Способ получения эмбриоидогенных каллусных культур сорго Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 C12N5/04 

Изобретение относится сельскохозяйственной биот- Ai ологи /i У быть ис- пользов- но для ускоренного размножения ценных сотов и гиОркю сорго в работах ю ГР in и /ipr JHO i инженерии в иссле- дона is по экспеч л /.с - тальному мутагенс- ге. v . и морфогенеза, в rtneTnKe v селэкц1 4/ сор с

т,ью изоби тенпч -вляе ся повышении РЫ эм5т /1догС1-1пого каллуса

СпосоЬсгсго и том )то в изолировгн- мь х кульгурзл ог& .мак:т белую матовую т , к ;блсдэю1цую повы1Г°г ычми о -1брио- идогеннь ми иями л г.гресаживают ее длч размножения на среду, содержащую 2 4 Д и комбинацию аминокислот - аспара- гин и L пропни при этом лучший эффект дости: зют тогда когда L-j-епараг н и L-npo. пин вводят з концентоации по 500-3000 мг/л

В изолированных культурах сорго присутствуют разные типь образований обладающие раЗ)Н1чн-и-и мор огеье ическими

потенциями желтая бугристая ткань, обладающая ризогенными потзнциями, очаги морфогенеза, способные к регенерации растений преимущественно по пути органогенеза, рыхлая и слизистая ткани, нвкро- тизигующие при пересадках Но только бела, чатовая ткань об 1адает способно- пью к классовому формированию эмбрио- идог Доб-звка к среде с 2,4-Д только аспар гнн или только пролина стимулирует индукцию змбриоидогенеза но не столь эффективно как комбинация обеих этих зминок с-от котооая дает максимальный результат

Кроне того, на среде, содержащей комбинацию аминокислот, наблюдается значительно менее интенсивно выделение токсического пигмента характерного для культуры тканей сорго

Способ осуществляют следующим образом

Изолированные культуры сорго получают от ьеэрегых (17 20 дней после опыле

Ё

О 00 00 00

о

1

ния) и зрелых зародышей:фрагментов молодых (свернутых в трубку) листочков или метелок на экспериментально подобранных средах, содержащих мзкро-и микроэлементы, например по MS или N 6, витамины, сахарозу 30000 мг, мезоинозит 100 мг, 2,4-Д 1-2,5 мг и 6-БАП 0,1-1,0 мг/на 1 л среды (6-БАП исключают из среды при культивировании незрелых зародышей).

Формирующиеся культуры состоят из разных морфофизиологических типов образований: желтой бугристой ризогенной тка- ни, рыхлой серой ткани, белых или полупрозрачных блестящих образований (ОМ), белой матовой ткани(БМТ), В дальней- шем для получения эмбриоидогенных культур отбирают БМТ и пересаживают ее для размножения на среду вышеуказанного состава (MS или N 6), в которой цитокинин б-БАП заменяют определенным сочетанием аминокислот: L-аспарагином (500 - 3000 мг/л) и L-пролином (500 - 3000 мг/л). На этой среде происходит интенсивная пролиферация БМТ. Для получения растений эмбриоиды, формирующиеся из БМТ, пересаживают на среду исходного состава, отличающуюся отсутствием 2,4-Д, но добавкой кинетина или 6-БАП (0,5 - 1,0 мг/л).

Пример 1. Незрелые зародыши сорго сорта Желтозерное 10, одного из самых адаптированных к условиям Поволжья, высаживают на среду, содержащую макро- и микроэлементы по N 6, сахарозу 30000 мг, мезоинозит 100 мг Bi 0,5 мг, аспарагин 200 мг, пролин 1000,мг на 1 л. Из 38 зародышей 14 дают культуры, содержащие желтую бугристую ткань и белую матовую змбриоидо- генную ткань. Выделение из гетерогенных первичных культур БМТ и пересадка ее для размножения на среду, содержащую макро- и микроэлементы по N 6, сахарозу 20000 мг,

BI 1,0 мг, мезоинозиг 100 MI. 2,4/1 O.fi мг. аспарагин 1000 мг, пролин 1000 MI I л позволяет получить клеточные пинии со с. -1. бильной интенсивной пролиферацией оо лой матовой ткани, которая прослеживаемся в течение 5 последовательных пзссажпй

Примеры 2 и 3 Исследоняниг. проводят аналогично примеру 1. но }:.- дру гих генотипах сорго (сорта Бзтян :jO при этом исследуют действие комики -ц.-. -i аминокислот в других количествах

Результаты представлены в 6г- 1-3.

При ЭТОМ ИСПОЛЬЗОВанЫ ПИГЧГС Ь. МЫ,- :;ГЧ ,-глз и N 6.

Основное преимущество изо С ре ш-ч-п заключается в позможности стабильного роста эмбриоидогенной ткани ксггоп ;: :;- обходима для получения рС е ерзц-лонио способных суспензионных к л с т с i ы .- культур и протопластов, испсльзу ощнхо - р генной и клеточной инженерии дня с-;;п-с-- по экспериментальному мутагенезу - :-:-/ль- туре in vitro и клеточной селекции.

На среде исходного состава {по «вес- ному способу) получено значительно юакн- шее количество культур с интемснгип -;.-- ростом белой матовой ткани (. ..}}.

Формуле и з о б р е т к -: и ;:.

Способ получения з бриоидоге - ы. каллусных культур сорго, оключа :н:;:--:- -«/: плантацию зародышей на питатег; чую i: --r ду, культивирование с поел ед ;c1f/ пассированием на свежую -11/ -- Г7о-и;: среду, отличающийся тем, что. с повышения выхода эмбсиондогеь -оги :.:. луса, культивирование осущкс влпю ,- питательной среде в присутствии 500 - ЗОПГ мг/л L-аспарагина и 500 ЗСОО мг/л L--po лина и для пассирования отбирсн i ; ;C.VK- матовую ткань.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для ускоренного размножения ценных сортов и гибридов сорго, в работах по генной и клеточной инженерии, в исследованиях по экспериментальному мутагенезу, генетике и физиологии морфогенеза, в генетике и селекции сорго Целью изобретения является повышение выхода эм- бриоидогенного каллуса. Изобретение предусматривает введение в питательную среду в начегтве физиогсрмонной добавки комби- иа чии , м L-пролинз. З табл

Примечание. Р 0,01 в сравнении с соответствующими показателями на дру их средах, БМТ - белая матовая ткань.

Примечание Р 0,01 в сравнении с соответствующим показателем на другой среде

Таблица 2

Таблица 3