Способ определения эффективности включений изотопа иод-125 при радиоиодировании белков и нуклеотидов Советский патент 1991 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов изотопами иода.

Цель изобретения - сокращение времени определения.

Способ осуществляют следующим образом.

В реакционную смесь добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия. Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют, смесью ацетона с водой, содержащей 5 20% воды по обьему с последующей радиометрией.

П р и м е р 1. Определение эффективности включения изотопа при получении 1-2-0- сукцинил-тирозинметилового эфира адёно- зин-3,5-циклофосфата(1251-цАМФ).

В ампулу с 20 мкл 0,1 М натрий фосфатного буфера рН 7,0 (НФБ) вносят 2 мкл раствора (0,2 мКи) Na 1, 10 мкл раствора (10 с мкг) хлорамина Т и 10 мкл раствора (1 мкг) 2 -0-сукцинилтирозинметилового эфира аде- нозин-3 , 5 -циклофосфата. Перемешивают в течение 30 с при комнатной температуре. Реакцию останавливают прибавлением 10 мкл раствора (10 мкг) метабисульфита натрия. Прибавляют к реакционной смеси 200 мкл, 0,05 М натрий ацетатного буфера рН 6,0, содержащего 0,05% БСА и 0,1 азида натрия.

Отбирают аликвоту объемом 2 мкл, наносят ее на пластинку силуфола, сушат и хроматографируют в ацетоне, содержащем 5% воды. Пластинку силуфола режут на поперечные полоски шириной по 0,7 см и, поместив последовательно в пробирки, просчитывают на гамма-счетчике. Определяют эффективность включения изотопа (ЭВ) по отношению счета радиоактивности, оставО VI О

сл чэ ю

шейся на старте и соответствующей целевому продукту (1 пр), к общему количеству счета радиоактивности взятой аликвоты (1) по формуле:

ЭВ }Е-Х100%

Эффективность включения 77,2%.

П р и м е р 2. Определение эффективности включения изотопа при радиоиодирова- нии хорионического гонадотропина

человека (1251-чХГ)В ампулу с 20 мкл 0.1 М НФЕ вносят 5 мкл раствора (1 мКи)№ 1,10 мкл раствора (5 мкг) хлорамина Т, 10 мкл раствора (9 мкг хорионического гонадотропина человека. Перемешивают в течение 20 с при комнатной температуре. Останавливают реакцию прибавлением 10 мкл раствора (4 мкг) мета- бисульфита натрия. Вносят 200 мкл 0,1 М НФБ, содержащего 0,5% бычьего сывороточного альбумина и 0,02% азида натрия.

Отбирают акликвоту объемом 2 мкл и наносят ее на пластинку силуфола. Сушат, анализируют в ацетоне, содержащем 10% воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1. Эффективность включения 54,3%.

ПримерЗ. Определение эффективности радиоиодирования при получении 1 1- раково-эмбрионального антигена (1251-РЭА).

В ампулу с 20 мкл 0.1 М НФБ вносят 10 мкл раствора (2 мКи) Па 1,80 мкл раствора (80 мкг) раково-эмбрионального антигена, 20 мкл раствора (20 мкг) хлорамина Т. Реакцию проводят в течение 30 с при комнатной температуре. Останавливают прибавлением 20 мкл раствора (20 мкг) метабисульфита натрия. Разбавляют реакционную смесь 200 мкл 0,1 М НФБ, содержащего 0,1% бычьего сывороточного альбумина и 0,02% азида натрия.

Аликвоту объемом 1 мкл из реакционной смеси наносят на пластинку силуфола и хро- матографируют в ацетоне, содержащем 20% воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1. Эффективность включения 51%.

Данные определения эффективности включения изотопа в разных условиях сведены в таблицу 1.

Из таблицы следует, что продажный ацетон (ч.ж.а.) непригоден для анализа, а использование 5 - 20% воды включает оптимальный вариант (10%). Дальнейшее увеличение количества воды ухудшает

разделение из-за растворимости метки, при этом увеличивается время анализа.

Данный способ по сравнению с прототипом позволяет уменьшить время определения эффективности включения изотопа

при радиоиодировании в 24 - 48 раз. Использование ацетона, содержащего 5 - 20% воды, для анализа реакционной смеси на пластинке силуфола позволяет достаточно быстро произвести определение эффективности включения изотопа и тем самым сократить время нахождения целевого продукта в реакционной смеси, содержащей избыточные количества химических реагентов.

Формула изобретения

Способ определения эффективности включений изотопа иод-125 при радиоиодировании белков и нуклеотидов, включающий хроматографию аликвоты реакционной

смеси на силуфоле с последующей радиометрией, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени, определения к реакционной смеси до хроматографирова- ния добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия, а хроматографирование осуществляют смесью ацетона с вЬдой, содержащей 5 - 20% воды по объему.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов изотопами иода. Цель изобретения - сокращение времени определения. В реакционную смесь добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия. Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют смесью ацетона с водой, содержащей 5 - 20% воды по объему, с последующей радиометрией. 1 табл.