Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

t

(21)4351819/14

(22)28.12.87

(46) 15.05.91. Бкш. К- 18v

(71)Институт клинической психиатрии Всесоюзного научного центра психического здоровья АМН СССР

(72)А.Г.Мухин и Н.Д.Чекалина (53) 612.015 (088.8)

(56) Патент США П 4299813, кл. G 01 N 33/48, 1979.

(54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ УРОВНЯ АМИТРИП- ТИЛИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ РАДИОРЕЦЕПТОР НЫМ МЕТОДОМ

(57) Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологи- ческой химии. Цель изобретения - повышение чувствительности определения амитриптилина -достигается за счет проведения последовательной инкубации ,рецепторного материала с радиоактив- , ным лигандом в два этапа при 23-25°С. Способ дает увеличение чувствительности в 8-14 раз по сравнению с прототипом.

Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологической химии, касается способа измерения уровня амитриптилина в биологических жидкостях, и может быть использовано в лечебной практике для проведения лекарственного мониторинга путем определения в крови и иных биологических жидкостях концентраций амитриптилина и других антидепрессантов и лекарственных средств, имеющих сродство к М-холинорецепторам.

Цель изобретения - повышение чувствительности.

Способ осуществляют следующим образом.

Для анализа берут рецепторный материал, содержащий М-холинорецепторы (в качестве источника рецепторного материала используют хвостатые ядра бычьего моэга), их гомогенизируют 0 40 объемах холодного трис-HCl буфер

с рН 7,4 с использованием гомогенизатора типа Ultra - Turrax при максимальной скорости в течение 40 с. Го- могенат центрифугируют при 30000 g в течение 30 мин при 4 С, Супернатант сливают, осадок ресуспендируют в 40 объемах буфера и повторяют процедуру гомогенизации и центрифугирования еще два раза в тех же условиях. Конечный осадок ресуспендируют в 10 объемах трис-HCl буфера с использованием гомогенизатора.

Для измерения уровня амитриптилина в сыворотке используют стандарты нерадиоактивного амитриптилина. Из исходного I/раствора амитриагили- на в 50 мМ фосфатном буфере с рН 7,4 путем разведений в том же буфере готовят следующие стандарты: 8-10 , 2,5-10 1-10 f 5-10 f 2, 1 10 MJpacTBopbi амитриптилина.

&э

16494304

По калибровочным кривым (зависимость ингибирования связывания ЭН- QNB от концентрации амитриптилина) определяют значение концентрации амитриптилина в сыворотке крови.

Способ дает увеличение чувствительности определения уровня амитриптилина в 8-14 раз по сравнению с прототипами,

Формула изобретения

Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторВ качестве меченого лиганда используют э H-QNB (квинуклидинил бен- зилат), 39 К/ммоль (фирма MEN).

Определение проводят в стеклянных , пробирках при комнатной температуре 23-25°С. Смешивание ингредиентов инкубационной среды проводят последовательно в два этапа: сначала в каждую пробирку вносят по 25 мкл стандарта JQ и 400 мкл рецепторного материала, содержимое пробирок перемешивают на встряхивателе и инкубируют в течение 15-30 мин. После этого в пробирки до-

бавпяют по 50 мкл H-QNB, пробы пере- fs ным метОдомУ заютючающийсяТинкуба- мешивают и инкубирают 60-65 с. После инкубации в каждую пробирку добавляют по 7 мл холодного фосфатного буфера с рН 7,4. Содержимое пробирок тотчас фильтруют под вакуумом через20 Whatman GF/B фильтры. Фильтры промывают холодным буфером трижды по 7 мл и затем помещают в сцинтилляционные флаконы, содержащие 8 мл сцинтиллято- pa BRAY. Через 18 ч радиоактивность 25 просчитывают на жидкостном сцинтилля- ционном счетчике.

Процент янгибирования определяют Во - Вi

как - -----, где В0 и В; - величины

о связывания 3Н-лиганда в отсутствии и

в присутствии амитриптилина.

30

ции рецепторного материала с радиоактивным лигандом 3Н-квинуклидинил бензилатом и исследуемым образцом, определение радиоактивности связанного с рецептором лиганда, расчете процента ингибирования связывания лиганда образцом и определении концентрации амитриптилина по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, инкубацию проводят в два этапа: вначале инкубация рецепторного материала с исследуемым образцом в течение 15-30 мин при 23-25°С, затем добавление радиоактивного лиганда и инкубация в течение 60-65 с при той же температуре.

Формула изобретения

Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецептор

ным метОдомУ заютючающийсяТинкуба-

ным метОдомУ заютючающийсяТинкуба-

ции рецепторного материала с радиоактивным лигандом 3Н-квинуклидинил бензилатом и исследуемым образцом, определение радиоактивности связанного с рецептором лиганда, расчете процента ингибирования связывания лиганда образцом и определении концентрации амитриптилина по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, инкубацию проводят в два этапа: вначале инкубация рецепторного материала с исследуемым образцом в течение 15-30 мин при 23-25°С, затем добавление радиоактивного лиганда и инкубация в течение 60-65 с при той же температуре.