1-АМИНОНАФТАЛИН-5-СУЛЬФАМИДЫ В КАЧЕСТВЕ ДЕТЕКТИРУЕМЫХ ГРУПП ДЛЯ АНАЛИЗА СМЕСЕЙ ПРОТЕАЗ И 1-БЕНЗИЛОКСИКАРБОНИЛАМИНОНАФТАЛИН-5-СУЛЬФАМИДЫ В КАЧЕСТВЕ ПОЛУПРОДУКТОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ 1-АМИНОНАФТАЛИН-5-СУЛЬФАМИДОВ Советский патент 1994 года по МПК C07C311/15 G01N33/53 

Изобретение относится к производным 1-аминонафталин-5-сульфамида, а именно к новым 1-аминонафталин-5-сульфамидам общей формулы
где R = CH₃, C₃H₇ и цикло-C₆H₁₁, которые могут быть использованы в качестве детектируемых групп для анализа
смесей протеаз и к 1-бензилоксикарбониламинонафталин-5-сульфамидам общей формулы
где R = CH₃, C₃H₇ и цикло-C₆H₁₁, которые используют в качестве полупродуктов для получения 1-аминонафталин-5-сульфамидов.

Целью изобретения является изыскание в ряду N-защищенных аминонафталинсульфамидов новых веществ, позволяющих получать из них новые 1-аминонафталин-5-сульфамиды, позволяющие при их использовании в качестве детектируемых групп увеличить количество одновременно анализируемых протеаз и повысить селективность их определения.

П р и м е р 1. 60 г (0,160 моль) 1-карбобензилокси(КБЗ) аминонафталин-5-сульфохлорида добавляют порциями в течение 15 мин к раствору 35 г (0,3 моль) нитрата пропиламина и 35 г соды в 0,6 л воды и 300 мл диоксана, перемешивают 20 мин при 60^оС, добавляют 2 л воды, охлаждают до 4^оС, оставляют на 12 ч, осадок отделяют фильтрованием (86 г воздушно-сухого), растворяют в 300 мл уксусной кислоты при нагревании, при охлаждении получают 57 г кристаллов, маточник разбавляют 1 л воды, отделяют еще 8 г менее чистого вещества, которое еще раз кристаллизуют. Общий выход 63 г (97% ).

Примеры 2 и 3 получения других КБЗ-аминонафталинсульфамидов приведены в табл. 1, в табл. 2 приведены данные по температуре плавления и элементному анализу полученных КБЗ-аминонафталинсульфамидов.

Снятие защитной группы для получения целевых продуктов проводят гидрированием на катализаторе.

П р и м е р 4. 201 мг 1-бензилоксикарбониламинонафталин-5-N-пропилсульфамида растворяют в 10 мл диметилформамида (ДМФ), добавляют 2 мл суспензии катализатора в ДМФ (около 135 мг катализатора) и гидрируют в токе H₂ при перемешивании магнитной мешалкой при 25^оС, контролируют процесс по тонкослойной хроматографии (ТСХ). Через 30 мин исходного не обнаруживают (силуфол, этилацетат-1, гекан-2, детекция по флюоресценции), катализатор фильтруют, промывают на фильтре 2x x0,5 мл ДМФ, фильтрат упаривают в вакууме и сушат над P₂O₅. Получают 131 мг (98% ) хроматографически чистого продукта.

Примеры 5 и 6 получения 1-амино-нафталин-5-сульфамидов приведены в табл. 3, в табл. 4 приведены данные по температуре плавления и элементному анализу полученных соединений.

П р и м е р 7. К раствору 3,5 г карбобензоксиаргинина в 20 мл диметилформамида приливают при -10^оС полученный при -30^оС и выдержанный при 20^оС в течение 40 мин раствор 1 мл SOCl₂ в 10 мл диметилформамида, перемешивают 30 мин при 4^оС, охлаждают до -20^оС, добавляют раствор смеси 1-аминонафталин-5-сульфамидов (АНСА) в 10 мл диметилформамида (по 1 ммоль каждого из пяти или эквимолярные количества каждого из серии, в сумме 5 ммоль), вливают 1,5 мл триэтиламина, перемешивают 4 ч при 4^оС и 12 ч при 20^оС, добавляют триэтиламин до слабощелочной реакции, приливают 150 мл этилацетата и 200 мл гексана, осадок промывают смесью этилацетат-гексан, растворяют в смеси бутанол-вода, верхний слой отделяют, водный экстрагируют бутанолом. Бутанольные вытяжки промывают 5% -ным раствором NaHCO₃, 10% -ным раствором KHSO₄, упаривают досуха, заливают 40 мл 2,5 м HBr в CH₃COOH, через 1,5 ч добавляют 600 мл диэтилового эфира, осадок растворяют в воде, экстрагируют этилацетатом, водный слой подщелачивают NaOH до pH 7,5, экстрагируют бутанолом, упаривают, растворяют в воде до концентрации 300 О. Е. /мл, экстрагируют смесью этилацетат-4, гексан-1, экстракт отбрасывают, водный слой упаривают в вакууме до удаления этилацетата и используют для приготовления субстратных смесей, растворяя аликвоту в буферном растворе (например, 0,05 м трис-HCl + 0,005 м дитиотреита, pH 7,4), разбавляя водой до концентрации 7 О. Е. /мл, добавляют один из не использованных для приготовления субстратной смеси АНСА в качестве внутреннего стандарта до концентрации 0,1 О. Е. /мл, аликвоту 0,5 мл помещают в кювету спектрофотометра, термостатируют, добавляют 10 мкл исследуемого фермента, регистрируют изменение поглощения при 360 нм во времени, по возрастании поглощения вдвое от первоначального останавливают реакцию добавлением, например, ингибитора протеаз данного класса, смесь экстрагируют 0,5 мл этилацетата, экстракт упаривают, остаток растворяют в 30 мкл 38% -ного ацетонитрила с добавкой 0,1 м ацетата аммония, анализируют ВЭЖХ с элюацией тем же раствором, интегрированием пиков определяют количества образовавшихся АНСА. Колонка с 18 x20 4,6 мм, 40, 1 мл/мин, УФ-детектор 255 нм. При определении относительных величин используют высоты пиков при графической регистрации хроматограммы.

Сравнение индексов предпочтительно для папаина (П) и лейцинаминопептидазы (микросомной SIGMA) с известными АНСА: для , для , отношение 0,87; с новыми АНСА для
ПР_N-/P_NM = 2,60, для ЛР_N-/P_NM = 0,25, отношение 10,4 (резкое отличие от 1 в срав нении с незначительным в первом случае).

Индексы для протеазы STR. CAESPITOSUS (SIGMA). С известными АНСА P/ P= 1,0 с новыми АНСА P/ P= 6,0 (при переходе к близкому по структуре соединению резкое улучшение кинематических констант). Таким образом, новые полупродукты N-защищенные аминонафталинсульфамиды позволяют получать новые 1-аминонафталин-5-сульфамиды, которые при их использовании в качестве детектируемых групп позволяют увеличить количество одновременно анализируемых протеаз и повысить селективность их определения благодаря большей величине индексов предпочтительности по сравнению с известными. (56) Авторское свидетельство СССР N 1419108, кл. C 07 C 143/80, 1986.

Изобретение касается замещенных сульфамидов, в частности 1-аминонафталин-5-сульфамидам общей ф-лы где CH₃, C₃H₇ или циклогексил, которые могут быть использованы в качестве детектируемых групп для анализа смесей протеаз и которые могут быть получены из полупродуктов ф-лы где R - см. выше. Цель изобретения - создание новых полупродуктов для синтеза веществ указанного назначения. Синтез полупродуктов ведут реакцией 1-карбобензоксиаминонафталин-5-сульфохлорида и нитрата алкиламина в присутствии соды в водно-диоксановой среде при перемешивании и 60 С. Выход, % , т. пл. , С, брутто ф-ла: а)97, 153 - 154, C₁₉H₁₈N₂O₄S, б)98, 146 - 147, C₂₁H₂₂N₂O₄S, в)93, 165 - 167, C₂₄H₂₆N₂O₄S. Получение целевых веществ ведут гидрированием 1-бензилоксикарбониламинонафталин-S-n-алкилсульфамида на Pd/C при 25С водородом при перемешивании с контролированием процесса по тонкослойной хроматографии. Процесс ведут в среде диметилформамида. Выход, % , т. пл. , С, брутто ф-ла; а)98, 200, C₁₁H₁₂N₂O₂S, б)50, 185, C₁₃H₁₀N₂O₂S, в)99, 201, C₁₆H₂₀N₂O₂S. Эти новые вещества позволяют увеличить количество одновременно анализируемых протеаз и повысить селективность их определения. 4 табл.

1. 1-Аминонафталин-5-сульфамиды общей формулы

где R - CH₃, н-C₃H₇, цикло-C₆H₁₁,
в качестве детектируемых групп для анализа смесей протеаз. 2. 1-Бензилоксикарбониламинонафталин-5-сульфамиды общей формулы

где R - CH₃, н - C₃H₇, цикло-C₆H₁₁,
в качестве полупродуктов для получения 1-аминонафталин-5-сульфамидов.