Способ приготовления питательной среды для культивирования клубеньковых бактерий Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 

1

(21)4454507/31-13

(22)04,07.88

(46) 23.12.90. Бюл. № 47

(71)Институт микробиологии АН УзССР

(72)Г.Д.Золотилина, Р.Ш.Шоякубов и И.Д.Джуманиязов

(53)631.816.211 (088.8)

(56)Теппер Е.З., Шильникова В.К,, ПереверзневаТ.Н. Практикум по микробиологии. М., 1-972, с. 64.

(54)СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ

(57)Изобретение относится к биотехнологии и касается способа приго-. товления питательной среды для культивирования клубеньковых бактерий. Целью изобретения является повышение

выхода клеток клубеньковых бактерий. Способ заключается в использовании в качестве источника азота минеральных и ростовых соединений биомассы водного растения пистии телорезовидной и источника углерода - сахарозы или иного соединения. Биомассу пистии телорезовидной в количестве 40,0 - 50,0 г/л измельчают, заливают кипящей водой, настаивают 2-4 ч, полученный настой фильтруют, доводят до 1 л, вносят сахарозу и стерилизуют. Приготовление питательной среды данным способом позволяет в 2,3 раза повысить выход ктеток клубеньковых бактерий при культивировании Rhizobium meliloti по сравнению с известными средами. 2 табл.

Q

(/;

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа приготовления питательной среды для культивирования клубеньковых бактерий. Целью изобретения является повышение выхода клеток клубеньковых бактерий. Способ заключается в использовании в качестве источника азота минеральных и ростовых соединений биомассы водного растения пистии телоризовидной и источника углерода - сахарозы или иного соединения. Биомассу пистии телоризовидной в количестве 40,0-50,0 г/л измельчают, заливают кипящей водой, настаивают 2-4 ч, полученный настой фильтруют, доводят до 1 л, вносят сахарозу и стерилизуют. Приготовление питательной среды данным способом позволяет в 2,3 раза повысить выход клеток клубеньковых бактерий при культивировании RHIZOBIUM MELILOTI по сравнению с известными средами. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа приготовления питательной среды для культивирования клубеньковых бактерий.

Целью изобретения является повы- шение.выхода клеток клубеньковых бактерий.

В способе приготовления питательной среды в качестве источника азо-. та, минеральных и ростовых соединений используют биомассу водного растения пистии телорезовидной, источника углерода - сахарозу или другой субстрат при соотношении компонентов, г/л: . Пистия телорезовидная 40-50,0

Сахароза 10 - 20,0 Вода; .Остальное

Биомассу пистии телорезовидной измельчают, заливают кипящей водой, настаивают 2-4 ч. Полученный водный настой пистии телорезовидной фильтруют, доводят до 1 л, вносят сахарозу и стерилизую .

Нативная биомасса пистии телорезовидной на абс. сух. массу содержит, %: сырой протеин 32,75} клетчатка 16,7; водорастворимые полисахариды 6,4, жир, кальций, фосфор, калий 2,OJ бёзазотистые экстрактивные вещества, микроэлементы, витамины.

Ф

У1

-J

О5

Водный настой-из 50 г пистии те- лорезовидной, отфильтрованный и до- в€1денный до 1 л, представляет зеленовато-коричневую прозрачную жидкость с рН 8,0, содержит, %: сухие вещества по рефрактометру 1,0 редуцирую- Ще вещества 0,02% общий азот 1.1.

Пример 1. Для приготовления

1 л питательной среды 50 г мелко нарезанной пистии телорезовидной заливают кипящей водой, настаивают 2 ч. По|лученный настой фильтруют, доводят дс 1 л, вносят сахарозу в количестве 2d,0 г и стерилизуют.

: На указанной среде культивируют ... бактерии Rhizobium meliloti 443а.

Культуру клубеньковых бактерий лкцерны Rhizobium meliloti 443а-поддерживают и первоначально вьфащивают на1 скошенном бобовом-агаре рН 6,8-7,0 в |течение 3 сут при 26-28°С в термо- с т|ат е,

I Необходимые объемы лосевной куль- ту|ры готовят путем последовательных ст|упенчатых пересевов культуры в кол- бь1 Эрленмейера с большим объемом средь) (рН 6,8-7,0) глубинным культивированием в условиях на качапке со скоростью 190 об/мин в течение 3 сут пр:и 26-28°С и jB ферментере при интенсивности аэрации 0,59 л/мин и ско- рс|сти механического перемешивания 5CJO об/мин в течение 36-72 ч. Куль- тфирование проводят по следующей те|хнологии: косячок выросшей культу- рь| сливают в колбочку объемом 250 мл с 150 мл бобовой среды, рост на ка- ча|лке при 26-28°С в течение 3 сут. 7н10 мл вьфосшей культуры переносят в колбу с 100 мл среды из пистии рН 6,8-7,0, 26-28 С, культивируют 3 сут. 30-50 мл культуральной суспензии переносят в колбу с 500 мл среды иг пистии рН 6,8-7,0, 26-28°С, куль- тк вир уют 3 сут.

Количество инокулюма для внесения в ферментер 7-10% от объема среды с титром клеток 50 мпн/мл. Титр клеток клубеньковых бактерий после 48 ч куль- ти вирования 72,0 млрд/мл.

Пример 2. Для приготовления 1 л питательной среды 50 г мелко на- ре:занной биомассы пистии телорезовидной заливают кипящей водой, настаивают 4 ч. Полученный настой фильтруют, доводят до 1 л, вносят сахарозу в количестве 20,0 г и стерилизуют. Посевной материал - двухсуточную глубинную культуру Rhizobium meliloti вносят в охлажденную простерилизо- ванную среду. Условия культивирования аналогичны примеру 1,

Выход конечного продукта 75 млрд клеток в 1 МП среды.

Пример 3. Готовят питательную среду следующ его состава, г/л 10 воды: пистия телорезовидная 30,0, сахаррза 15,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток Rhizu- bium meliloti 443а 22,0 и 27,0 млрд/мл соответственно.

15П р и м ё р 4. Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 40,0; сахароза 15,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток клубень- 20 ковых бактерий Rhizohium meliloti 443а 38,0 и 43,0 млрд/мл.

Пример 5. Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 50,ОJ 25 сахароза 10,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток Rhizobium meliloti 443а 51,0 и 65,0 млрд/мл. Пр.и мерб. Готовят питательную-среду следующего состава, г/л 30 воды: пистия телорезовидная 50,ОJ

сахароза 15,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток Rhizubium meliloti 443а 59,0 и 68,0 млрд/мл.

Пример 7. Готовят питатель- ную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 30,0; сахароза 20,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток Rhizobium meliloti 443а 32,0 и 34,0 млрд/мл. 40П р и м е р 8. Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 40,0{ сахароза 20,0. Время настаивания пистии 2 и 4 ч, титр клеток Rhizobium 45 meliloti 443а 49,0 и 55,0 млрд/мл.

Пример 9. Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 75,0 сахароза 20,0. Время настаивания пис- 50 2 и 4 ч, выход клеток 73,0 и 75,0 млрд/мл.

П р и м е р 10, Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: пистия телорезовидная 50,О| вода 1л.

Культуры клубеньковых бактерий на водном настое пистии при рН 8,0 не растут. Подкисление настоя до рН 6,8 способствует росту культуры

и через 4а ч культивирования численность Rhizobium meliloti 443а составляет 2,8 млрд/мл.

Пример 11. Готовят известную питательную среду на отваре бо- бовых растений (фасоли) с добавлением сахарозы. Титр клеток - Rhizobium meliloti -ААЗа при культивировании в тех же условиях 32,0 млрд/мл.

Выход целевого продукта приведен в табл. 1.

Пример 12. Настой пистии телорез овидной может быть использован с другими источниками углерода.

Сравнительная оценка пригодности ее для культивирования Rhizobium meliloti штамм 44За с различными источниками углерода в условиях роста на качалке представлена в табл.2. Данные показывают, что меласса, кукурузная патока могут быть использованы в составе среды наряду с такими источниками углерода как сахароза, пищевой сахар. Как видно из табл.1, время настаивания пистии тело резовидной не играет роли. Использование 30 г пистии для настоя -является недостаточным, чгйбы получить высокий

10

50,0

0

51

5

0

5

766

титр клубеньковых бактерий, а более 50 г не увеличивает их численность и , одновременно повышает вязкость настоя, ухудшает фильтрацию.

На среде с пистией телорезовидной титр клеток увеличивается в 2,3 раза по сравнению с известной боковой средой при тех же условиях культивирования.

Таким образом, способ приготовления.среды с настоем пистии телорезовидной позволяет повысить выход целевого продукта - титра спор клубеньковых бактерий Rhizobium meliloti.

Формула изобретения

Способ приготовления питательной среды для культивирования клубеньковых бактерий, предусматривающий приготовление водной вытяжки из растительного сьфья с последующим смешиванием с источником углерода, о т, л и ч а ю - щ и и с я тем, что, с целью повышения выхода клеток клубеньковых,бактерий из растительного сырья,используют пистию телорезовидную в количестве 40-50 г/л..

Таблица 1

2,8

Титр клубеньковых бактерий, ./мл

Степень утилизации PBj %

Т а б л и . ц а 2

5-6 5-6 7-8 4-5

62,0 50,0 2,4