Способ выявления хроматина в клетках Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к биологии, медицине и сельскому хозяйству и может быть использовано для выявления формы организации генетического материала - хроматина и последующего анализа ядерного изображения.

Цель изобретения - повышение точности и информативности анализа.

Цель достигается минимизацией кислотного гидролиза и использованием в качестве красителя азура-ll. Гидролиз проводят 5Н HCI в течение 3-5 мин при 2- 4°С.

Способ осуществляют следующим образом.

Клеточный материал наносят на предметные стекла в виде мазков, отпечатков или давленых препаратов.

Фиксируют препараты 96° этанол/ацетон (1:1) или 96° этанол/эфир (1:1) в течение 10 мин и высушивают на воздухе. Фиксация может быть продлена до нескольких часов или, наоборот, опущена - если исследуемый материал может быть окрашен не позднее 2 ч после приготовления мазка.

Далее проводят гидролиз 5 Н HCI при 2--4°С (в холодильнике) в течение 3-5 мин. Тщательно прополаскивают стекла в дистиллированной воде (по 1 мин 5 раз).

Окрашивают созревшим 0,1 %-ным раствором азура-11, забуференным перед употреблением на 1/4 цитратным буфером Макильвейна (рН 4) в течение 5 мин,

Избыток красителя отмывают в дистиллированной воде (5-10 с).

Для приготовления длительно сохраняемого материала проводят обезвоживание в третичном бутиловом спирте, проводку через ксилол и заключение в одну из постоянных сред.

Отпечатки печени крысы.

Температура бытового холодильника (2 -4°С).

Пример 1. 30 с гидролиза - реагируют еще РНК, недостаточно яркая реакция гетерохроматина.

Пример 2. 3 мин гидролиза - не реагирует РНК, яркая реакция гетерохроматиновых блоков.

(Л

С

о

00 СА 00 СЛ

3 16483854

Пример 3. 3-5 мин гидролиза -Пример. Начиная с 4 мин гидрооптимальная реакция.лиза стремительно нарастает разрушение

П р и м е р . 4. Интервал 6-10 мин игетерохроматиновых блоков и появляется

более (до 3 ч) - постепенно нарастает раз-мелкозернистый фон.

дробление блоков гетерохроматина и появ-5 Формула изобретения

ляется мелкозернистая фоновая реакцияСпособ выявления хроматина в клетках,

эухроматина. Комнатная температура.включающий проведение кислотного гидроПример 5. К 2-3 мин гидролизалиэа и окраску основным красителем, о тэкстрагирована РНК.личающийся тем, что, с целью

Пример 6. 3-3,5 мин гидролиза -10 повышения точности и информативности анаоптимальная реакция гетерохроматиновыхлиза, проводят гидролиз 5Н соляной кислотой

блоков, однако по сравнению с температу-в течение 3-5 мин при 2-4°С, при этом в

рой холодильника она менее яркая.качестве красителя используют азур-И.

Изобретение относится к биологии, медицине и сельскому хозяйству, а именно к цитологии. Цель изобретения - улучшение контрастности и разрешения мелких деталей хроматинового ри- суика в клетках, повышение точности и информативности количественного анализа ядерного изображения. Клеточный материал в виде мазков, отпечатков или давленых препаратов (нативных или фиксированных) подвергают гидролизу 5Н HCI в течение 3--5 мин и окрашивают азур-П в течение 5 мин.