Способ получения производных пролина или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1987 года по МПК C07D207/12 

113

Изобретение относится к получению новых производных пролина общей формулы

. г

R-A-S-CH2CHCO-N(

СООН 1

где R - ацильная группа, связанная с oi -аминогруппой аминокислоты, выбранная из груп .пы, состоящей из циклопро- панкарбонильной, циклогек- санкарбонильной и адаман- танкарбонильной группы; А - остаток глицина, саркози- на или об , В-аш1нокисло- ты, имеющий об -карбонильную группу, которая образует тиольную сложно- эфирную связь с атомом серы,

или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих гипотензивным действием.

Цель изобретения - разработка на основе известного метода способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Пример 1. Получают (N- -циклогексанкарбонил-В-аланилтио)- -2-&-метилпропаноил -L-пролин следующими методами.

а. Растворяют в 40 мл сухого тет- рагидрофурана 1,51 г 3-(N-циклoгeк- санкарбонил-Б-аланилтио)-2-В-метил- пропановой кислоты. К этому раствору добавляют при -5°С и перемешивании 0,61 г триэтиламина и 0,65 г этилхлорформиата. Через 5 мин добавляют раствор, содержащий 0,58 г L- пролина и 0,61 г триэтиламина, растворенных в 5 мл воды, и смесь перемешивают 1 ч при 0°С, а затем в течение 30 мин при комнатной температуре. Для того, чтобы удалить растворитель, смесь выпаривают в вакууме После добавления к остатку воды к сме- си добавляют 2н„НС1 для установления значения рН между 1 и 2. Эту реакционную смесь экстрагируют этилацета- том, органический слой промывают дважды нacьщ eнным раствором NaCl и высушивают над сульфатом магния.Филтрат концентрируют в вакууме, удаляя этилацетат, и остаток подвергают хроматографической очистке на

25

5562

силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформа и метанола (100:1 и 100:2). Собирают фракции, содержащие конечное соединение, и 5 выпаривают в вакууме, получая 0,3 г резиноподобного образца вещества.

S. Растворяют в 50 мл сухого тет- рагидрофурана 6,03 г 3-(Н-циклогек О санкарбонил-В-аланилтио)-2-В-метилг пропановой кислоты и 2,3 г N-оксисук- цинимида. К этому раствору при О - 5 С добавляют 4,3 г дициклогексил- карбодиимида и смесь перемещивают

при этой температуре в течение ночи. После окончания реакции отфильтровывают осадок и промывают его неболь- щим количеством тетрагидрофурана. Объединяют фильтрат и промывные во0 ды и выпаривают в вакууме. К полученному остатку добавляют этилацетат и смесь фильтруют. Этилацетатный раствор промывают 0,5 н. НС1,. водой, водным раствором , и насьщ1енным раствором NaCl в указан ном порядке. Раствор высущивают над сульфатом магния, выпаривают в вакууме, остаток переводят в твердое состояние при добавлении смеси этилацетата

и гексана (t,10). Выход твердого продукта составляет 6,90 г (87%). Т.пл. ПЗ-Пб С а +14,2° (С 1,05 МеОН).

1

35 Спектр ЯМР (CDC1,), м.д.: 1,38 (бН,д), 1,20-2,20 (11Н,м), 2,82 (4Н,с),2,8-3,30 (ЗН,м), 4,75 (1Н,м), 6,30 (1Н, широкий д).

Растворяют в 40 мл тетрагидрофу40 рана 3,98 г активированного эфира. К этому раствору добавляют раствор 1,15 г L-пролина в 5 мл воды и 1,26 мл N-этилморфолина и смесь перемешивают в течение ночи. Для того,

45 чтобы удалить растворители, смесь вьтаривают в вакууме и к остатку добавляют воду. В эту смесь добавляют 2н. соляную кислоту для того, чтобы установить значение рН между 1 и 2.

50 Реакционную смесь экстрагируют этил- ацетатом, органический слой промывают насыщенным раствором NaCl и высущивают над сульфатом Магния. Фильтрат вьшаривают в вакууме. Остаток

55 подвергают очистке на хроматографической колонке с силикаг.елем, используя смесь хлороформа и метанола (от 100:1 до 100:2) в качестве элюента.

3

Методом ЯМР установлено, что продукт, полученный при выпаривании элюата (1,45 г) в вакууме, идентичен соединению, получаемому в примере 1.

Ь. Растворяют в 50 мл тионилхло- рида 4,52 г 3-(Ы-циклогексанкарбо- нш1-В-аланилтио)-2-В-метилпропано- вой кислоты. К этому раствору добавляют каплю диметилформамида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выпаривают в вакууме для удаления растворителей и к остатку добавляют 2 мл сухого толуола,затем смесь снова выпаривают в вакууме и к остатку при перемешивании добавляют 10 мл сухого тетрагидрофурана.Тетрагидрофурано- вый раствор,содержащий хлорангидрид кислоты, по каплям добавляют при 5 - и при перемешивании к воде,содержащей растворенные в ней 2,3 г L-пролина и 2,5 г ..Смесь перемешивают при этой температуре в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение еще 2 ч. Реакдионную смесь подвергают экстракции хлороформом. К водному слою добавляют 2н. соляную кислоту для Toi o, чтобы довести его значение рН до 1 - 2. После экстракции хлороформом хлоро- формовый слой промывают дважды на- сьщ(енным раствором NaCl и высушивают над сульфатом магния. После удаления хлороформа остаток подвергают хроматографической очистке на колонке с силикагелем,используя смес хлороформа и метанола (от 100:1 до 100:2) в качестве элюента. После выпаривания в вакууме получают 1,6 г резиноподобного вещества. Методом ЯМР установлено, что это вещество идентично соединению, получаемому в примере 1.

г. Растворяют в 50 мл сухого ди- хлорметана 3,01 г 3-(Ы-циклогексан- карбонил-В-аланилтио)-2-В-метилпро- пановой кислоты и 1,71 г трет-бути- лового эфира L-пролина и при перемешивании и охлаждении льдом добавляют к раствору 2,15 г дициклогек- силкарбодиимида. Эту смесь перемешивают при этой же температуре в течение 1,5 ч и выдерживают в течение ночи при 5 С. Реакционную смесь отфильтровывают и нерастворимое вещесво промывают дихлорметаном. Фильтра и промывную жидкость объединяют и

64

промывают 1н. соляной кислотой, водой, 1н. р.аствором NaHCO и насьш;ен- ным раствором NaCl в указанном порядке, высушивают над сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получая резиноподобный образец трет-бутилово- го эфира (Ы-циклогексанкарбо- нил-В-аланилтио)-2-В-метилпропано- ил -L-пролина (4,3 г).Пробу этого

эфира (4,0 г) растворяют в 30 мл анизола и к раствору добавляют Юмлтри- фторуксусной кислоты. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и выпаривают в вакууме

для удаления избытка трифторуксус- ной кислоты. Остаток подвергают хроматографической очистке на колонке (2x35 см) с силикагелем, используя в качестве элюента смесь метанола и

хлороформа (от 100:1 до 100:2). Со- бирают фракции, содержащие конечное соединение,- и выпаривают их в вакууме, получая резиноподобное вещество (3,4 г). Методами ЯК и тонкослойной хроматографии установлено, что это вещество идентично подучаемому в примере 1 соединению.

Реагенты, реакционные растворители и методы, используемые для получения предлагаемых соединений при- ведены в табл. 1, наряду с данными об их физических свойствах.

П р и м е р 2. Из образцов -(К-циклогексанкарбонил-В-аланил-тио)-2-В-метилпропаноилj-L-пролина образуются различные соли.

а. Кгшьциевая соль. Растворяют в 40 мл метанола образец (3,98 г) соединения, приготовленного согласно при-

меру 3 или 5.К этому раствору добавляют 0,84 г гидрата ацетата кальция и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. .Нерастворимое вещество отфильтровывают и фильтрат

выпаривают в вакууме. К остатку добавляют хлороформ, смесь отфильтровывают и выпаривают в вакууме.Затем к остатку добавляют диэтиловый эфир, смесь фильтруют и высушивают на воз-

духе, получая кальциевую соль соединения по примеру 3 или 5 (3,40 г) а - 47,2(С 1,0, МеОН).

5. Магниевая соль. Повторяют мето- дику а , используя 3,09 г соединения, приготовленного согласно примеру 3 или 5, и 0,772 г тетрагидрата ацетата магния. Получают 2,42 г магниевой

соли соединения по примеру 3 или 5. Calj, -4,6 (,0, МеОН).

§) . Лизиновая соль. Растворяют в 22 Wn метанола 1,19 г соединения, приготовленного согласно примеру 3 или 5.К этому раствору добавляют 0,416 г лизина,смесь перемешивают : 1 ч при комнатной температуре и выпаривают в вакууме.К остатку добавляют хлороформ,затем смесь фильтруют и выпаривают в вакууме. К остатку добавляют диметиловый эфир и продукт фильтруют- с отсасыванием, получая лизиновую соль соединения по приме- pV 3 или 5 (1,54 г) .

MO -23,1° (,0, МеОН).

2 . Натриевая соль. Рас гворяют в 25 мл метанола образец (2,21 г) соединения, приготовленного согласно примеру 3 или 5. К этому раствору добавляют 0,514 г.ацетата натрия,затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и выпаривают в вакууме. К остатку добавляют 200 мл смеси метанола и хлороформа (3:100 по объему) и образовавшуюся смесь фильтруют и выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в метаноле, затем раствор фильтруют и выпаривают в вакууме. К остатку добавляют этилацетат и продукт отфильтровывают с отсасыванием, получая натриевую соль соединения по примеру 3 или 5 (1,85 г).

-26,7° (,0, МеОН).

. Соль дициклогексиламина. Растворяют в 120 мл ацетонитрила 13,1 г образца соединения по примеру 3 или 5. К этому раствору при перемешивании добавляют 6 мл дициклогексиламина. Смесь дополнительно перемешивают в течение 30 мин и оставляют на ночь. Остаток отфильтровывают с отсасыванием и,высушивают на воздухе. Образовавшиеся неочищенные кристаллы суспендируют в 300 мл ацетонитрила и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Суспензию охлаждают, кристаллы отфильтровывают при отсасывании и высушивают на воздухе, получая дицик- логексиламинную соль соединения по примеру 3 или 5 (12,2 г). Wo -24,5° (,0, МеОН).

Полученные производные пролина формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли предохраняют образование ангиотензита II из ангиотен

5

0

5

0

5

0

5

0

5

зина I путем ингибирования активности фермента,преврашаюпдего ангиотен- ; ЗИН.Поэтому они полезны для лечения повышенного давления, вызванного ангиотензином И, и в качестве агентов для лечения сердечной недостаточности.

Измеряют активность некоторых конечных продуктов изобретения в отношении ингибирования фермента, превращаюш;его ангиотензин.

Фермент, превращающий ангиотензин, экстрагируют из легких кролика. В пробирку помещают 0,6 мл буферного раствора (рН 8,3) 0,111 М борная кислота - карбонат натрия, 0,2 мл 0,111 М раствора буфера борная кислота - карбонат натрия (рН 8,3),содержащего 23 ммоль/л бензоилглицил- гистидиллейцина (субстрат), и 0,1 мл 0,111 М раствора буфера борная кислота - карбонат натрия (рН 8,3), содержащего от 10. до 10 моль/л испытуемых соединений (13 конечных продуктов изобретения приведены в табл. 2) и предварительно культивируют при 37°С в течение 5- 10 мин. Затем добавляют в каждую пробирку 0,1 мл раствора фермента (порошок в ацетоне) и каждую смесь культивируют 30 мин при 37 С. Бензоил- глицин, получающийся с помощью фермента, экстрагируют этилацетатом в присутствии хлористоводородной кислоты и определяют его количество по УФ-поглощению при 228 нм. Определя- Kg активность фермента в присутствии испытуемых соединений относительно активности в отсутствие испытуемых соединений, принятой за 100. Концентрацию каждого испытуемого соединения, при которой относительная активность фермента составляет 50%, называют активностью каждого испытуемого соединения в отношении ингибирования активности фермента и обозначают ее величиной I .

Результаты ингибирования активности фермента соединениями, полученными согласно предлагаемому способу, приведены в табл. 2.

Для проведения сравнительного анализа берут следующие соединения.

Предлагаемое:

А. (N-циклoгeкcaнкapбoнил- -В-аланилтио)-2-В-метилпропаноил - -L-пролин.

Известные 1 :

B.(К-ацетил-Ь-пролилтио)- -2-В-метилпррпаноил -L-пролин (пример 1) .

C.(Н-ацетил-Ь-фенилаланил- тио)-пропаноилЗ-Ь-пролин (пример 3).

Известные 2 :

D.(N-тpeт-бyтилoкcикapбo- нилглицилтиo)-2-D-мeтилпpoпaнoил - -L-пpoлин (пример 25).

E.(Н-бензоил-Ъ-фенилаланил- тио)-2-В-метилпропаноил -L-пролин (пример 88).

F.(К-циклопентанкарбонил- -Ь-эланилтио)-2-В-метил пропан -L-пролин (пример 43).

Методика испытаний.

Ферментативный гидролиз in vitro. 1 мл 5%-ного гомогената печени крысы в О, 1 М калийфосфатного буфера (рН 7) смешивают с 1 мл 10 М раствора испытываемого соединения в том же фосфатном буфере, после чего смесь инкубируют при в течение промежутка времени, указанного в табл. 3. К 100 мкл такой смеси до- ба1вляют 6 капель 1 н. соляной кислоты и 5 мл этилацетата. После механического. пере:мешивания в течение 10 мин смесь подвергают центрифугированию а полученный этилацетат- ный слой отделяют и вьтаривают.Остаток растворяют в 1 мл воды и к водному раствору добавляют 6,5 мкл 0,4 М фосфатного буфера (рН 6,85) и 5 мкл М N-n-(2-бeнзимидaз лил)-фенилмалеимида (БИФМ), а затем смесь отстаивают в течение 40 мин при .

Подсчет уменьшения количества БИФМ производят путем возбуждения пробы при 310 нм и измерения излучения при 365 нм (предел измерения: более,0,1 мкг 3-меркапто-2-В-метил- пропаноил-L-пролина,Ингибирование сосудосужающейся реакции на ангиотензин Т.Испытывае- , мое соединение вводят в организм через рот в дозировках 0,4 мкмоль/кг веса животного (крысы),подвергнутого анастезии , а через заданный промежуток времени после введения в организм подопытным животным внутривенно вводят ангиотензин I в дозировке 300 мг/кг, после чего наблюдают ин- гибирование сосудосужающей. реакции на ангиотензин I.

5

0

5

Результаты испытаний приведены в табл. 3. . ..

Из табл. 3 видно, что все известные соединения проявляют более высокую чувствительность тиолэфирной связи к ферментативному in vitro гидролизу, чем предлагаемые соединения.

Все известные соединения,за исключением соединения В, подвергаются ферментативному гидролизу при уровне деструкции свьппе 50% после инкубирования в течение 60 мин с образованием соответствующего количества свободных меркаптогрупп.

С другой стороны, хотя соединение В проявляет значительную стойкость к ферментативному гидролизу тиолэфирной группы, оно способно ннгибировать сосудосужающую реакцию на ангиотензин I на уровне только 50% от того уровня, который достигается с использованием предлагаемых соединений.

Формула изобретения

1. Способ получения производных пролина общей формулы

V Г-.

R-A-s-CH2CHCo- ;Q

соон

(I)

35

А где R - ацильная группа, связанная с ot -аминогруппой аминокислоты, выбранная из группы, состоящей из циклопропан- карбонильной, циклогексан- карбонильной или адаман- танкарбонильной группы; остаток, д лицина, са ркозина или е , D-амин окисло ты

имеющий об -карбонильную группу, которая образует тиольную спожноэфирную связь с атомом серы,

или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем,

что L-пролин общей формулы

55

СЮО

(II)

где R - водород или трет-бутиловая группа.

913

подвергают взаимодействию с кислотой общей формулы

СНз R-A-S-CH2CH-COOH

(III)

где А - остаток глицина, саркозина или защищенной или незащищенной об , D-аминокислоты; R - имеет указанные значения, в присутствии карбодиимида или с ре- акционноспособньм производным кислоты и процесс ведут в среде инерт- Чого органического растворителя при (-5). - (+20) С с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли..

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что реакционноспо- L

а Этилхлор- Тетрагидрофуран

формиат Вода б Дициклогексилкарбодиимид

N-оксисук- цинимид То же

в Тионилхло- рид

г Дициклогек- Дихлорметан сил карбо- диимид

г Дихлорэтил- Диметилфор- карбодиимид мамид

а Этилхлорфор- Тетрагидромиат фуран

Вода б Дициклогек- То же

силкарбодиимид

N-r Гидроксисукцинимид

16556 . 10

собным производным соединением общей формулы (III) является активизированный амид, галоидангидрид кислоты, активированный сложный эфир 5 или смешанный ангидрид кислоты.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве инертного органического растворителя используют тетрагидрофуран, хлороформ, дихлорметан или ацетонитрил.

Приоритет по признакам: .

19.06.81 по п. 1 - использование карбодиимида в качестве реакционного реагента.

03.09.81 по п. 2 - использование в качестве реакционноспосббных производных кислоты амидов, галоидангид- рида, сложного эфира, смешанного ангидрида .

Таблица 1

-51,6°

0,66

(,06,МеОН) 0,71

««

-102,0

0,60

(,0,КеОН) 0,68

-58,1 0,64 (,0,МеОН) 0,82

11

- -

-

)- -

па-

б Дициклогек- Ацетонитрил силкарбодии- Вода

МИД

N-Гидрокси- сукцинимид

.. (

в Тионилхлорид Тетрагидро- фуран Вода

а Изобутил- хлорфор- миат

Диметилформамид

Вода

а Этилхлорфор- Тетрагидро- миат фуран

Вода в Тионилхлорид То же

г Карбонилдии- Тетрагидрофу- мидазол ран

а Этилхлорфор- Тетрагидрофу- миат ран

б Дициклогек- То же силкарбодии- мид

N-Гидрокси- сукцинимид

а Этилхлорформи- атб Дициклогексилкарбодиимид - в N-Гидроксисук- цинимид

Тионилхлорид - (К-Циклопропанкарбо-б Дициклогексил- Диметилформамид -108,8°0,47

нилглицилтио)-2-В-метил- карбодиимид Вода

пропаноил -L-пролинN-Сукцинимид(,0,МеОН) 0,53

в Тионилхлорид

Ацетонитрил Вода

г Карбонилдиими- Тетрагидрофу- даэол ран

1316556

12 Продолжение табл. 1

-81,,60

(,0,МеОН) 0,77

-61,0

0,63

(,0,МеОН) 0,67

,«

-47,8°

0,58

(,0,МеОН) 0,82 .

-50,5

0,58

(,0,КеОН) 0,83

-52,7°

0,61

(,d,MeOH) Oj73

к

-70,4°

0,66

(,0,МеОН) 0,62

«

-28,7

0,53

(,0,КеОН) 0,60

«

г Дициклогекснл- Дихлорметан карбодиимид

а Этияхлорформи- Тетрагидрофу- атран

Вода

Получены при тонкослойной хроматографии при использовании в качестве элюента CHClj/МеОН/АсО Н(2:1:0,003).

, Получены при тонкослойной хроматографии при использовании в качестве элюента п-бутанол/уксусная кислота/вода (4:1:1).

Т а б л и ц а 2

(К-Циклогексанкарбо-

нил-р-аланилтио)-2-В-метил- пропаноил -L-пролин

Н-ГЗ-(К-Циклопропанкарбо-

нил-В-аланилтио)-2-В-метилпропаноил -L-пролин

(К-Циклогексанкарбо-

нилглицилтио)-2-Б-метилпро- паноил -L-пролин

(Ы-Циклогексанкар-

бонил-К-метилглицилтио)- -2-D-MeTminponaHOHJiJ-L-пролин

N- 3-(К-Циклопропанкарбо- нилглицилтио)-2-В-метилпро- паноил -L-пролин

(Ы-Адамантанкарбонил-

глицилтио)-2-В-метилпропан6 ил -L-пролин

(Н-Циклогексанкарбо-

нил-В-фенилаланиптио)-2-Б мeтилпpoпaнoил)-L-пpoлин

(Н-Циклогексанкарбонил

-В-лейцилтио) 2-1)-метилпропаноил -L-пролин

-77,4

0,58.

(,0,МеОН) 0,72

-57,0

0,42

(,0,МеОН) 0,48

«

,-7

,7

1,8 X 10

г7

-Т

,-7

N-LЗ-.(N-Циклoгeкcaнкapбoнил-

-D-триптофилтио)-2-В-метил- пропаноил -L-пролин

(Ы-Цйклогексанкарбонил-

-D-фенилглицилтио)-2- П-метил- пропаноил -L-пролин

(Н-Циклогексанкарбонил-

-D-метионилтио)-2-В-метилпро- паноил -L-пролин

(Н-Циклогексанкар6онил-

-D-глутаминилтис)-2-В-метил- пропаноил -L-пролин

(N-Aдaмaнтaнкapбoнил-D-

-аланилтио)-2-Р-метилпропаноил -L-пролин

Редактор С.Пекарь

Составитель И.Бочарова

Техред В.Кадар . Корректор Л.Патай

Заказ 2375/58 Тираж 371Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

.-8

-Т

-7

-7

Т а б Л И Ц а- 3

Изобретение касается производных пролива, в частности соединений общей фор1мулы L(I) : R-A-S-CH -CH(CH,)- -С(р)-К-НС(СООН)-СНа-СН-,СЙ2, где R - ацил, связанный с oL -аминогруппой аминокислоты, выбранной из группы: циклопропанкарбонил, циклогек- санкарбонил и адамантилкарбонил; А - остаток глицина, са.ркозина или oi, D-аминокислоты и имеет оЬ -карбонильную группу, которая образует тиольную сложноэфирную связь с атомом серы, или их фармацевтически приемлемых солей, которые как обладающие гипотензивным действием могут быть использованы в медицине. Для выявления фармакологических свойств получены новые (I). Процесс ведут реакцией об -пролива с соответствующей кислотой формулы (II)tR-A-S-CH -СН(СН,)-С(0) А - остаток глицина, саркозина или oi. , D-аминокисло- ты; R - указано выше, в присутствии кар- бодиимида в среде инертного орга- ническот о растворителя, например тетрагидрофурана, при (-5)-(+20) С. В случае, если используют реакци- онноспособное производное кислоты (II),то проводят удаление .защитных групп. Выделяют (I) в- свободном виде или в. виде соли. 2 з.п. ф-лы, 3 табл. I СО 00 о ел сд О) сн