СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЭНЦЕФАЛИТНОЙ ^^И-:^ИС TJ'AВАКЦИНЫ Советский патент 1965 года по МПК A61K39/193 C12N7/00 

Известны способы получения культуральной энцефалитной вакцины, например вакцины против клещевого энцефалита, инактивированной формалином. Указанные способы предусматривают выращивание вируса в однослойных культурах куриных эмбрионов с по1следующей инактивацией вирусной жидкости формалином (1:2000) при 37°С в течение трех суток, адсорбцией вируса на гидроокиси алюминия и декантацией 50% падосадочной жидкости. Такая методика выращивания весьма трудоемка и не обеспечивает удовлетворительной иммуногенности вакцин.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что вирус выращивают во взвеси трипсинизированных клеток и инактивируют в присутствии клеток и клеточного детрита. Это упрощает производственный процесс и повыщает иммуногенные свойства вакцинь;.

Для изготовления культуральной вакпины против клещевого энцефалита получают первично оттрипсинизированные клетки куриных эмбриональных фибропластов, заражают взвеси клеток вирусом, инкубируют их во взвещепном в среде состоянии в сосудах больщой емкости, инактивпруют вирус формалином при 37°С и удаляют клетки и клеточный детрит сепарированием с последующей фильтрацией через осветляющие и стерилизующие фильтры.

фибропластов получают в результате трипсинизации 11-дневных куриных эмбрионов. Сливы оттрипсинизированных клеток до центрифугирования разбавляют равным количеством

среды, состоящей из 0,5% гидролизата лактальбумина isa солевом растворе Эрля с добавлением 3% нормальной бычьей сыворотки. Из оттриисинизированных клеток составляют взвеси необходимой концентрации (1,5-

2,5 млн. клеток на 1 мл). Для лучщей адсорбции вируса на клетках при заражении сначала готовят взвещенную культуру пятикратной концентрации, а через 2-2,5 час инкубации при комнатной температуре ее разводят четырехкратным объемом среды. Для заражения клеток используют щтаммы «Софьин или «Пан в виде эмульсии мозговой ткани инфицированных мыщей из расчета Юз LDso мл взвешенной культуры.

Для инкубирования инфицированных взвещенных культур используют среду Паркера № 199 па растворе Эрля с добавлением 0,1% гидролизата лактальбумина и 5% аминопептида при рН 7,8.

Взвещенные культуры получают либо в бутылях нейтрального стекла емкостью 5 л и более, либо в специальных реакторах. В обоих случаях необходи.мо постоянное перемешивание. Инкубирование инфицированных культур

поддержания равновесия в содержании СОэ емкости должны быть герметизированы и над слоем жидкости оставляют прослойку воздуха примерно на /з объема.

Во время инкубации до 50% клеток отмирает, и при этом происходит дополнительный выход в жидкую фазу внутриклеточного вируса и веществ, стабилизирующих инфекционные и антигенные свойства вируса. По окончании инкубации непосредственно в инфицированную культуру добавляют формалин до концентрации 1 :2000. Инактивация продолжается 96 час при 37°С в присутствии клеток и клеточного детрита. После инактивации производят сепарацию и фильтрацию инактивированной инфицированной взвещенной культуры для удаления клеток и клеточного детрита.

Предметизобретения

Способ получения культуральной энцефалитной вакцины, нанример вакцины против клещевого энцефалита, инактивированной

формалином, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенных свойств вакцины и упрощения производственного процесса, вирус выращивают во взвеси трипсинизированных клеток и инактивируют в присутствии клеток

и клеточного детрита.