Способ определения аденилаткиназной активности легких Советский патент 1991 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностике заболеваний внутренних органов, в частности заболеваний легких и сердца.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют спектрофотомет- рическим методом, основанным на измерении скорости сопряжения ферментативных реакций. Субстратами реакций являются АТФ и АМФ, а образующийся АДФ реагирует с фосфоэнолпируватом в присутствии пи- руваткиназы. Продуцируемый пируват определяют при помощи лактатдегидроге- назы при наличии НАД- На

АТФ + АДФ

АДФ АТФ

фосфоэнолпируват2± пируват +

Прируват + НАД Н2 ЈЛактат + НАД4 Для исследования в опытную и контрольную пробирки помещают по 2 мл трис- буфера (O.Q5M), 0,2 мл НАД Н2 (0,011 М), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0.015М), 0,1 мл АТФ (0.025М), 0,1 мл АМФ (0.025М). 0,2 мл MgSOo (0.1M). 0,2 мл KCI (0.025M). 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0.1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, а в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают в термостат при 37°С на 30 мин. После инкубации пробирки охлаждают на

ел ч

00

ел

00

льду, замеряют оптическую плотность при 340 нм. Расчет проводят по формуле

Е 6 221-°1800°0 Е 2679 ммоль/л/с, где Е - разница экстинций контрольной и опытной проб;

6,22 - коэффициент молярной экстинций НАД На;

3 - q6beM инкубационной смеси;

1000 - пересчет на 1000 мл;

1800 - пересчет на 1 с;

10 - пересчет на 1 мл конденсата.

Пример В клинических условиях данным способом проводят исследование конденсата выдыхаемого воздуха у больных ХНЗЛ без бронхоспастическо Ч) синдрома, с брон кос пасти чес к им синдромом, при бронхиальной астме и ищемической болезни сердца.

Результаты исследования представле- ны в табл.1.

Как видно из табл.1, показатели адеии- латкиназной активности в конденсате выдыхаемого воздуха у обследованных больных значительно ниже, чем у здоровых и коррелируют со степенью функциональной недостаточности.

При исследовании плазмы крови у данных больных изменения аденилаткиназной активности менее выражены.

Сравнительные данные приведены в табл.2.

Таким образом, способ позволяет с большим коэффициентом достоверности и специфичности выявить при обследовании больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ) и ишемиче- ской болезни сердца (И Б С) низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующий степень функциональных нарушений.

Формула изобретения

Способ определения аденилаткиназной активности легких, включающий исследования биологической жидкости путем измерения скорости в системе сопряженных ферментативных реакций, отличающий- с я тем, что. с целью повышения точности способа, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, система сопряженных ферментативных реакций дополнительно содержит 0.1М MgSCM идо 25М КС, а в качестве буфера - 0.05М трис-HCI буфер рН 7,5 и реакции осуществляют при 37 С.

Таблица 1

Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов, в частности легких и сердца. Целью изобретения является повышение точности способа за счет использования в качестве биологического материала конденсата выдыхаемого воздуха, активации вспомогательного фермента пируваткиназы ионами магния и калия, заменой фосфатного буфера,более устойчивым и удобным в работе трис-буфером 0.05М, рН-7,5, увеличением температуры инкубации до 37°С. Для исследования в две пробирки берут по 2 мл трис-буфера (0,05 М), 0,2 мл НАД На (0,011 М), 0,2 мл фосфо- энолпирувата (0,015 М). 0,1 мл АТФ (0,025 М). 0.1 мл АМФ (0,025 М), 0,2 мл М 04(0,1 М), 0,2 мл КС (0,025 М). 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают пробирки в термостат при 37°С на 30 мин. После инкубации охлаждают на льду и замеряют при 340 нм. Расчет проводят по формуле Е-3-10-1000 Е 2,679 6,22 1800 ммоль/л/с. Способ позволяет при обследовании больных выявлять низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующей степень функциональных нарушений. 2 табл. w Ё

Здоровые11

ХНЗЛ без бронхоспасти- ческого синдрома:

ЛН 1-11 ст„18

ЛН 11 ст11

ХНЗЛ с бронхоспастичес- ким синдромом:

ЛН 0-1 ст.5

ЛН 1-11 ст,17

Бронхиальная астма:

ЛН 0-1 ст.10 ЛН 1-11 ст„ 15

ИБС:

ХКН 0-1 ст.13

ХКН 1-11 ст.25

0,740 0,t25

0,356 1 0,040 0,001 0,,030 0,001

0,,,001

0,251 - 0,,001

0,,049«0,00

0,273 - 0,,01

0,317 i 0,,001

0,1582 0,,001о