Способ определения репарационной способности радиопротекторов Советский патент 1991 года по МПК G01N33/483 

Ё

Изобретение относится к радиационной химии и может быть использовано в молекулярной радиобиологии для отбора соединений, способных репарировать углеводную часть ДНК на радикальной стадии от радиационных повреждений, приводящих к разрывам полинуклеотидных цепей. Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа, Цель достигается тем, что в качестве реагента для определения продуктов облучения используют 0,6%-ный раствор 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК), а в качестве компонента ДНК используют моль- 2-дезок- си-Д-рибозу, причем соотношение концент- раций-2-дезокси-Д-рибозыи радиопротектора составляет 1 :(0,005-0,05) соответственно. 1 ил.

Изобретение относится к радиационной химии и может быть использовано в молекулярной радиобиологии для отбора соединений, в том числе радиопротекторов, способных репарировать углеводную часть ДНК на радикальной стадии радиационных повреждений, приводящих к разрывам полинуклеотидных цепей.

Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения репарационной способности радиопроетекторов(т.е. способности восстанавливать первоначальную структуру поврежденной молекулы), включающем облучение растворов компонента ДНК и смеси его с радиопротектором, добавление реагента к облученным растворам для спектрофотометрического определения продуктов облучения и оценку эффекта репарации по уменьшению оптической плотности раствора в присутствии радиопротектора, в качестве продуктов облучения измеряют ТБК-активные продукты, а в качестве компонента ДНК используют моль-дм 32-дезокси-Д-рибозу, причем соотношение концентраций 2-дезоксирибозы и радиопротектора составляет 1:(0,005-0,05) соответственно.

Пример. Для оценки репарационных свойств протектора (цистеина) в отсутствие кислорода водные растворы смесей дезок- сирибозы (ДР) (2 моль/л) и L-цистеина (5 10-1 10 моль/л), насыщенные аргоном или NaO, облучают гамма-квантами Со в дозах 100-200 г.

Анализ продуктов радиолиза ДР проводят следующим образом.

1 мл раствора дезоксирибозы, облученного гамма-квантами Со, в дозах 100-200 г. смешивают с 2 мл раствора тиобарбитуро- вой кислоты (ТЕК)(0,6%, рН 2). Смесь нагреCN

О

со ел

01

го

вают в течение 20 мин на кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры. Определяют оптическую плотность розового пигмента на спектрофотометре при 532 нм относительно контроля - прогретой смеси ТБКс необлученным раствором дезок- сирибозы. Используя молярный коэффициент экстинкции, равный 1,45- 105 л-моль 1- , рассчитывают концентрацию продуктов ра- диолиза ДР и их радиационно-химический выход (G, молекул/100 эВ).

На чертеже приведена зависимость относительного радиационно-химического выхода (G/Go) продукта радиолиза ДР от концентрации цистеина (ЦИС1/2).

С ростом концентрации цистеина выход продуктов радиолиза ДР уменьшается. Из экспериментальных зависимостей определяют концентрацию цистеина (Цис1/2), при которой за счет репарации выход продуктов радиолиза ДР уменьшается в два раза, т.е. АЗР/Ск 0,5.

Предлагаемый способ для реализации требует меньшее количество реактивов, времени, концентрации протектора и, кро-

ме того, имеет более высокую чувствительность, чем известный способ.

Формула изо бретени я

Способ определения репарационной способности радиопротекторов, включающий облучение растворов компонента ДНК и смеси его с радиопротектором, добавление реагента к облученным растворам для спектрофотометрического определения продуктов облучения и оценку эффекта репарации по уменьшению оптической плотности раствора в присутствии радиопротектора, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности способа, в качестве продуктов облучения используют ТБК-актив- ные продукты, а в качестве компонента ДНК используют 2-дезокси-Д-рибозу, причем соотношение концентраций 2-дезокси-Д-рибозы и радиопротектора составляет 1:(0,005-0,05) соответственно.

0,8 1,0