СТАТИСТИЧЕСКИЕ СОПОЛИМЕРЫ В КАЧЕСТВЕ НИЗКОТОКСИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ ПРОЛОНГИРОВАННЫМ ГИПОТЕНЗИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Советский патент 1995 года по МПК C08G69/10 

Изобретение относится к высокомолекулярным соединениям, конкретно к статистическим сополимерам на основе L-лизина и дофамина, и способам их получения, которые могут быть использованы в биохимической практике в качестве низкотоксичных веществ, обладающих пролонгированным гипотензивным действием.

Целью изобретения является синтез статистических сополимеров формулы
HNCH-CONH с мол.м. 2000-6500, где m:n 1:1 1:3, способных применяться в качестве низкотоксичных веществ, обладающих пролонгированным гипотензивным действием, и способ получения таких статистических сополимеров.

П р и м е р 1. 0,87 г (0,0027 моль) N-карбоксиангидрида Σ-Z-L-лизина растворяют в 8 мл безводного диоксана. К раствору добавляют 0,62 г (0,0027 моль) раствора карбоната дофамина в 17 мл сухого диметилформамида, содержащего 0,38 г (0,0027 моль) триэтиламина.

Смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем отфильтровывают хлоргидрат триэтиламина.

Фильтрат выливают в 200 мл сухого эфира. Выпавшее масло трижды переосаждают из метанольного раствора в эфир. Выход сырого продукта 1,32 (98%).

Сырой продукт фракционируют на колонке (30,4 см²), заполненной сефадексом ЛШ-60, в растворе диметилформамида. В результате фракционирования отделяют гомополимер L-лизина (10%), вторая фракция целевой сополимер и третья гомополимер дофамина (5%).

Для определения состава сополимера его подвергают кислотному гидролизу в избытке 6 н. HCl (32 ч, 110^оС). Количество лизина, рассчитанного в молях, оказалось равным количеству взятого дофамина. Таким образом, можно считать, что молярное соотношение лизина и дофамина равно 50:50, что соответствует соотношению производных лизина и дофамина, введенных в реакцию сополимеризации. Найденное соотношение мономерных звеньев подтверждено данными элементного анализа и спектрофотометрическим определением дофамина по реакции Паули на волне 520 нм по результату цветной реакции с сульфаниловой кислотой.

Из второй реакции сополимера отгоняют растворитель в вакууме, остаток переосаждают из раствора метанола в безводный эфир. Остаток отделяют центрифугированием и обрабатывают 10 мл 4-6 н.раствора HBr в ледяной уксусной кислоте с добавкой 0,5 мл безводного бензола в течение 24 ч при комнатной температуре.

Целевой продукт трижды переосаждают из метанольного раствора в эфир. Остаток растворяют в воде и лиофизируют, выход 0,32 г.

Молекулярную массу определяют гель-фильтрацией на сефадексе Ж-75 (колонка калибрована стандартами фирмы "Сигма"). Найденная мол.масса составляет 3000-6000.

ИК-спектры вещества характеризуются полосами в области 3400-3200 см^-1, соответствующими валентным колебаниям NH₂-групп, в области 1654 см^-1, соответствующей уретановой группе, в области 1715 см^-1 карбонильной группе, 1602 см^-1 фенольному остатку.

Определение гемодинамического действия синтезированных сополимеров проводились в ЛенНИИ кардиологии Минздрава РСФСР. За 1-2 дня до проведения исследований крысам под общим наркозом вживляли полиэтиленовые катетеры в бедренную артерию и вену для регистрации артериального давления и введения испытуемых веществ.

Эксперименты выполняли в период полного восстановления поведенческой активности животных при отсутствии послеоперационных осложнений.

Исследуемые сополимеры вводили внутривенно в дозах 2-5 мг/кг (в расчете на действующее начало) пяти наркотизированным (уретан, 800 мг/кг, и оксибутират натрия, 800 мг/кг) и девяти ненаркотизированным крысам.

Исходный уровень артериального давления (АД) составляет 100 мм рт.ст. Данные по изменению АД представлены в табл. 2.

Найденное действие предлагаемых сополимеров было подтверждено исследованием влияния сополимеров на сосуды микроциркуляторного русла кроликов. Кроликам давали наркоз (нембутал из расчета 40 мг/кг). Через небольшой разрез передней брюшной стенки извлекали петлю тонкой кишки, которую помещали в термостатируемую ячейку с растворами Рингера-Локка с температурой 38^оС, таким образом, чтобы брызжейка легла на световод, находящийся в центре ячейки.

С помощью телевизионного микроскопа ТМ-2 изображение проектируется на экран видеоконтрольного устройства. Диаметр исследуемых микрососудов измеряют методом расщепления телевизионного изображения. Получаемый аналоговый сигнал обрабатывают на ПЭВМ Искра-226 (60-е исполнение).

Исследуемые сополимеры наносили с помощью микроинъектора непосредственно в микрососуды. В качестве контроля изучали действия дофамина (ДА).

Действие всех соединений исследовали на 48-50 сосудах 3-7 животных. Статистически достоверные данные представлены в табл.3. (оптимальная доза 0,2 мг или 0,2 ˙10^-6 моль/л).

П р и м е р ы 2-3. Получение сополимеров осуществляют по методике примера 1. Свойства приведены в табл. 1, 2 и 3.

Изобретение относится к высокомолекулярным соединениям, конкретно к статистическим сополимерам на основе L-лизина и дофамина, и способам их получения, которые могут быть использованы в биохимической практике в качестве низкотоксичных веществ, обладающих пролонгированным гипотензивным действием. Изобретение позволяет снизить токсичность при сохранении пролонгированного гипотензивного эффекта за счет синтеза статистических сополимеров формулы с мол.м. 2000-6500, где m:n 1:1-1:3, и способа их получения взаимодействием в органическом растворителе N-карбоксиангидрида- Σ-Z-L- -лизина с карбонатом дофамина, взятых в мольном соотношении 1:1 3:1, в присутствии эквимольного карбонату дофамина количества триэтиламина с последующей обработкой продуктов реакции 4,0 6,0 н.раствором HBr в ледяной уксусной кислоте при комнатной температуре в течение суток. Согласно изобретению предлагаемые сополимеры характеризуются ЛД₅₀, равной 37-140 мг/кг, и при дозе 2-5 мг/кг снижают артериальное давление на 21-46% при продолжительности гипотензивного действия 70-240 мин. 2 с.п. ф-лы, 3 табл.

1. Статистические сополимеры формулы

с мол.м. 2000 6500, где m n 1 1 1 3,
в качестве низкотоксичных веществ, обладающих пролонгированным гипотензивным действием. 2. Способ получения статистических сополимеров взаимодействием в ограническом растворителе производного L-лизина с производным дофамина и последующей обработкой продуктов реакции кислотой, отличающийся тем, что с целью снижения токсичности при сохранении пролонгированного гипотензивного эффекта, в качестве исходных реагентов используют N-карбоксиангидрид Σ-Z-L лизина и карбонат дофамина, взятые в мольном соотношении 1 1 31, взаимодействие проводят в присутствии эквимольного карбонату дофамина количества триэтиламина и обработку продуктов реакции осуществляют 4 6 н. раствором НВч в ледяной уксусной кислоте при комнатной температуре в течение суток.