Способ определения тромбоцитообразующей активности мегакариоцитов костного мозга на препарате Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

1

(21)4133707/14

(22) 15.10.86

(46) 07.11.91. Бюл. №41

(71)Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П.Павлова

(72)Н.Н.Мамаев и Т.И.Гричанова (53)616-0.89.9(088.8)

(56)Mazur E.M., et al., I.Labor, Clln., deed, 1988, p. 111,194-202.

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОМБОЦИ- ТООБРАЗУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ МЕГАКА- РИОЦИТОВ КОСТНОГО МОЗГА НА ПРЕПАРАТЕ

(57)Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что мазки костного мозга, фиксированные в метиловом спирте - ледяной уксусной кислоте, взятые в соотношении 3:1 , окрашивают в красителе, содержащем 50%- ный водный раствор нитрата серебра. Активность мегакариоцитов оценивают по наличию в клетках гранул серебра. При содержании в клетке гранул до 110 и больше оценивают мегакариоцит как активный, а при содержании гранул в клетке до 30 и ниже - как неактивный. Способ позволяет оценить тромбоцитообразующую активность мегакариоцитов в целой популяции, что дает возможность оценить в этом плане состояние больного, скорректировать лечение.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Целью является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

При стернальной пункции берут костный мозг. Далее готовят мазки клеток костного мозга на стекле, мазки высушивают на воздухе, затем фиксируют в смеси: метиловый спирт - ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1 в течение 5-10 мин, затем мазки ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания препараты обрабатывают в 2%-ном растворе муравьиной кислоты. По окончании инкубации стекла ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50%- ным раствором нитрата серебра по стандартной методике. После окрашивания

серебром препараты снова ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе в течение 10-20 с, подкрашивают 1%-ным раствором краски Гимза, приготовленной на фосфатном буфере с рН 6,8.

Поиск мегакариоцитов осуществляют под 100-кратным увеличением микроскопа. Главными ориентирами в идентификации клеток являются: крупный размер и наличие ярко-желтой цитоплазмы.

Определение числа ядрышек в мегака- риоцитах и подсчет в них грянул серебоа осуществляют под иммерсионным объективом с увеличением ЮООх, причем на увеличение функциональной активности мегакариоцитов указывает нарастание гранул серебра в ядрышках,свыше 100. а на уменьшение - снижение последних ниже 30.

О

со о

v4 О

П р и м е р 1, Больной, 31 г, по профессии водитель. Диагноз: аутоиммунная тромбо- цитопения с явлениями тяжелого геморрагического диатеза и постгеморрагической анемии, спленэктомия, сопутствующий эрозивный гастрит.

Больной отмечает появление синяков на теле. Не обследовался. Повторные обильные носовые кровотечения потребовали тампонирования носовых ходов. Поставлен диагноз тромбоцитопения. Больной поступает в клинику по поводу очередного носового кровотечения. При поступлении состояние больного средней тяжести, явления геморрагического диатеза на коже, в местах иньекций, тампонированные носовые ходы. Пульс 80 уд/мин, АД 180/110 мм рт.ст. Число дыханий в 1 мин - 18. Увеличение печени и селезенки не зарегистрировано. Отмечено умеренное увеличение лимфатических узлов в паховых и подмышечных областях. Анализ крови: эритроциты - 3,2x10 /л, гемоглобин 104 г/л, ЦП 1,0, ретикулоциты 3,1%, тромбоциты 2 в мазке, лейкоциты 5,0x10 /л, эоз. 4%, нейтр. 5%, сегментоядерные нейтрофилы 72%, лимфоциты 16%, моноциты 3%,анизо- цитоз +++, пойкилоцитоз ++, СОЭ 35 м/ч.

Миелограмма без особенностей. Мега- кариоциты - 68 на 250 полей зрения.

Больному был поставлен диагноз ауто- имунной тромбоцитопении и начата терапия преднизолоном в дозе 120 мг в сутки и дициноном. На 5 - и день от начала терапии количество тромбоцитов в крови повысилось до 148x109/л. с последующим снижением до (36-60)х10 на фоне снижения дозы преднизолона. Течение заболевания осложнилось присоединением бронхита, потребовавшего отсрочки сплекэктомии. Операция удаления селезенки произведена. Послеоперационный период протекал относительно благополучно. Изучение функционального состояния мегакариоци- тов, полученных при поступлении в клинику, показало, что число гранул серебра в ядрышках варьировало от 31 до 302 (среднее 170 гр./клетку). Из них 61% мегакариоцитов имели повышенную функциональную активность, а 39% - не отличались от контроля. Наименьшая активность мегакариоцитов наблюдалась в клетках с 1-3 лопастями в ядре (56 гр./клетку), промежуточная - в клетках с 4-6 лопастями (115,5 гр./клетку) и высокая - в мегакариоцитах с 7-12 и более 12 лопастями в ядрах (соответственно - 186 и 208 гр./клетку), что соответствовало высокой томбоцитообразующей активности мегакариоцитов.

П р и м е р 2. Больной, 64 лет, с диагнозом, аутоиммунная тромбоцитопения, сахарный диабет И типа. Страдает геморрагическим диатезом в течение 20 лет,

который преимущественно проявляет себя кровотечениями со стороны слизистой ротовой полости.

Количество тромбоцитов в крови все время оставалось низким (40-32хЮ9/л),а

количество мегакариоциотов в пунктате было увеличено. За год до настоящего исследования проводилась терапия винкристином (суммарная доза 18 мг), которая не принесла эффекта. Поводом для госпитализации послужило длительное непрекращающееся кровотечение из слизистой полости рта. При поступлении состояние удовлетворительное. На коже груди и живота полиморфные подкожные кровоизлияния. Бледности слизистых оболочек нет, единичные кровяные сгустки в полости рта. Пульс 72 уд./мин, АД 140/70 мм рт.ст. Нижний край печени выступает из-под реберного края на 5 см., селезенка не пальпируется.

Анализ крови: эритроциты 4,7x10 /л, гемоглобин 156 г/л, Цп 1,0, тромбоциты 10х109/л, лейкоциты 6,8x10 /л, эозинофилы 2%, нефтрофилы 5%, сегментно-ядерные нейтрофилы 64%, лимфоциты 24%, моноциты 5%, СОЭ 20 мм/ч. Глюкоза в крови 10,2 ммоль/л,

Пунктат костного мозга умеренно клеточный, гранулопоэз зрелый, эритропоэз нормобластический, умеренно раздражен.

Мегакариоциты 48:250 полей зрения. Больному было проведено 3 курса импульсной терапии преднизолоном в дозе 510 мг в сутки в течение 4 дней. На фоне этого геморрагический диатез ликвидировался. Однако

повышение количества тромбоцитов было незначительным (до 32х1012/л).

Изучение функционального состояния- мегекариоцитов, проведенного в динамике- показало, что содержание гранул сереора в

ядрышках колебалось от 8 до 264 на ядро (среднее 66,2 гр./клетку), причем в мегакариоцитах с 1-3 лопастями их было 34,2, с 4-6 лопастями - 67,5 и с 7-12 лопастями - 92,9, что соответствовало низкой функциональной активности клеток, а соответственно, и недостаточной компенсаторной реакции мегакариоцитов. Данному больному подобрано другое лечение.

Таким образом, способ позволяет повы- 0 сить точность определения активности мегакариоцитов,чтопозволяет прогнозировать тяжесть тромбоцитопении у больного, оценивать адекватность проводимой терапии и эффективность лечения.

516897916

Формула изобретениячение 5-10 мин в растворе, содержащем

Способ определения тромбоцитообра-метиловый спирт и ледяную уксусную кислозующей активности мегакариоцитов кост-ту в соотношении 3:1, при этом в качестве

ного мозга на препарате путем е го фиксациикрасителя используют 50%- ный водный расс последующим окрашиванием, о т л и ч а ю- 5твор нитрата серебра, а активность мегакащ и и с я тем, что, с целью повышенияриоцитов определяют по содержанию

точности способа, фиксацию проводят в те-гранул серебра в цитоплазме клеток.