухой чумной вакцины. 1 табл.