Питательная среда для выделения энтерококков Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в бактериологической диагностике кишечных инфекций.

Цель изобретения - повышение селективных свойств среды.

Питательную среду готовят следующим образом.

П р и м е р 1. 7,5 г триптического гидро- лизата соевого шрота. 8,5 г агара, 9,5 г глюкозы, 9,0 г цитрата натрия, 5,5 г уклекислого натрия и 0,0008 г кристаллвиолета растворяют в 1 л дистиллированой воды в колбе.

Среду кипятят 2-3 мин, охлаждают до 50°С и разливают в стерильные чашки Петри. По мере застывания среды чашки со средой и крышки раздельно подсушивают в термостате до высыхания конценционной влаги на крышках чашек, после чего закрывают крышками, и среда готова для использования. Цвет готовой среды бледно-желтый, рН 9,8 0,4.

Пример 2. В1л дистиллированной воды вносят 8,0 г триптического гидролиза- та соевого шрота, 9,0 г агара, 10,0 г глюкозы, 10,0 г цитрата натрия, 6.0 г углекислого натрия, 0,001 г кристаллвиолета.

Пример 3. В1л дистиллированной воды вносят 8,5 г триптического гидролиза- та соевого шрота, 9,5 г агара. 11,0 г глюкозы. 10.5 г цитрата натрия, 6,5 г углекислого натрия. 0,0012 г кристаллвиолета.

Среду можно получать в сухом виде.

Пример 4. В шаровую мельницу емкостью 1 кг загружают 185 г триптического гидролизата соевого шрота, 209,3 г агара, 232,5 г глюкозы, 232,5 г цитрата натрия. 139,5 г уклекислого натрия. 0,02 г кристаллвиолета. Смесь перемешивают в течение 45 мин.

Навеску вещества 4,3 г (она содержит оптимальное количество указанных ингреЁ

О

ел

го со

4

ел

диентов) вносят в 1000 мл воды, кипятят 2-3 мин, разливают по 25 мл в чашки Петри.

Аналогично получают препараты сухих сред с содержанием минимальных и максимальных концентраций ингредиентов. При этом навеску составляет 40 и 46 г соответственно на 1 л среды.

П р и м е р 5. Для приготовления микробных взвесей суточной культуры тест-штаммов энтерококков, выращенный на скошенном сахарном агаре при 37°С, смывают 0,9%-ным изотоническим раствором хлористого натрия, доводят взвеси до Юед. по оптическому стандарту мутносги ГИСК им. Л.А.Тарасевича, что соответствует 10 микробных клеток в 1 мл. Затем серийными десятикратными разведениями доводят до содержания 10 тыс, (10, 1 тыс. (10 микробных клеток в 1 мл взвеси.

Готовят также микробные взвеси мик- робов-ассоциантов: Staphllococcus, Proteus, E. coll. Pseudomonas. Для этого суточные культуры, выращенные на скошенном питательном агаре при 37°С, смывают 0,9%-ным изотоническим раствором хлори- стого натрия, доводят до 10 ед. по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича, что соответствует 109 микробных клеток в 1 мл.

Из разведения каждой взвеси монокультур энтерококков высевают по 0,1 мл на чашку с испытуемыми и контрольными средами (среды сравнения).

Микробы-ассоцианты высевают из разведения 109 по 0,1 мл на чашки с испытуе- мой и контрольными средами.

Контрольными средами (сравнения) служат среда Седова лабораторного изготовления и сахарный агар на кормовых дрожжах.

Учет результатов проводят через 18-24 ч инкубации посевов при 37°С.

Чувствительность, стабильность исходных биологических свойств испытуемых тест-штаммов на предлагаемой и контроль-

ных (сравнительных) средах одного порядка (S.faecalls 1379, S.faecalls var zymogenes 7з) - отмечается рост при посеве 100 микробных клеток.

Проверка селективных свойств.

При посеве на испытуемую среду тест- штаммов микробов-ассоциантов E.coli 0-55, Staphllococcus aureus 209 Р, Pseudomonas aerugenosa Z-165, Proteus rettgeri 4489 из разведения 109 рост культур не наблюдается, в то время как на контрольной среде Седова наблюдается рост стафилококков из этого же разведения. Полная ингибиция стафилококков на контрольной среде наступает из разведения 10 .

Сравнение скорости роста энтерококков показывает, что нэ предлагаемой среде энтерококки вырастают через 18-24 ч, а на среде Седова - через 36-48 ч.

Таким образом, предлагаемая среда обладает более выраженными селективными свойствами, обеспечивающими выделение энтерококка в чистом виде и большей скоростью роста выделяемого микроба.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения энтерококков, содержащая источник азота, глюкозу, цитрат натрия, углекислый натрий, селективный агент, агар и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения селективных свойств среды, она в качестве источника азота содержит триптический гидролизат соевого шрота, а в качестве селективного агента - кристаллвиолет при следующем количественном соотношении комонентов, г/л:

Триптический гидролизат

вода

7,5-8,5 9,5-11,0 9,0-10,5 5,0-6,5 0,0008-0.0012 8,5-9,5 1 л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в бактериологической диагностике кишечных инфекций. Цель изобретения - повышение селективных свойств среды. Питательная среда содержит, г/л: триптический гидролизат соевого шрота 7,5-8,5; цитрат натрия 9,0-10.5; агар 8,5-9,5; глюкоза 9,0- 11,0; углекислый натрий 5,5-6,5; кристалл- виолет 0,0008-0,0012; дистиллированная вода 1 л, рН среды 9,8 ± 0,4. При посеве энтерококков и микробов-ассоциантов рост последних из разведения 10 отсутствует. Чувствительность среды - при посеве 100 м.кл. энтерококков отмечается их рост на среде. Рост энтероккоков через 18-24 ч инкубации при 37°С.