Способ получения 1,3,4-тиадиазол-2-цианамида или его фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1990 года по МПК C07D285/12 

Изобретение касается способа полу- чення 1,3,4-тиадиазап-2-1щанамида формулы

YNH-CN N-N

(I)

юга его фармацевтически приемлемых солей, обладающих ценными фармаколо- гич ее кими СЕ ойс т вами.

Цель изобретения - получение ново- го производного 1,3,4-тиадиа зола.

имеющего преимущества перед известным аналогом подобного действия.

Пример 1. 1,3,4-Тиадиазол-2- цианамид.

А. Бензилирование 2-амино-1,3,4- тиaдиaз(:шa.

Смесь 101 г 2-амино-1,3,4-тиадиазола, 650 МП н-пропанола и 140 мл бен- зилбромида нагревают в колбе емкостью 2 л. Когда температура реак.- циоиной смеси достигнет 88°С, весь 2-ам1 но-1,3,4-тиадиазол переходит в

05 О5

сл

;о

см

раствор. При 98°С раствор начинает кипеть с обратным холодильником и колбу извлекают из нагревательной рубашки, а затем помещают в водяную баню с тем, чтобы регулировать процесс дефлегмации. Дополнительную порцию в 250 МП н-пропанола добавляют для того, чтобы поддержать текучесть смесь и смесь перемешивают в течение 2 ч, нагревая до тех пор, пока необходимо поддерживать температуру So С Затем смесь охлаждают до 30 С. Продукт, 4-имино-3-(фенилметил)1,3,4- тиадиазол бромгидрат, собирают, промывают н-пропанааом и сушат на воздухе. Выход 190 г (707), т.пл. 200..

В. Реакция с цианбромидом.

В перемешиваемую смес1 146 г бромгидрата 4-имино-3-фенилметил- 1,3,4-тиадиазола, 1 л воды и 1 л зтилацетата добавляют 44 мл 50%-иого раствора (проценты весовые) гидрата окиси натрия в воде для того, чтобы растворить тиадиа зол оный исход п;,ш материал. Затем водный слой отделяют и сливают. В оставшийся раствор в этилацетате добавляют 800 Nm воды, содержа1 1ей 84 г бикарбоната натрия.

В этот раствор по каплям в i eMe- ние 25 мин добавляют раствор 56,3 г цианбромида в 150 мп зтилацетата. Смесь перемеигивают еще 30 мин. Зател водный слой отделяют и смешивают. Оставшийся зтилацетатный раствор промывают 200 нп воды. Для того, чтобы ускорить разделение слоев, добавляют насьш1енный солевой раствор, затем водный слой отделяют и сливают. 3toT ацетатный раствор концентрируют до одной трети его первоначального объема и добавляют 100 мп толуола. Затем эту смесь концентрируют до примерно одной трети ее первоначального объема и добавляют еш.е 100 МП толуола. Такую процедуру концентрирования повторяют несколько раз,в результате чего получают искомый (З-фенилметил-1,3,4-тиадилзол-2 (ЗН)-илиден) цианам Д в виде осадка, который отделяют ()пльтрацией, его промывают толуолом и сушат, выход 57,7 г (50,6%).

С. Дебензилирование.

li ecTb эквивалентов (7,4 г) тонко измельченного хлорида алюминия добавляют в смесь 2,0 (З-фенилметил-1 ,3,4

0

5

0

3

0

5

0

5

т11адиазол-2(ЗН) -илиден) цианамида в 50 мл метиленхлорида. Смесь перемешивают в течение 2ч и добавляют 50 г-ш ТГ. Затем смесь сливают в 50 мл холодной воды, перемепшвают 10 мин и подвергают фильтрации с тем, чтобы удалить нерастворимые материалы. Затем в смесь добавляют примерно 5 г хлорида натрия, чтобы ускорить разделение слоев и слой ТГФ (тетрагидрофурана) отделяют. В водный слой добавляют дополнительно Соли и осуществляют две экстракции с использованием порций в 25 мп 11Ф. Слой ТГФ соединяют, сушат при помок сульфата магния и концентрируют до получения твердого вещества. В это твердое вещество добавляют порцию в 25 мл метиленхлорида, затем твердое вещество собирают, сушат, в результате чего получают 0,91 г 1, 3 ,4-тиадиазсш-2-цианамида (выход 78%) , которыу , как установлено при noMODin жидкостной хроматографии при высоком давлении, имеет частоту 96,7% (т.пл. 155 С, разл.) .

Как было установлено, целевые про- дуктЕ., описанные sbmie, обладают противовирусной активностью в С1андарт- ных испытаниях, могут быть использованы для лечения или профилактики 1аболенаний, которые вызываются раз- ))ообразныг-1и вирусами и н настоящее время имроко распространены. К об- ишм вирусам, против которых, как было установлено, тиадиазолы являются активными, относятся все испытанные штаммы А и В гриппа, включая та- Rue штаммы гриппа, как А-Энн-Эрбор; А-Гон-Конг; В-Великие Озера, В-Тай- вань, В-Ч ингапур, А-Бразилия, А-Те- хас , Л-Фуку 1Ина, В-Мэри-Лэнд и. т.п. К другим вирусам, против которых можно использовать способ настоящего изоС фетения , относятся Пара-Грипп, Респираторные Синш- тиальные Вирусы, различные штаммы лишая I и II, вирусы Е( и Уассиниа, кори, Hmlini Forest, а также те вирусы, которые приводят к синдрому приобретенного иммунного дефицита.

Тиадиазоловые противовирусные агенты, являющиеся предметом предлагаемого изобретения, проявляют свою активностьпротив упомянутых выше вирусов как в лабораторных усл овиях, так и при испытании на жипотном организме. Осс Оенно деталь})о исс лслонана их ак516

тивность в животном организме против гриппа А-Энн-Эрбор.

Исследование по уменьшению пятен обеспечивает количественную оценку ингибиторов размножения вирусов в культуре клеток ткани в лабораторной системе.

В этом испытании восприимчивые МОСК-клетки выращивали в 25 см колбах Фалькон при температуре в среде 199 вместе с 5% инактивирован- ной сыворотки плода теленка (СПТ), пени1щллином (300 ед./мл) и стрептомицином (300 мг/мп). После образования слившихся монослоев среду для выращивания извлекали и в каждую колбу добавляли 0,3 мл разбавленного соответствующим образом вируса. После адсорбции в течение 1 ч при комнатной температуре на поверхность с зараженными клетками наносили равные части 1% Агара и 2% среда 199, 2,5 СПТ, пенициллин и стрептомицин, варьируя при этом концентрации испытываемого соединения, содержащегося в агаровом накрывающем слое. Эти соединения растворяли в диметил сульфо- окиси (ДМСО) в концентрации 10000 мг/мл а затем порцию разбавляли до необходимой концентрации рри помощи смеси агаровой среды. Колбы инкубировали до тех пор, пока контрольные колбы не указывали иа оптимальный размер пятна (2-10 мм). Раствор, содержащий 10% формалина и 2% ацетата натрия, добавляли в каждую колбу с тем, чтобы инактивировать вирус и зафиксировать лист с клетками на пластиковой поверхности. Пятна считали после окрашивания окружающих клетки областей кристаллическим i фиолетовым красителем. Результаты, полученные для колб

10

)5

20

25

30

5

0

196

дублетов для каждой концентрации, усредняли и сравнивали с контрольными колбами. Ингибирование образования пластинок на 50% () оценивали при помощи нанесения на график всех результатов с ингибированием в области 10-90%. Результаты, полученные для трех штаммов гриппа, собраны в табл.1

В серии испытаний на живом организме группы из восемнадцати мьшей вида СЛ-1 заражали фиксированной заранее дозой штамма гриппа А-Энн-Эрбор. Затем вводили заранее фиксированную доз,у тиадиазола, а одной из групп вводили только растворитель и она играла в дальнейшем роль контрольной группы.

Испытание продолжали 10 дней. Фиксировали количество животных, погибших в каждой rpi-nne каждый день. Жи- яотные, которые остались живыми на конец 10-го дня, рассматривались как выжившие. Для анализа полученных данных затем использовали метод индекса вьокивания, а именно анализ выполняли следующим образом.

На основании данных, полученньк для контрольной группы, величину индекса выживания (, ) ставили в соответствие каяздому дню (X), начиная с того дня, в который быпа зафиксирована гибель первого животного в контрольной группе (в общем случае этот день ), и такие вычисления проделывали до 10-го дня. Величину индекса выживания для того дня, в которой быпа тафиксирована первая гибель животного, определяли равной нулю. Аналогичные значения для остальных дней до 10-го дня рассчитывали с использованием следующей формулы:

Изобретение касается гетероциклических веществ и, в частности, получения 1,3,4-тиадиазол-2-цианамида или его фармацевтически приемлемых солей, обладающих антивирусной активностью. Цель изобретения - создание новых, более активных веществ указанного класса. Синтез ведут дебензилированием (3-фенилметил-1,3,4-тиадиазол-2(3H)-илиден)цианамида с помощью ALCL₃ с последующим выделением целевого продукта или превращением его в нужную соль обработкой соответствующим органическим или неорганическим соединением. Новые вещества малотоксичны, активны к вирусам гриппа типа A и B, Гон-Конг, лишая I и II, кори, а также к вирусам, приводящим к синдрому приобретенного имунного дефицита. 3 табл.

ИВ

День X

(X Количество контрольных животных,

.погибших в день X - 1. ни .

TJ + ИВд5,,Ь

Общее количество контрольных животных

Например, если первым днем, в который погибли контрольные животиые, является четвертый день, и А из 18 контрольных животных погибли иа пятый день, то ИВдр О, а

ИВде„ь5 (5 - 1) fg, О 0,66.

Величину индекса выживания для ви- жипших животных (п.кы. же рассчитывали на основании данных для контрольных животных, используя формулу

10

Количество контрольных животных, погиб1шх на 10-н день

Общее количество контрольных животных

Полученную в результате совокупность рассчитанных значений индекса затем использовали для установления соответствия между усредненными значениями выживания и как контрольной группой, так и каждой группой испыты- ваемых животных; с этой целью использовали следующую процедуру. Усреднен- ное значение выживания для контрольной группы ;„ рассчитывали при помощи умножения каждого значения ИВденьХ количество контрольных животных, погибших в соответствующий день X, при помощи умножения значения ИВ,рНа количество выживших животных, последующего су1 {мирования этих произведений и деления полученной суммы на обп(ее количество конт-

ИВ для обраб.жив. - ИВ для контрол .жив .

Р

ИВ для выжив.жив. - ИВ для контрол.жив.

Используя эту формулу, если среднее значение выживания для обработанных животных только равно среднему значению выживания, для контрольных животных, , что Р 0%. Если же среднее значение вьпкивания для

Р, %ОА

20 (или меньше) - 1 (крайнее значение)

20-40 2 (слабая активность)

40-60 3 (средняя активность)

60-80 4 (хорошая активность)

80-100 5 (очень сильная активность)

Данные сравнения активности in

vivo 2-амино-1,3,4-тиадиаэола, 1,3,4- тиадиазол-2-ц1 анам11да и натриевой со- ли 1,3,4-тиадиазол-2-цианамида по отношению к щтаммам вируса грип- ha А-Энн-Эрбор и В-Гон-Конг. Цан- ные in vivo, полученные и п кэана- лизированные с использованием опи- санной вьше методики, приводятся в табл.2 и 3 .

Табл.2 описывает активность in vivo трех вьш еуказанных соединений относительно гриппа А-Энн-Эрбор. В табл.2 описано испытываемое сое ИВдеиью

рольных животных. Усредненное значение выживания для обработанной группы ИВ„..„ .рассчитывали при помо- оьрав, ,

щи умножения каждого значения ИВ.р„, на количество обработрнных животных, погибимх в соответствующий день X, при помощи умножения ИВ ,1 . на ко-пичество выживших обработанных животных, последующего суммирования этих произведений и деления полученной суммы на общее количество обработанных живот11ьгх, I

В последующем сравнение с контрольной группой осуществляли при помощи расчета по следующей формуле, в которой Р равно максимуму в процентах .

Jf 100.

обработанных животных равно значению индекса выживаш я для выживших животных;, тогдя значение Р 100%.

Этот максимум в процентах затем переводт;ят в относительный индекс активности ОА следующим образом:

динение метод, используемый для введения проверяемого соединения, вводимая доза и полученные результаты в виде Р и RA (индекс относительной активности, 5 - наиболее активное, 1 - наименее активное, причем Р и RA соответственно опредепены). Табл.3 описывает активность in vivo двух из указанных вьшш соединений по отношению к гриппу Гон-Конг. Информация в колонках табл.З аналогична информации табл.2.

Соединения проявляют низкую токсичность по отношению к живым организмам.

Формула изобретения Способ получения 1,3,А-тиадиазол- 2-цианамида формулы

ITYNH-CN N-N .

ИЛИ его фармацевтически,приемлемых солей, отличающийся

тем, что дебензилируют (3-фенилме- тил-1,3,4-тиадиазап-2(ЗН)-илиден) цианамид с использованием хлористого алюминия в качестве дебензилирую- щего агента с последующим необязательным переводом полученного целевого продукта в фармацевтически приемлемые если взаимодействием с coot- ветствукицим органическим или неорганическим основанием.

Таблица 1

Оральный Оральный

ТаблицаЗ

8 2

100,0 89,7

5 5