Способ получения белков, меченых изотопом иод-125 Советский патент 1991 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к биохимии и едицине, а именно к усовершенствованному способу получения белков, меченых изотопом иод-125, которые могут найти применппии в иммунохими- ческих исследованиях и в качестве компонентов радиодиагностических наборов для радиоиммунологического медицинского микроанализа.

Целью изобретения яьляется повышение стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки.

Приме р 1. Получение иод-125- йнсулина.

В ампулу с I мКи натрий-иод-125 вносят 0,5 мкг (1,78 нмоль) хлорамина Т, 4 мкг (0,7 нмоль) инсулина. Реакцию проводят в 0,1 М натрийфосфат- ном буфере, содержащем 3% азида натрия. Перемешивают 30 с. Останавливают реакцию прибаиленнем 20 мкл (0,3 мкг) цистеина в 0,1 М натрийфосфатном буфере. Выделяют псдопой продукт хроматографией па гофядек- се G--50. Радиохимический выход 86,6, Связывание избытком лититсл 95%, неспецифическое свячыванип 3,3Z.

П р и м е р 2. Получение иод-125- альфа-субъединицы хорионичсского го- надотропииа.

В ампулу с 0,5 мКи натрий-иод-125 вносят 1.мкг (3,55 имоль) хлорамина Т, 5 мкг (0,33 н«оль) альфа-субъ- единицы хорионического гонадотропи- на. Реакцию проводят в О,I М натрий- фосфатном буфере, содержащем 5% азида натрия. Перемешивают 15 с. Оста- танавливают реакцию прибавлпниг.м 20 мкл (0,68 мкг метабисульфита натрия в 0,1 М иатрийфосфат11ом буфере. Выделяют целевой продукт хроматографией иа сефадексе G-50. Р.чдип- химический выход 75,3%. СПЯЭЫРШГИР

ел эо

00

10

избытком антител 97-99,3%. Неспецифическое связываний 3,5%.

П р и м «Г 1 3. Получение иод-125- хорионического 1ч- надотропина.

В ампулу с 1 мКи натрий-иод- 25 рносят J мкг СЗ,55 нмоль) хяорами- иа Т, 7 мкг I 0,18 нмоль) хорионич.ес- .кого гонадотропинд. Реакцию проводят в 0,1 М натрийфосфатном буфере, со держащем 0,3% азида натрия. Перемешивают 0 с. Останавливают реакцию прибавлением 20 мкл (0,5 мкг) цйстеи- на в 0,1 М натрийфосфатном буфере. Выделяют целевой продукт хроматогра- .5 фией на сефадексе G-100. Радиохимический выход 62%. Связывание избытком антител 9А%, неспецифическое связывание 3,6%.

Радиоиодирование хорионического гонадотропина человека хлораминовым методбм известным способом не позвоило получить стабильный меченый беок: при хранении маркер теряет способность связываться с антителами, за первые 10 дн. на 15-20%, за 3 неели на . Такая метка не могла быть использована для создания радиоммунологического набора, срок годности которого установлен 30 дн. Предлагаемый способ радиоиодиро вания в присутствии азида натрия позволил получить стабильный гормон: иммунореактивность на день получения 94%, а после 40 дней хранения соста- вила 65,3%.. Стабильность такой метки, .пользуемой в РИА-наборе, подтвержена с помощью контрольной сБшоротКи ирмы ORIS (Франция) с деклариро-; ванной концентрацией хорионического гонадотропина человека 78 гмоль/л. Стабильность набора определяется ста20

25

30

35

40

0

.5

0

5

0

5

0

бильностью используемого маркера - более продолжительные сроки годности антител и стандартов не лимитируют срок годности набора. Процент открй- тия после 40 дн. хранения составил 102,6+3,1 (). Поскольку для данного вида анализа коэффициент вариации допустим-В пределах +10%, то определенная концентрация контрольной . сыворотки подтверждает, качество и стабильность метки, полученной предлагаемым способом.

Формула изобрете ни я

Способ получения белков, меченых изотопом иод-1 25 путем составления ий- кубационной смеси из 0,5-1,0 мКи натрий- иод- 125, О, М фосфатного буфера с рН 7,4, ljO-8,0 мкг хлорамина Т, 4,0-40,0 мкг белка, инкубации с перемешиванием в течение 10-30 с при - комнатной температуре, остановки реакции добавлением в инкубационную смесь 0,68-5,4 мкг метабисульфита натрия или 0,3-0,5 мкгцистеина, затем ,0,I М фосфатного буфера, содержаще- го 200 мкг KI, 200 мкг бычьего сывороточного альбумина и 0,02% аэнда натрия, последующего хроматографирова- ния на колонке с сефадексом 00 и элюир эвання целевого продукта раст- .вором, содержащим О, М фосфатного- буфера, 0,1% бычьего сывороточного альбуйина и 0,02% азида натрия р т- Jl и ч а ю щ rf и с я тем, что, с целью повышения стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки, в инкубационную смесь азид натрия вносят в концентрации 0,3-5,0%.

Пяобретёние относится ij биохимии и медицине, п чпстности к радио- iio;uipt)FtaHiTO белков изотопом мод-125. Целью изобретения япляе тся ионьшгение .. стабильности образухпцегося KoMimeKcai - ,-j и радиоактивной метки, что дос- тиг-л€ Т1:я ппеде;нием в инкуПмропаниую среду, содержащую радиоактивную метку, белок и i хлорамин.Т,а;чилп натрия и концоитрации 0,3-5,0%. Иммунореак- типность полученного комиги-кса после /tO дн. хранения состанлпет 65,3/1.