Способ получения гиалуроновой кислоты Советский патент 1990 года по МПК C08B37/08 

Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к способу получения гиалуроновой кислоты (ГУК), которая может быть применена в качестве субстрата при количественном определении ферментов гиалуронидазного действия - лидазы и ро- нидазы, в также в медицине в качестве ранозаживляющего средства и про- лонгатора действия различных лекарственных средств.

Цель изобретения - повышение качества целевого продукта и упрощение способа.

Пример 1. Петухов в возрасте от 6 мес до 1 г. с крупными гребнями полностью обескровливают путем вскрытия сонной артерии, гребни срезают у основания, промывают водой, концы гребней, пропитанные кровью, срезают и отбрасывают.

со to

1 кг отпрепарированных гребней измельчают дважды на мясорубке, разбав ляют 2 кг воды (соотношенрге 1:2) и нагреиают при 90 с в течение 1 мин, затем охлаждают при 4 с в течение 2ч, всплывший на поверхность слой липидов тщательно снимают и отбрасывают, остаток фильтруют через марлю, к фильтрату добавляют 10 г (1% к массе исходного сьфья) активированного угля и перемешивают в течение 1 ч. Смесь фильтруют, осадок бел ков отбрасывают, а фильтрат присоединяют к осадку сырья, который предварительно разбавляют 2 кг воды (соотношение 1:2), содержащей 0.5 г пенициллина (0,05% к массе исходного сырья), и проводят экстракцию при 20 С в течение 18 ч. Экстракт фильтруют через марлю, осадок сырья снова заливают 2 кг воды (соотношение 1:2) содержащей 0,5 г пенициллина, и экстрагируют при в течент-ге 18 ч, Зкстракт фильтруют, фильтраты от первой и второй экстракции соединяют и сушат сублимацией. Получают 38 г (выход 3,8% к масс-е исходного сырья). ГУК с содержа шем белка 0,5%, растворы которой не теряют своей вязкости при хранен 1и порошка, з течение 1 г о

П р. и м е р 2« 1 кг отпрепарированные, как указано в примере 1, пе- т -дпиных гребней изм эльчают цважр;ы на мясорубке, разбавляют 2,5 кг воды (соотношение 1:2,5), и нагревают при в течение 1,5 IVMH затем дают при 5 С в течение 3 ч, всш)ъ1в- ший на поверхность слой липидов тщательно снимают и отбрасывают, остаток фильтруют через марлю, к рату добавляют °15 г (156% к массе исходного сырья) активи ованного угля и перемеошвают в течение 1,5 ч, Смесь фильтруютр осадок белков отбрасывают, а фильтрат присоединяют к осадку, которьй предварительно разбавляют 2,5 кг воды (соотношение 1:2,5), содержащей 0,6 г пенициллина (0,06% к массе исходного сьфья), и проводят экстракцию при 21°С в течение 21 ч, Зкстракт фильтруют через марлю, осадок сырья снова заливают 2,5 кг воды (соотношение 1:2,5), содержащей 0,6 г пенициллина, и экстрагируют при 2l c в течение 21 ч. Экстракт фильтруют, фильтраты от первой и второй экстракции

0

5

0

5

0

5

0

соедннлют и сушат сублимацией. Получают 39 г (выход 3,9% к массе исходного сырья) ГУК с содержанием белка 0,45%, растворы которой не теряют своей вязкости при хранении порошка в течение 1 г,

Пример 3. 1 -кг отпрепарированных, как указано в примере 1, петушиных гребней измельчают дважды на мясорубке, разбавляют 3 кг воды (соотношение 1:3) и нагревают при в течение 2 мин затек охла;вдают при 6 С в ечекие 4 ч, всплывший на по- верхность слой липидов тщательно снимают и отбрасывают, остаток фильтруют чарез марлЮ; к фильтрату добавляют 20 г (2% к массе ксходно го ctipSiH) активировакного угля и перемешивают в течение 2 ч Смесь фильтруют, осадок белков отбрасываютJ а фильтрат при- соеданяют к осадку, который предварительно разбавляют 3 кг воды (соотношение 1:3), содержащей 0,7 г пени- 1тиллина (0,07% к массе исходного сгзгрья) , и проводят экстракцию при 22 С в течение 24 ч. Экстракт фильтруют, через марлюJ осадок сырья снова запивают 3 кг воды (соотношение i:3),, содержащей 0.7 г пениц шлина. и экстрагируют при 22 С в течение 24 ч. Экстракт фильтруют, фильтраты от первой и второй экстракции соединяют к суушат сублимащ ей, Получают 40 г (выход 4% к массе исходного сырья) ГУК с содержанием белка 0,4%, растворы которой не теряют своей вязкости прн хранении порошка в течение 1 г.

Сопоставительный анализ предлагаемого и известного способов приведен В таблице,

Формула изобретения

0

Способ получения гиалуроновой кислоты, включающий обескровливание сырья, измельчение, экстракщ-ш водой; термообработку экстракта при 90 - 100°С в течение 1-2 мкн и его .фильтрацию, отличающийся тем, что, с целью по.вышек ня качества целевого продукта и упрощения способа, в качестве сырья используют петушиные гребни, после термообработки экстракционную массу охлаждают до в течение 2-4 ч, отделяют липиды, массу фильтруют,, отделяют осадок сырьяS а в фильтрат

516169266

вводят активированный уголь в коли- экстракцию водой в течение 18-24 ч .

честве 1-2% от массы исходного сырья, перемешивают 1-2 ч, смесь фильтруют,

полученный фильтрат смешивают с осадком сырья и проводят двухстадийную

5

при 20-22 0 в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта.

5

при 20-22 0 в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта.

Изобретение относится к химии природных соединений - к получению гиалуроновой кислоты, которая применяется в качестве субстрата при количественном определении ферментов гиалуронидазного действия - лидазы и ронидазы, а также в медицине в качестве ранозаживляющего средства и пролонгатора действия различных лекарственных средств. Изобретение позволяет повысить качество целевого продукта (снизить содержание балластных белков и повысить срок хранения), увеличить его выход и исключить использование органического растворителя за счет того, что петушиные гребни обескровливают, измельчают, экстрагируют водой, экстракт термообрабатывают 1-2 мин при 90-100°С, охлаждают до 4-6 °С в течение 2-4 ч. Отделяют липиды, фильтруют, отделяют осадок сырья, в фильтрат вводят активированный уголь в количестве 1-2 % от массы исходного сырья и перемешивают 1-2 ч. Смесь фильтруют. Полученный фильтрат смешивают с осадком сырья и проводят двухстадийную экстракцию водой в течение 18-24 ч при 20-22°С в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта. 1 табл.

1.5-1,7 3,8-4,0

2-3 сут

2,5-2,7

Не менее 0,4-0,5 1 г.