Способ культивирования ткани пшеницы Советский патент 1989 года по МПК C12N5/00 

1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию изолированных тканей растений, и может быть использовано в .селекционной практике для создания новых и ускоренного размножения уже известных сортов растений.

Одним из лимитирующих факторов выращивания изолированных тканей и клеток злаковых культур является низкая регенерация растений.

Целью изобретения является увеличение выхода растений-регенерантов, а также числа зон морфогенеза (для возможности получения суспензии клеток).

В отличие от традиционных способов повышения регенерационной способности культуры соматических клеток пшеницы, основанных на подборе типа эксплантатов и оптимального состава среды, изобретение осуществляется за счет . (Л

предварительной обработки растений, из колосьев которых в качестве эксплантата для получения каллуса вычленяется незрелый зародыш воднь1м рас т- вором стимулятора -h -аминобензойной кислоты ,(ПАБК).

Способ осуществляют следующим образом.

Перед вычленением экс.плантатов в растения, из которых они вычленяются, вводят шприцем под колос за 5-6 дней до цветения водный раствор п-амино- бензойной кислоты, содержащий 5-10 г данного стимулятора на расте- ,ние. Это количество ПАБК вводят в стебель растения, благодаря использованию водного раствора концентрацией 0,1% в дозах от 1 до 5 |/л.

9-дневные незрелые зародьшги вычленяют в асептических условиях и пересаживают на питательную среду Линс- майер и Скуг с добавкой 2,4 D в кон314

центрации 2 мг/л с дальнейшим получе- нием каллуса,

Каллурную ткань выращивают в термо стате при 26-28°С с перенесением каждые 35-40 дней на свежую питательную среду. Затем после роста каллусной ткани отделенный морфогенетический каллус переносят на среду для регене- ;рации Линсмайер и Скуг с добавкой |ИУК в концентрации 0,5 мг./л, таким образам получая растения-регенеранты

Пример 1. Растения гомозиготной линии 20/47 яровой пшеницы Саратовская 52 выращивают в теплице в сосудах с почвой. В момент цветения Колоса каждое растение отмечают этикеткой с указанием даты ./цветения. Через 5 дней после цветения в тепли

;

: Кроме того, проводят испытания способа, аналогичные примерам 1-4, отличающиеся тем, что ПАБК вводят . в стебель через 6-дней после цветения .

В качестве контроля используют наблюдения, полученнь1е при культиви ровании ткани пшеницы без добавления ПАБК, как в пр.ототипе,

Наблгодения проводят к течение

трех пассажей, В результате использования ПАБК было установлено, что

предварительная o6pa6oTka ее растеHipi привела к следующим результатам.

Ускорился в 1,5 раза процесс образования зон морфогенеза и зачатков побегов. Через 20 дней .после посадки зародышей на питательную среду в ва

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию изолированных тканей растений, и может быть использовано в селекционной практике для создания новых и ускоренного размножения: уже существующих сортов растений. Целью изобретения является увеличение выхода растений-регенерантов и числа морфо- генетическйх каллусных зон. Способ осуществляется за счет введения в стебель стимулятора - п-аминобензой- ной кислоты, что приводит к увеличению регенерации при культивировании незрелых зародышей на среде Линсмайе- ра и Скуга.

це проводят обработку колосьев водным 20 риантах обработки 10 -5 -10 г ПАБК

раствором ПАБК. При этом ПАВ К кон-, центрацией 0,1% вводят в стебель пшеницы под колос шприцем в дозе 1 |ил, т.е. в растение вводят ПАБК, Через 9 дней после цветения колосья срезают, отделяют зерновки, стерилизуют в ламинаре 70%-ным этанолом в I течение 7 мин. После этого стерили- 1 зованные зернов ки трижды промывают iстерильной дистиллированной водой. Затем из них стерильными препаровальными иглами вычленяют зародыши и сажают щитком вверх на среду Линсм.айер и Скуг с добавкой 2,4 D в количестве 2 мг/л.

Через 35-40 дней выросший каллус пересаживают на свежую питательную среду, одновременно морфогенетичес- кие зоны каллуса пересаживают на среду Линсмайер и Скуг С добавкой 0,5 мг/л ИУК. В последующих пассажах проводят аналогичную работу. В каждом пассаже учитывают количество полученных растений регенерантов и образовавшихся зон морфогенеза.

П р и м е .р 2, Способ осуществляют аналогично примеру 1, только вводят 5. ПАБК на растение, т.е. 0,1% ПАБК в дозе 5 л.

Примерз. Вводят Ю г ПАБК на растение (0,1% - концентрация и 100 JUл - доза введеьшя). Остальные приемы осущес твляют аналогично примеру 1 .

П р и м е р 4. Вводят 2-10

-4

ПАБК на растение, т.е. О,1% ПАБК в дозе 200 рл. Остальные приемы осуществляют аналогично примеру I.

на растение наблюдали образование зон морфогенеза и зачатки побегов, В контроле зтот процесс, длил.ся 30- 35 дней.

Увеличилась частота образования морфогенетйческих линий в 1,5 раза по сравнению с контролем. Так, в контроле за 3 пассажа регенерация наблюдалась у 48,1+6,8% каллус11ых

линий, при обработке ПАБК в количестве -10 г на растение она наблюдалась у 70,0+10,2% линий,

В 3,8 раза возрс сло число зон морфогенеза по сравнению с контролем

Контроль Предлагаёмьй

1 пассаж9,3%35,0%

11 пассаж 18,5% 55,0%

Приведен процент каллусных линий, авших наибольшее количество морфогенетических зон,

В 2,1 раза увеличилось число рас- тений-регенерантов, полученных на 1 каллусную линию (2,6- в контроле, 5,5 - при обработке ПАБК),

Кроме того, ускорился рост регене- рантов в пробирках. Через 30 дней после посадки морфогенетического каллуса в среду для регенерации часть регенерантов была -пригодна для пересадки в перлит (в контроле это не наблюдалось)..

Формула изобретения Способ культивирования ткани пше- ницы, включающий посадку на среду незрелых Зародышей с последующим получением растений-репенерантов, о т- личающийся тем, что, с целью увеличения выхода растений-реге514583866

нерантов и числа зон морфогенеза, раствор ь-аминобензойной кислоты, ;В стебель растения через 5-6 дней ; содержащий lU- -3-10 r и-аминобен- после цветения вводят шприцем водный ойной кислоты на растение.