Способ инактивации инфекциозности вирусов Советский патент 1975 года по МПК C12K5/00 

Изобретение относится к биологической промышленности и касается получения вирусных препаратов.

Известен способ инактивации инфекциозности вирусов путем воздействия на вирусную взвесь формалином в концентрации 1 : 2000 в течение 72 час при температуре 32°С под защитой клеточного белка.

Однако известный способ длителен и не обеспечивает высокой иммуногенности препарата.

С целью повышения иммуногенности препарата и сокращения длительности технологического процесса в качестве инактивирующего агента используют продукт взаимодействия формальдегида с аминокислотой в конечной концентрации 1 :2000-1 :4000 в течение 47- 49 час.

Способ осуществляют следующим образом.

Для инактивации используют высокоочищенные инфекциозные сливы с зараженных культур ткани. Для этого культуральный инфекциозный СЛИВ сразу же подвергают обработке на сепараторе для удаления клеточного детрита и ультрафильтрации через фильтры с диаметром пор 220-450 ммк.

В фильтрат культурального вируса вводят препарат ПАМС в конечной концентрации 1 :4000. Инактивацию осуществляют при 31- 33°С в течение 47-49 час.

Состав ПАМС и способ приготовления. Препарат аминометилольных соединений (ПАМС) получают при смешивании водных растворов 40%-ного формалина и лизина (в

0,1 М а-фосфатном буфере). Конечная концентрация формальдегида 0,166 М (рН раствора доводят до 6,8). Конечную концентрацию лизина, взятого в избытке, с целью связывания всего формальдегида, определяют

константой равновесия реакции образования монометилольного производного и она равна 0,7 М. Готовый раствор двух ингредиентов содержит метилольное производное амина в концентрации, эквимолярной конечной концентрации СН2О 0,166 М, а также свободный амин (0,54 М). Свободный формальдегид в растворе отсутствует. При приготовлении ПАМС формалин разводят в 80 раз, а содержание метилольного производного амина в

препарате эквимолярно исходному формалину, ДЛЯ сравнения результатов проводившихся испытаний ПАМС и формальдегида все разведения ПАМС делают с учетом исходного разведения 1 :80. Эта технология обеспечивает полную инактивацию инфекциозности вируса с сохранением иммуногенных и антигенных свойств.

Препарат аминометилольных соединений (ПАМС) применяют на двух моделях: для

инактивации вируса клещевого энцефалита

(КЭ) выращенного в культуре ткани куриного эмбриона и вируса крымской геморрагической лихорадки (КГЛ), размноженного в мозгу зараженных новорожденных белых мышей и одновременно для стабилизации нх антигенов. Ииактивацию вирусов проводят с целью изготовления нммуногенных иреиаратов, создающих достаточно высокую иммунологическую резистентиость у вакционированных белых мышей (нротив КЭ) или ирнгодных для иммунизации животных-доноров гииериммунных глобулинов (иротив КГЛ) или в качестве антигенов в реакции связывания комнлемента. Под воздействием формалина в разведении 1 :2000 и ирепарата, ПАМС в разведении 1 :4000 ири темиературе 32°С в бесклеточной среде с одной серией вируса свидетельствуют о значительиом иревосходстве ПАМС. Титры вируса КЭ иод воздействием ПАМС резко иадают уже через 6, 12, 18 час и иолностью отсутствуют, начиная с 24 час иосле начала опыта, в то время как формалин не полностью инактивировал вирус КЭ даже через 48 час после начала опыта. Обе партии вируса: с формалином и с ПАМС выдерживают прн32°С в течение 72 час, затем используют для вакцииацни белых мышей по стандартной методике. Испытание иммунологической резнстентности двух групп вакцинированных мышей показало, что вакцина, ириготовленная с ПАМС, обладает приемлемой иммуногенностью, ее индекс равен 4,0, вакцина, приготовленная с формалином имеет индекс 2,9 и не удовлетворяет требованиям официального стандарта иммуногенности.

Инактивация двух серий вируса тремя разными разведениями ПАМС дает в пяти случаях из шести высокоиммуногенные вакцины, тогда как из двух серий вакцины с применением формалина одна не соответствует требованиям стандарта.

При инактивации препаратами формалина и ПАМС вируса крымской геморрагической лихорадки, находившегося в 10% взвеси мозга новорожденных белых мышей, при температуре 24°С, когда оба препарата представлены в разведении 1 :4000 и I :8000, скорость инактивации вируса с помощью ПАМС значительно больше, чем при обработке формалином.

Все оныты по инактивации как культурального вируса КЭ, так и в мозговой взвеси вируса КГЛ показывают значительные преимущества применения ПАМС по сравнению с, формалином.

Предмет изобретения

Способ инактивации инфекциозности вирусов путем обработки вируссодержащей жидкости инактивирующим агентом, отличающийся тем, что, с целью повыщения иммуногенности препарата и сокращения длительности технологического процесса в качестве инактивирующего агента используют продукт взаимодействия формальдегида с аминокислотой в конечной концентрации 1 :2000-1 :4000 в течение 47-49 час.