Способ получения N-[3-(N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2-D-метилпропаноил]-L-пролина Советский патент 1991 года по МПК C07D207/16 A61K38/05 C07K5/62 

Изобретение относится к способам получения N- |3-{М-циклопентакарбонил-0-ала- нилтио)-2-О-метилпропаноил -L-пролина - нового биологически активного соединения, которое может быть использовано в медицине.

Цель изобретения - получение нового производного в ряду пептидов, обладающего противогипертонической активностью, малотоксичного, более стойкого к гидролизу, имеющего более длительный срок хранения, не дающего нежелательных побочных явлений.

Стадия 1. Приготовление М-циклопента- карбонил-О-аланина,

О-Аланин (4,5 г) растворяют в 230 мл родного 1 н. раствора карбоната натрия при

перемешивании. К раствору по каплям добавляют 100 мл тетрагидрофурана, содержащего 9 г циклопентакарбонилхлорида, при 5-10°С и при этой температуре смесь перемешивают 30 мин, затем перемешивают при комнатной температуре 1,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, чтобы значение рН было между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. органический слой промывают насыщенным раствором хлорида натрия и сушат над сульфатом магния. Фильтрат выпаривают под вакуумом для получения сырого продукта. При перекристаллизации из смеси этилацетат - н-гексан получают 4,65 г М-циклопентакарбонил-D- аланика.

сл

со

Стадия 2. Приготовление 3-(М-цикло- пенгакарбонил-0-аланилтио)-2-0-метилпр опановой кислоты.

М-Циклопентакарбонил-О-аланин (5,97 г) растворяют в осушенном тетрагидрофура- не(ЮОмл), К раствору добавляют карбонил- диимидазол (5,84 г) при температуре между -20 и -15°С, смесь перемешивают при этой температуре в течение 1 ч. После этого добавляют З-меркапто-2-О-метилпропановую кислоту (3,60 г) и смесь перемешивают при температуре между -15 и -10°С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре еще 1 ч. Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя. К остатку добавляют40 мл воды и к смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, подкисляя ее до рН между 1 и 2. Смесь экстрагируют этила- цетатом, органический слой промывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния. Фильтрат выпаривают под вакуумом для получения неочищенного соединения. При его перекристаллизации из смеси этилацетат - /н-гексан получают бесцветные призматические кристаллы указанного соединения.

Стадия 3. Приготовление М-Ј3-(М-цикло- пентакарбонил-0-аланилтио)-20-метмлп- ропаноил}-1-пролина,

3-(М-Циклопентакарбонил-0-аланилти о)-2-0-метилпропановую кислоту (1,51 г) растворяют в осушенном тетрагидрофуране (40 мл). К этому раствору добавляют 0,61 г триэтиламина и 0,65 г этилхлорформиата при -5°С и перемешивании. Спустя 5 мин добавляют раствор, содержащий 0,58 г L- пролина и 0,61 г триэтиламина в 5 мл воды, и смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя. После добавления к остатку воды к смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, подкисляя ее до рН между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом, органический слой про- мывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния. Фильтрат концентрируют под вакуумом, для удаления этилацетата, а остаток разделяют хроматографически на сшшкагеле, используя смесь хлороформа и метанола в соотношении 100:1-100:2 в качестве элюанта. Собирают фракции, содержащие конечное соединение, и выпаривают под вакуумом, получая смолистый образец указанного соединения (0,3 г, 49%). Чистоту и однородность полученного продукта определяют хроматографией на силикагеле

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

,62 (хлороформ - метанол - уксусная кислота 2:1:0,003).,74 (н-бутанол - уксусная кислота - вода 4:1:1). ,2 (, метанол).

Проведены биологические испытания полученного предлагаемым способом N-{3- (М-циклопентакарбонил-О-ананилтио)-2-0 -метилпропаноила -1 -пролина на крысах.

В таблице приведен средний процент ингибирования индуцированного повышенного давления, вызванного введением соединения, полученного предлагаемым способом, и каптоприла в количестве 0,4 ммоль/кг.

Из таблицы видно, что полученное предлагаемым способом соединение проявляет противогипертонический эффект, сопоставляемый с эффектом каптоприла при выбранном уровне дозировки. Однако укказанное соединение более стабильно, чем каптоп- рил, как в биологических средах, так и в других условиях. Проведенные испытания In vitro показывают стабильность этого соединения в условиях разлагающих сред тканевых и плазменных гомогенатов. Эксперименты показали, что каптоприл быстро разлагается до своего дисульфида и других метаболитов, которые неактивны как ингибиторы

По прошествии 60 мин инкубирования с плазмой крыс, человека, обезьян it собак количество 35S каптоприла неизменно - 0; 7, 10, 25% соответственно; основным продуктом был дисульфид.

Надосадочная фракция 9000 хд гомоге- ната печени, почек и кишечника крыс почти полностью переводит каптоприл в его дисульфид и другие продукты в течение 120 мин. Период полураспада каптоприла в водных растворах 30 мин. При этом М- 3-М-циклопентакарбонил-0-ала- нилтио}2-О-метилпропаноил1 -L-пролин показывает неснижающуюся эффективность на протяжении 90-180 мин после орального введения.

Каптоприл достигает пиковой эффективности к 90 мин, затем она падает. По прошествии 180 мин (М-циклопента- . карбонил-О-аланилтио)-2-0-метил|-1 -прол- ин - более эффективный ингибитор без каких-либо признаков ослабления его реакции.

Сравнительные исследования на здоровых людях показали, что действие 40 мг (0,096 ммоль) М-|3-{М-циклогексилкарбонил- D-ал а нилтио)-2-0-метил п ропан оиол -L-n ро- лина продолжается дольше, чем действие 100 мг (0,46 ммоль) каптоприла.

Таким образом, полученный предлагаемым способом N-Ј3 -{N-циклопентакарбо- нил-0-аланилтио)-2-0-метилпропаноил}- L-прояин - соединение малотоксичное, более стойкое к гидролизу, чем каптоприл, имеет более длительный срок хранения и более прост в обращении.

Формула изобретения Способ получения 1 -/3-{Ы-циклопента- карбонил-0-аланилтио)-2-0-метилпропано- ил)-1 -пролина формулы

D..

С-МН-СН-СО- S-CH2- СН- CO-N

о

СН,

СН,

соон

отличающийся тем, что 1М-циклопе«- такарбонил-О-аланин формулы

ГУс ян-снсоон

L-/ Ц| ОСН3

полученный взаимодействием производного циклопентакарбонила с D-аланином, конденсируют в присутствии дициклогексил

карбодиимида и N-оксисукцинимида с 3- меркапто-2-О-метилпропионовой кислотой и полученный продукт конденсации 3-{N- циклопентакарбонил-0-эланилтио)-2-О-ме тилпропановой кислоты

10

ГУ С-ЯН-СН-СО- S-CH,-CH-COOH

L- I|г |

о сн,сн.

вводят во вразимодействие с трет-бутиловым эфиром L-пролина в присуствии дициклогексилкарбодиимида и от полученного

15 продукта (М-циклопентакарбонил-0аланилтио)-2-0-метилпропаноил -Ьпролин О-с-лн-сн-со-з-снг- сн- со- нП

2Q°Ш3СНзСООС4Н9тргт

25

путем обработки раствором трифторуксус- ной кислоты в анизоле отщепляют трет-бу- тильную защитную группу.

Изобретение касается получения N-/3-(N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2D-метилпропаноил]-L-пролина, обладающего противогипертоническим эффектом, что может быть использовано в медицине. Цель - создание нового активного и малотоксичного соединения указанного класса. Синтез ведут конденсацией N-циклопентакарбонил-D-аланина (полученного из производного циклопентакарбонила с D-аланином) с 3-меркапто-2-D-метилпропионовой кислотой в присутствии дициклогексилкарбодиимида и N-окиси сукцинимида с последующей обработкой полученного продукта трет. бутиловым эфиром L-пролина в присутствии дициклогексилкарбодиимида и далее раствором трифторуксусной кислоты в среде анизола (отщепление трет. бутилзащитной группы). Новое соединение по действию при дозе 40 мг длительнее, чем 100 мг каптоприла, менее токсично и более стойко к гидролизу при более длительном сроке хранения. 1 табл.

(циклопетакарбо- , нил-В-аланилтио)-2-В- метилпропаноил -L-npo1 ЛИН

Каптоприл

21 46

35 56

42 58

42 48

42 37