Способ получения ( @ I)-кислой фосфатазы предстательной железы человека Советский патент 1992 года по МПК G01N33/534 A61K35/48 

сл С

Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для получения меченной 1251-кислой фосфатазы предстательной железы человека. Цель изобретения - увеличение выхода целевого продукта и повышение его специфичности. Кислую фосфатазу предстательной железы человека рарионодируют с меченным 1251- в присутствии хлорамина Т и в 0,05-0,25 м боротном буфере рН 7,4-9,0 с последующей очисткой гель-фильтрацией. Выход увеличивается по сравнению с прототипом в 2-3,5 раза с одновременным увеличением специфичности связывания с субстратом.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к усовершенствованному способу получения 1-кислой фосфатазы предстательной железы человека ( 1-КФП), которая может быть использована в качестве компонента радиодиагностического набора для определения уровня кислой фосфатазы предстательной железы человека при диагностике рака предстательной железы, для оценки эффективности противоопухолевой терапии.

Известен способ получения меченного -КФР (1). Субстрат при этом радиоиоди- руют в присутствии хлорамина Т, используя а I в 0,05 М ацетате натрия рН 6,0. Маркер получают с низким радиохимическим выходом (около 28%). Известен способ получения (1251)-КФП методом конъюгации (2) с

И25

125

использованием 1-реактива Болтона-Хан- тера, 11-сукцинимидил-3-(4-окси-, 5-1251- йодофенил)-пропионата, получают маркер

с низкой удельной активностью порядка 6 мкКИ/мкг,

Наиболее близким к заявляемому является способ (прототип), который заключается в том, что кислую фосфатазу предстательной железы человека радио- иодируют 11а IB присутствии хлорамина Т. Радиоиодирование проводят в 0,5 М фосфатном буфере рН 7,4. Реакцию останавливают прибавлением метабисульфата натрия, растворенного также в фосфатном буфере. Реакционную смесь наносят на колонку с сефадексом и элюируют с фосфатным буфером, Полученная ( )-КФП имела специфичность около 85%. Радиохимический выход составлял 10-22%.

Хотя авторы используют оптимальный для хлораминового метода буфер и рН (фосфатный буфер, рН 7,4) и большие количества окислителя (хлорамин Т, 20 мкг). существенным недостатком способа является низкий

VJ

О

VJ

N СО

N

радиохимический выход и невысокая специфичность маркера на дату получения.

Целью изобретения является увеличение радиохимического выхода и специфичность целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Радиоиодирование КФП с 11а I проводят в присутствии хлорамина Т в 0,05- 0,25 М С кратном 6у$ёЬе при рН 7,4-9,0. Реакцию останавливают прибавлением ме- табисульфита натрия растворенного в фосфатном буфере. Реакционную смесь наносят на колонку с сефадексом и элюиру- ют фосфатным буфером.

Пример 1. В ампулу с 10 мкл 0,2 М боратного буфера, рН 8, вносят3 мкл (1 мКи) 11а1251, 10 мкл (10 мкг) хлорамина Т в 0,2 М боратном буфере, рН 8, и 20 мкл (40 мкг) КФП. Реакционную смесь перемешивают 30 сек., реакцию останавливали- прибавлением 10 мкл (10 мкг) метабисульфита натрия. В ампулу вносят 10 мкл (2 мг) йодистого калия, 200 мкг 0,1 М фосфатного буфера, содержащего 0,15 М хлористого натрия, 0,1 % бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 0,02% азида натрия. Реакционную смесь наносят на колонку (1 х 40 см) с сф сефадексом С-100 и элюируют 0,1 М фосфатным буфером, содержащим 0,15 М хлористого натрия, 0,1 % БСА и 0,02% азида натрия. Скорость элюции 6 мл/ч, фракции по 1 мл. Радиохимический выход составил 77,8%. Специфичность (1251)-КФП в пределах 89,1-96,3%.

Пример 2. Процесс проводят по примеру 1, используя 0,05 М боратный буфер рН 7,4. Выход целевого продукта 57,6%. Специфичность ( )-КФП составляла 85,7- 92%.

Пример 3. Процесс проводят по примеру 1, используя 0,25 М боратный буфер рН 8. Выход целевого продукта 78 3%. Специфичность маркера 88,3-95%.

Пример 4. Процесс проводят по примеру 1, используя 0,1 М боратный буфер.

рН 9. Выход целевого продукта 46%. Специфичность (1251)-КПФ в пределах 87,5-93,2%. Заявляемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта в 2-3,5 раза по сравнению с прототипом. Необходимо

отметить, что положительный эффект достигается за счет предложенных авторами изменений в классическом хлораминовом методе, где согласно литературным данным оптимальным для радиоиодирования является фосфатный буфер, рН 7,4. Найденные нами условия для мечения КФП позволили не только увеличить радиохимический выход при уменьшении в два раза количества хлорамина Т по сравнению с прототипом, но

и получить высокоиммунореактивный маркер. Связывание с антителами целевого продукта 85,7-96,3%, что выше, чем у прототипа.

Разработанный способ увеличивает выход маркера, делает технологию получения ( )-КФП более экономной, улучшает качество маркера, используемого как компонент набора для радиоиммунологического микроанализа.

5

0

( 1)-кислой фосфаФормула изо тения

Способ получения тазы предстательной железы человека путем радиоиодирования в присутствии хлорамина Т в буферном растворе, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта буферным раствором, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его специфичности, радиоиодирование проводят в 0,05-0,25 М боратном буферном растворе рН 7,4-9,0.