Питательная среда для дифференциации менингококков от непатогенных нейссерий Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации нейссерий.

Цель изобретения - повышение точности дифференциации.

Среду готовят следующим образом,

В колбу с 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г; пептон 9,0 - 11,0; агар 14,0 - 16,0; желчь 9,0 - 11,0; аминопептид 6,0 - 8,0; глутаминовая кислота 1,0- 1,6; цистин 0,01 - 0,015; тиаминбро- мид 0,002 - 0,008; экстракт кормовых дрожжей(ЭКД)2,0-3,0; сахароза 8,0 - 12.0; хлористый калий 0,07 - 0,1; сернокислый

магний 0,4 - 0,8; хлористый аммоний 1,0 - 1,3; трис-буфер 1.6 - 2,2; бромкрезоловый пурпуровый 0,01 -0,03. Среду взбалтывают, доводят до кипения и кипятят в течение 1 - 2 мин, стерилизуют при 110°СЗО мин. После стерилизации вносят в охлажденную до 45-50°С среду 10,2 - 71,4 г сыворотки крупного рогато го с кота. Среду взбалтывают для полного перемешивания и разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

Пример 1. Для приготовления среды с минимальным содержанием ингредиентов в колбу в 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г/л; хлористый каО

ел о

N 00 СЛ

лий 0,07; хлористый аммоний 1,0; тиаминб- ромид 0,002; цистин 0,01; глутаминовая кислота 1,0; трис-буфер 1,6; сернокислый магний 0,4; сахароза 8,0; желчь 9,0; амино- пептид 6,0; пептон 9,0; бромкрезоловый пурпуровый 0,01; агар 14,0; экстракт кормовых дрожжей 2,0.

После стерилизации в охлажденную до 45-50°С среду вносят 10,2 г сыворотки крупного рогатого скота.

Среды, засеянные нейссериями, инкубируют при 37°С в термостате.

Учет результатов проводят через 18- 24 ч. Менингококки на этой среде не растут. При росте непатогенных нейссерий наблюдается типичный рост, при ферментации сахарозы цвет среды меняется с зеленовато-серого на желтый. При росте В, catarrhalis окраска среды не изменяется.

Пример 2. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве, г/л: хлористый калий 0,09; хлористый аммоний 1,25; тиаминбромид 0,005; цистин 0,012; глутаминовая кислота 1,3; трис-буфер 1,9; сернокислый магний 0,6; сахароза 10,0; желчь 10,0; аминопептид 7,0; пептон 10,0, бромкрезоловый пурпуровый 0,02; агар 15,0; экстракт кормовых дрожжей 2,5.

После стерилизации и охлаждения в среду вносят 51 г сыворотки крупного рогатого скота. .

Пример 3. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве, г/л: хлористый калий 0,1; хлористый аммоний 1,3; тиаминбромид 0,008; цистин 0,015; глутаминовая кислота 1,6; трис-буфер 2,2; сернокислый магний 0,8; сахароза 12,0; желчь 11,0; аминопептид 8,0; пептон 11,0; бромкрезоловый пурпуровый 0,03; агар 16,0; экстракт кормовых дрожжей 3,0.

После стерилизации и охлаждения в среду вносят 71,4 г сыворотки крупного рогатого скота.

Среду можно готовить в сухом виде.

Пример 4. В шаровую мельницу помещают шары и компоненты среды, взятые в следующем количестве, г: хлористый калий 1,512; хлористый аммоний 21,0; тиаминбромид 0,084; цистин 0,202; глутаминовая кислота 21,84; трис-буфер 31,92; сернокислый магний 10,08; сахароза 168,0; желчь 168,0; аминопептид 117,6; пептон 168,0; бромкрезоловый пурпуровый 0,336; агар-агар 252,0; экстракт кормовых дрожжей 42,0, перемешивают в течение 60 мин.

Навеску среды 59,68 г рстворяют в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят 1-2 мин. Среду автоклавиру- ют при 110°С в течение 30 мин.

В охлажденную до 45-50°С среду вносят 51 г сыворотки крупного рогатого скота и разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

В табл.1 приведены результаты испытания трех вариантов питательной среды.

В табл.2 показаны сравнительные данные известной и предлагаемой сред, которые свидетельствуют, что предлагаемая 0 среда превосходит известную по диферен- цирующим свойствам.

Таким образом, разработана питательная среда для дифференциации нейссерий, отличающаяся от известной тем, что среда 5 сухая, состоит из отечественных ингредиентов, В отличие от известной среды повышены селективные свойства. Разработанная среда не задерживает рост непатогенных нейссерий, присутствие в ней сахарозы и 0 индикатора позволяет уже при первичном посеве исследуемого материала ориентировочно определять также вид непатогенных нейссерий, что ускоряет ход дальнейшего исследования возбудителя. 5 Внедрение разработанной среды позволяет улучшить этнологическую расшифровку ме- нингококковой инфекции, бронхиальной астмы, заболеваний верхних дыхательных путей. 0

Формула изобретения Питательная среда для дифференциации менингококков от непатогенных нейссерий, содержащая источник азота, пептон, 5 агар, желчь, сыворотку крупного рогатого скота, соль соляной кислоты и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения точности дифференциации, она дополнительно содержит тиаминбромид, трис-бу- 0 фер, сернокислый магний, сахарозу, бромкрезоловый пурпуровый, экстракт кормовых дрожжей, воду, в качестве источника азота - хлористый аммоний, цистин, глута- миновую кислоту и аминопептид, в качестве 5 соли соляной кислоты - хлористый калий при следующем соотношении компонентов, г/л:

Хлористый калий0,07 - 0,1

Хлористый аммоний 1,0 - 1,3 0 Тиаминбромид0,002 - 0,008

Цистин0,01-0,015

Глутаминовая кислота 1,0 - 1,6 Трис-буфер1,6-2,2

Сернокислый магний 0,4 - 0,8 5 Сахароза8,0-12,0

Желчь9,0-11,0

Аминопептид6,0 - 8,0

Пептон9,0-11,0

Бромкрезоловый пурпуровый0,01 - 0,03

Агар14,0-16,0

Экстракт кормовых дрожжей2,0 - 3,0

Сыворотка крупного рогатого скота Вода

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации нейссерий. Цель изобретения - повышение точности дифференциации, В колбу с 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г/л: пептон 9.0-11,0; агар 14,0-16,0; желчь 9,0-11,0; аминопептид 6,0- 8,0; глутаминовая кислота 1,0-1,6; цистин 0,01-0,015; тиаминбромидО,002-0,008; экстракт кормовых дрожжей 2,0-3,0; сахароза 8,0-12,0; хлористый калий 0,07-0,1; сернокислый магний 0,4-0,8; хлористый аммоний 1,0-1,3; трис-буфер 1,6-2,2; бромкрезоло- вый пурпуровый 0,01-0,03. Среду взбалтывают и кипятят в течение 1-2 мин, стерилизуют при 110°С 30 мин. После стерилизации вносят в охлажденную до 45- 50°С среду 10,2-71,4 г сыворотки крупного рогатого скота. Среда обеспечивает рост непатогенных нейссерий и задерживает рост менингококков. При росте непатогенных нейссерий наблюдается типичный рост, при ферментации сахарозы цвет среды меняется с зеленовато-серого на желтый, при отсутствии ферментации сахарозы окраска среды не изменяется. 2 табл.

Таблица 1

Таблица 2