СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/53 A61B5/117 

Изобретение относится к медицине, а именно к разделу биологических судебно-медицинских исследований, и может найти применение в качестве диагностического критерия группы крови Glm(-l).

Судебно-биологическая экспертиза пятен крови на вещественных доказательствах играет важную роль для органов суда и следствия, так как дает дополнительную информацию при розыскных мероприятиях, сужает круг подозреваемых, а также (выполняя поставленные задачи), отвечает на вопросы о возможной принадлежности изучаемых объектов определенным лицам.

В случае когда кровь проходящих по делу лиц по системе АВО совпала, согласно перечню обязательных исследований, эксперт обязан провести дифференцирование крови по другим изосерологическим системам. Для этого наиболее часто используют сывороточную систему крови Gm. Преимущество ее в том, что она имеет высокую информативность, только по одному фактору соотношение людей с группой Glm(l) к Glm(-l) примерно 1:1. Маркеры системы достаточно устойчивы, хорошо сохраняются в высушенной крови, многие внешние воздействия хотя и несколько снижают возможности обнаружения Gm факторов, но не приводят к их разрушению. Реакция определения антигенов системы Gm в высокой степени является чувствительной, специфичной, она проста в исполнении и не требует большого количества исследуемого материала.

Однако, несмотря на широкое использование системы Gm в практике, до настоящего времени окончательно не решен вопрос о трактовке отрицательного результата реакции, поскольку невыявление антигена не означает его первоначального отсутствия в исследуемом объекте.

Отечественными исследователями были предприняты попытки поиска критериев объективной оценки отрицательного результата реакции.

Е.Е. Гальцева (Критерии диагностики группы Glm(-l) в следах крови на вещественных доказательствах. /Актуальные вопросы теории и практики судебной медицины, Ленинград, 1986, стр. 149-151) рекомендовала в качестве косвенного критерия для трактовки отрицательного результата реакции использовать концентрацию общего белка (в экстракте из пятна), мотивируя эту рекомендацию тем, что содержание антигена Glm(l) в исследуемом материале пропорционально количеству общего белка, которое автор устанавливала по методу В.П. Чернова (1975).

Этот метод вполне гарантирует от ошибочной диагностики группы крови Glm(-l) только в неразведенных, насыщенных пятнах. Однако то, что автор ориентируется на содержание общего белка, в том числе и гемоглобина (тогда как антигены системы Gm располагаются на молекулах γ-глобулиновой фракции сывороточного белка), не дает оснований всегда считать этот показатель достоверным критерием для выбора трактовки невыявления Glm(l) фактора в исследуемом материале.

В качестве прототипа выбрано предложение М.И. Потапова и Г.П. Колоколовой (Определение группы Glm(-l) в следах крови. СМЭ № 4, 1984, стр. 40-41), которые считают, что для обоснования вывода о группе крови Glm(-l) необходимо доказать наличие в объекте IgG. Для этого авторы предложили серологический способ контроля - проведение реакции задержки агглютинации с антиглобулиновой сывороткой (АГС). В основе реакции лежит способность иммуноглобулинов G (являющихся носителями антигенных детерминант системы Gm) инактивировать АГС.

Задержка исследуемой сывороткой или вытяжкой из пятна агглютинации с АГС (содержащей антитела к иммуноглобулинам первого подкласса - AFCG1) сенсибилизированных тест-эритроцитов свидетельствует о наличии в объекте IgGl и, по мнению авторов, об истинности фенотипа Glm(-l). Если в основном опыте с АГС торможения реакции не происходит (АГС не инактивируется), это означает отсутствие в объекте IgGl. Тогда невыявление фактора Glm(l) в нем нельзя расценивать как группу Glm(-l).

Недостатком предложенного метода является то, что авторы хотя и отметили в своей работе, что чувствительность пробы с АГС выше чувствительности с сывороткой a-Gm, но не учли, что это обстоятельство снижает ценность предложенного контрольного опыта. Достоверным контролем любого исследования может служить реакция, чувствительность которой равна или ниже, но не выше чувствительности основного опыта. В качественном варианте реакции задержки агглютинации с АГС, рекомендованном М.И. Потаповым и Г.П. Колоколовой, в силу высокой чувствительности этой пробы может быть получен положительный результат даже при сниженном содержании IgG в исследуемом объекте, но такое количество иммуноглобулинов может оказаться недостаточным для полного истощения тест-сыворотки a-Gm в основном опыте, обладающем меньшим порогом чувствительности. Кроме того, авторы ориентируются только на факт наличия иммуноглобулинов в исследуемом объекте, не учитывая, что их количество может быть недостаточным для обнаружения антигена Glm(l).

Новизна предлагаемого способа в том, что определяют не только наличие иммуноглобулинов в экстрактах из пятен цельной крови, но и их количественный уровень.

Существенным отличием предложения является то, что устанавливают количественное содержание иммуноглобулинов и при показаниях 1,4 г/л и выше делают вывод о группе крови Glm(-l).

Нами изучено содержание IgG в экстрактах из пятен цельной крови у людей с группой Glm(l). Параллельно готовили кратные разведения цельной крови от этих же лиц. С каждым разведением проводили реакцию торможения гемагглютинации для определения антигена Glm(l) и таким образом устанавливали конечное разведение (пороговое для каждого образца), в котором выявляется искомый антиген. Зная содержание иммуноглобулинов в экстрактах цельной крови, мы рассчитали его уровень в пороговом разведении, то есть минимальный уровень IgG, который обеспечивает выявление антигена Glm(l). Это значение было равно - 1,4 г/л.

При проведении данного исследования вытяжку вносят в лунку, вырезанную в агаре, в котором предварительно диспергирована моноспецифическая диагностическая сыворотка. Реакцию проводят в 1,5% агаре в веронал-мединаловом буфере, используя диагностическую моноспецифическую сыворотку анти-IgG(H) и контрольную сыворотку с известным содержанием IgG. Уровень IgG определяют в г/л по калибровочной кривой после измерения диаметра колец преципитации.

Таким образом, определение содержания иммуноглобулинов в исследуемом объекте и его сравнение с минимально необходимым уровнем, который обеспечивает выявление антигена Glm(l), и позволяет сделать вывод о группе крови по системе Gm, а также решить вопрос о возможной принадлежности данной крови конкретному лицу.

Способ осуществляют следующим образом: исследуемую вытяжку вносят в лунку, вырезанную в агаре, в котором предварительно диспергирована моноспецифическая диагностическая сыворотка. Реакцию проводят в 1,5% агаре в веронал-мединаловом буфере, используют диагностическую сыворотку с известным содержанием IgG. Уровень IgG определяют в г/л по калибровочной кривой после измерения диаметра колец преципитации, установленный уровень иммуноглобулинов в исследуемом объекте сравнивают с минимально необходимым, который обеспечивает выявление антигена Glm(l) - 1,4 г/л и выше, на основании чего делают вывод о группе крови по системе Gm. Способ позволяет решить вопрос о возможной принадлежности данной крови конкретному лицу.

Способ определения возможной принадлежности крови конкретному лицу в пятнах крови на вещественных доказательствах с помощью реакции агглютинации и определения наличия иммуноглобулинов IgG, отличающийся тем, что дополнительно определяют содержание IgG в экстрактах из пятен крови у людей с группой Glm(-1), параллельно готовят кратные разведения цельной крови от этих же людей, проводя с каждым разведением реакцию торможения гемагглютинации для определения антигена Glm(1), устанавливая таким образом пороговое разведение для каждого образца с искомым антигеном, и после измерения колец преципитации определяют по калибровочной кривой уровень IgG, и в случае количественного совпадения содержания иммуноглобулинов в пятнах крови вещественных доказательств и минимальным уровнем, обеспечивающим выявление антигена Glm(1), говорят о принадлежности конкретного лица к группе крови по системе Glm(1) и возможной принадлежности определяемой крови конкретному лицу.