Штамм для приготовления вакцины против клещевого энцефалита Советский патент 1980 года по МПК C12K5/00 

Обладает гемагглютинирующими свойствами. Гемагглютинируюший анти ген агглютинирует 0,3%-ные 1усиные эритроциты в зоне рН фосфатного 6,2 и имеет титр в РГА 1;1280, При репродукции вируса в культур ткани гемагглютинины накапливаются в титре 1:80. При инокуляции № 205 кро ликов и морских свинок в крови животных на 10-14 день образуются вир нейтрализующие антитела с титром 1:1280, Индекс нейтрализации кроличьей сыворотки с гомологичным шта мом 5012, по БОЕ 10000, в культуре ткани титр сыворотки 1:80 -.1:160. Биологические признаки. Штамм является высокопатогенньам для всех весовых категорий мышей БДЛБ и беспородных, У зараженных мыгчей вирус вызывал типичную картину эксперимен тального менингоэнцефалита с инкуба ционным периодом при внутримозговом введении 5-6 дней, при внутрибрюшин ном и подкожном 6-8 дней. Максимал ные титры (в логарифмах ) пр внутримозговом введении 9,0-10,8, подкожном 8,0-9,0, внутрибрюшинном 7,0-8,5, индекс инвазивности 0,67-1 Антигенные свойства. Антигенные связи штагФ1а № 205 изучены в перекрестках РТГА и кинематической РТГА В реакциях были использованы гиперим мунные кроличьи сыворотки к штаммам вируса клещевого энцефалита Софьин Пан, Хабаровский-17, Абсет , Хабаровский-17 205 и боратно-солевые таров антигены. Штамм № 205 имеет близкое антиген ное родство с западными и восточными вариантами вируса клешевого энцефалита. Ниже.показаны антигенные связи штамма № 205, СывороткиlijTaMM № 205 штаммов Штамм № 205 1:1280 Софьин 1:320-640 Хабаровский-17 Пан Абсеттаров Сыворотка к штам1лу № 205 реагиров ла со Штаммами Софьин Абсеттаров в титрах, равных гомологичному (1:1280) , со штаммами Пан , Хабаровский-17 - соответственно в 4 и 2 раза ниже гомологичного титра, в то время, как сыворотка к штам Софьин реагировала в высоком титре (1:1280) только с гомологичным гчтаммом. Со штаМт- ами Пан , Хабаровский-17, № 205, .Абсеттаров титры были соответственно в 4-8, 4, 4-2 раза меньше, чем с гомологичным ilinMIIO.M. Сравнительные данные антиг-енной активности штаммов № 205 и Софьин Софьин 1: 1280-2560 1:1280 Пан 1:320 1 : 160-320 Хаба- 1:640 ровский-17 Как видно из табл, штамм № 205 обладает более высокой антигенной активностью по сравнению со штаммом Софьин, в среднем в 4 раза превы иая последний и широким антигенным спектром, имея близкие связи с западным и восточным вариантами вируса клешевого энцефалита. И|У1муногенные свойства. Вызывает иммунную защиту с высоким показателем резистентности 10000000 против вирулентного тест-штамма Абсеттаров . Использование штамма 205 для приготовления инактивированной вакцины против клешевого энцефалита поясняется следующим конкретным примером. Пример. Для получения инактивированной вакцины используется первично-трипсинизированная культура фибропластов 9-дневного куриного эмбриона. После удаления головы, внутренних органов и ороговевших частей тела эмбрионы .заливаются 0,l%-HbUvi раствором трипсина, Трипсинизация проводится в 3 цикла, каждый в течение 10 мин при комнатной температуре. Полученная суспензия клеток центрифугируется при 2000 оборотов в течение 10 мин, осадок ресуспендируется в среде лактальбумина с добавлением 10%-ной нормальной бычьей сыворотки. Взвесь клеток (500 тыс. в 1 мл) высевается в 1,5-литровые матрасы. Культура для заражения используется через 48 ч после посадки по мере образования плотного монослоя. Посевным материалом служит 10%-ная суспензия мозга мышей, Мыией заражают в мозг штаммом № 205 по 0,03 мл. При проявлении выраженных параличей на 4-5 сутки мыши забиваются, извлекается асептично мозг и готовится 1. суспензия мозговоЯ ткани путем оастирания в ступке с добавлен ем 199 среды. Полученная мозговая взвесь центрифугируется при 2000 обо ротах в течение 10 мин. Надосадочная жидкость отсасывается и вносится пос ле удаления ростовой среды на монослой культуры ткани в объеме 1,5 мл. Зараженные культуры помещаются в термостат при ЗУс в течение 2 ч для адсорбации. По истечении периода адсорбации в зараженные матрасы вносится питательная среда 199 с 1% человеческого альбумина. На 5 сутки после заражения проводится сбор куль туральной жидкости. Инактивация виру са осуществляется формальдегидом в конечной концентрации 1:200 при +30° в течение 3 суток. Часть инфицированной культурально жидкости до инактивации берется для проверки инфекционности материала при внутримозговом титровании мышей (7-8 г веса). Титр культуральной жидкости составлял логарифм ЛД5о 8,0/1 мл. Контроль на остаточную нейровирулентность (безопасность) инактивированного препарата проверяется в опытах на мышах при внутримозговом введении десятикратных разведений препа рата 10 - 10 . Инфекционные титры вируса при репродукции его в мозге мыией и в культуре ткани значительно превышают титры штамма Софьин (титры в логарифмах мл при внутримозговом введении 8,5-9,0; подкожном 6,5-6,7; внутрибрюшинном 6,2-7,0; титр по БОЕ 7,8). Инвазивность штамма № 205 выше по сравнению со штаммом Софьин (индекс инвазивности штамма № 205 соста ляет 0,67-1,2, штамма Софьин 1,8-2,9). Штамм № 205 обладает по сравнению со штаммом Софьин более высокоиммуногенными и антигенными свойства ми. Инактивированная вакцина, приготовленная с использованием штамма 205, имела высокий индекс резистен ности - 10000000 (индекс резистентности штамма Софьин составляет 10000-1000000). Штамм № 205 обладает широким спек ром антигенных связей: имеет близкое антигенное родство как с западными, так и восточнЕдми вариантами вируса клещевого энцефалита, и высокой антигенной активностью, в среднем в 4 превышающей активность штамма Софьин. Ввиду того, что накопление инфекционного вируса как при репродукции в мозге мышей, так и в культуре ткани выше по сравнению с используемьлм в настоящее время штаммом Софьин, приготовление вакцины с использованием штамма № 205-является более экономичным. Формула изобретения Штамм viri ixodici encephalitidis № 205 для приготовления вакцины против клещевого энцефалита. Хранится ж коллекции института вирусологии под регистрационным номером ГКВ-00553. Культуральные признаки. Хорошо размножается в первичной культуре клеток фибробластов куриного и перепелиного эмбрионов и в перевиваемой клеточной линии СПЭВ с пиком накопления вируса на 4-5 сутки. Биологические признаки. Высоко патогенен для мышей линии БАЛБ и беспородных. Пассируется через мозг мышей. Биологическая активность. Обладает высокой инфекционностью и инвазивностью, титр накопления вируса в культуре ткани 7,5-7,8 логарифма ,, в мозге мыией 9,0-ГО,8 логарифма ЛД 50 /мл. Серологические признаки. Вызывает образование вируснейтрализуюших и гемагглютинирующих антител. Геммагглютинирует эритроциты гуся. Антигенность. Обладает широким спектром антигенного действия и высокой антигенной активностью. Иммуногенность. Вызывает иммуногенную защиту с высоким показателем резистентности - 10000000 против вирулентного тест-штамма Абсеттарор вируса клещевого энцефалита. Источники информации, принятые во внимание при эксперти 1. Каталог штаммов, вып.4, М., 1962.