СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПОЛИМЕРОВ Советский патент 1974 года по МПК C08F226/10 C08F8/00 

1

Изобретение относится к получению водорастворимых полимеров с физиологически активными свойствами.

Известен способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров взаимодействием сополимеров N-випилпирролидона с малеииовым ангидридом или кротоновой кислотой, и физиологически активных соединений, например стироидов, в органическом растворителе.

С целью регулирования свойств физиологически активных полимеров предлагается в качестве физиологически активиых соединений использовать белково-пептидиые гормоны - адренокортикотропный и соматропный (АКТГ и СТГ), которые ковалентно присоединяются к Полимерам.

Полученные полимерные гормоны обладают рядом интересных свойств, например пролонгированным действием или сохранением иммунологических свойств при отсутствии гормональной актив ности.

Использование синтетического полимера для реакции с гормоном позволяет широко варьировать величину молекулярного веса, количество присоединенного АКТГ или СТГ и менять природу полимера (гидрофильный или гидрофобный и пр.), что будет влиять на скорость всасывания гормона.

Присоединешю АКТГ к сополимеру N-BHпилпирролидоп-малелновый ангидрид проводится вза11Моде1 С Вием реагентов в органическом растворителе. АКТГ нрисоединяется к полимеру за аминогруппу серина, образующееся полимерное производное гормона уже не обладает биологической активностью.

Прп этом, меняя соотношение взятых в реакцию компонентов, можно избирательно осуществить взаимодействие с определенными группами гормона и нолучать полимерные производные гормонов, не обладающие гормоиальнон активностью, но сохраняющне антигеиные свойства нативного гормона или биологическп активные производные с пролонгированным временем действия.

Полученные полимерные производпые АКТГ и СТГ растворимы в воде. Содержанне белка в них определяют спектрофотометрически, по поглощепию при 278 ммкм с учетом поглощения сонолимера. Локализацию ковалеитных связей в гормонах определяют по методу Грея и Хартли путем проведения реакции данзилнровання с 1-диметнламиноиафталии-5схльфанилхлорндом (ДПС) н последующей двумерной тонкослойной хроматографией на бумаге.

Пример 1. К раствору 1 г сополимера Nвниилпнрролидона (ВП) и кротоновой кислоты (КК) (ВП-КК-95,7 -4,3 мол.% ,20)

в 30 мл сухого диметилформамида (ДМФ) добавляют 1,2 мл сухого триэтиламина и 0,05 мл нзобутилового эфира хлоруголышй кислоты и перемешивают в течение одного часа при охлаждении льдом. К полученному полимерному смешанному ангидриду нри охлаждении добавляют раствор 1 г бычьего АКТГ в 93 мл сухого ДМФ. Реакниоиную смесь перемешивают в течение 3 час при охлаждеиии и оставляют на ночь в холодильнике. Затем отфильтровывают осадок, а фильтрат осаждают диэтиловым эфиром. Продукт очиш.ают переосаждепием из этилового спирта в эфир.

Выделен 1 г продукта, выход 50%. присоединеи к сополимеру за е-амииогрупны лизина и гидроксильную грунпу тирозина. Биологическая активность по сравнению с нативным АКТГ составляет 70%.

Пример 2. По вышеописанной методике из 1 г бычьего АКТГ и 9 г сополимера ВП-КК (состав тот же) получают 8,4 г продукта. Выход 84%. АКТГ присоединен к сополимеру за концевую аминогруппу серина, е-аминогруппы лизина и гидроксильную группу тирозина. Производное на 90% теряет биологическую активиость по сравнению с нативным АКТГ, но антигенные свойства сохраняет такие же, как в исходном белке.

Пример 3. К раствору 1 г сополимера Nвинилпирролидона (ВП) и малеинового ангидрида (МА) (ВП-МА-78-22 мол. %; ц 0,28) в 50 мл сухого ДМФ добавляют раствор 1 г бычьего АКТГ в 90 мл сухого ДМФ. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 час при комнатной температуре и оставляют на ночь в холодильнике. Продукт выделяют путем осаждения диэтиловым эфиром. Осадок растворяют в 3,4 мл 5%-ного охлажденного раствора бикарбоната натрия и высушивают лиофильно. Выделен 1 г продукта выход 50%. АКТГ присоединен к сополимеру за копцевую группу серина. Производное не обладает биологической активностью.

Пример 4. К раствору 0,5 сополимера Nвинилиирролидона и кротоновой кислоты (ВП-КК-95,7--4,3 мол.%; ,20) в 4,5мл сухого диметилсульфоксида добавляют 0,6 мл трнэтиламина и 0,025 мл этилового эфира хлоругольной кислоты. Полученный раствор перемешивают в течение 50 мин при комнатHOii температуре и добавляют 50 мг СТГ человека, растворенного в 0,2 мл 0,1 н. ЫаОП и затем в 5 мл ДМСО. Реакционную смесь

переме1пивают в течение 6 час и оставляют на ночь при комнатной температуре. Затем высаждают в эфир-ацетоновую смесь (1:1) и переосаждают из этилового спирта в диэтиловый эфир. Выделено 0,4 г продукта, выход

72%.

СТГ присоединен к сополимеру за конечную аминогруппу фенилаланина. Продукт сохрапяет биологическую активность и пролонгирует действие гормона. Максимум действия отмечается через 3-4 час но сравнению с действием нативного СТГ через 30 мин.

Предмет изобретения

Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров путем взаимодействия сополимеров N-винилпирролидона с малеиновым ангидридом или кротоновой кислотой и физиологически активного соединения

в органическом растворителе, отличающийся тем, что, с целью регулирования свойств получаемых полимеров, в качестве физиологически активного соединения используют адренокортикотронный или соматропный

гормон.